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牦牛源金黄色葡萄球菌的分离鉴定及生物学特性研究

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中国人兽共患病学报 2024年第7期40卷 662-669页

作者：马弘财秦浩峰曾江勇金美多吉王冬经元振杰西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所拉萨850009 西藏班戈县农牧综合服务中心班戈852500 西藏安多县农牧业科学技术服务站安多853400

目的了解拉萨市和那曲市部分地区牦牛源金黄色葡萄球菌的致病性、毒力基因和耐药基因的携带情况及耐药性,为拉萨市和那曲市牦牛金黄色葡萄球菌感染治疗提供参考。方法从55份牦牛鼻拭子样品中进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定,并采用PCR法... 详细信息

目的了解拉萨市和那曲市部分地区牦牛源金黄色葡萄球菌的致病性、毒力基因和耐药基因的携带情况及耐药性,为拉萨市和那曲市牦牛金黄色葡萄球菌感染治疗提供参考。方法从55份牦牛鼻拭子样品中进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定,并采用PCR法、人工感染小鼠及K-B药敏纸片法对所分离的金黄色葡萄球菌开展毒力基因和耐药基因的携带情况、致病性和药物敏感性检测。结果55份牦牛鼻拭子样品中分离到7株金黄色葡萄球菌,分离率为12.73%,分离菌株对小鼠均具有致病性,致死率60%以上,7株金黄色葡萄球菌携带3种耐药基因(tetM、tetK和mecA)和6种毒力基因(seb、sec、clfA、hla、hlb和nuc),3种耐药基因检出率为100%,6种毒力基因的检出率在83.33%~100%,分离菌株对青霉素、氨苄西林和复方新诺明的耐药率达85.71%~100%,且对四环素和头孢他啶的耐药率均为28.57%。结论拉萨市和那曲市的牦牛存在金黄色葡萄球菌的感染,且感染菌株携带多种耐药基因和毒力基因,并具有较强致病性,对大部分抗菌药敏感。

关键词：金黄色葡萄球菌分离鉴定毒力基因和耐药基因药敏试验

基于Mhp336蛋白的猪肺炎支原体ELISA抗体检测方法的建立

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生物工程学报 2024年第7期40卷 2322-2332页

作者：淦雨洁董青霜张阳何佳蔚王冬经冯志新王佳周可心丁红雷西南大学动物医学院动物支原体学实验室重庆400715 西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所西藏拉萨850009 江苏省农业科学院兽医研究所江苏南京210014

本研究拟建立一种高特异性的猪肺炎支原体酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)抗体检测方法。首先,构建重组菌大肠杆菌BL21(DE3)-p ET-32a(+)-mhp336,诱导重组蛋白Mhp336表达并纯化,获得的纯化蛋白作为包被抗原... 详细信息

本研究拟建立一种高特异性的猪肺炎支原体酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)抗体检测方法。首先,构建重组菌大肠杆菌BL21(DE3)-p ET-32a(+)-mhp336,诱导重组蛋白Mhp336表达并纯化,获得的纯化蛋白作为包被抗原;然后,确定ELISA方法的抗原包被浓度、封闭液和封闭时间、血清和二抗稀释比例和孵育时间、显色时间和判定标准;之后进行重复性试验、与猪的其他主要病原抗血清的交叉反应性和确定血清最大稀释倍数;最后,用建立的方法检测226份猪血清样品,并与商品化猪肺炎支原体ELISA抗体检测试剂盒和猪肺炎支原体ELISA恢复期血清抗体检测方法进行比较,确定检测方法的灵敏性和特异性。最终确定Mhp336纯化蛋白的最佳包被浓度为0.05μg/m L,封闭液为含2.5%脱脂奶粉的PBS,封闭时间为1 h,血清稀释比例为1:500,孵育时间为0.5 h,二抗稀释比例为1:10000,孵育时间为1 h,显色时间为5 min。检测方法的cut off值为0.332。试剂盒的批内和批间变异系数均低于7%。猪血清样品的检测结果表明,本研究建立的检测方法的灵敏性和特异性均优于商品化猪肺炎支原体ELISA抗体检测试剂盒和猪肺炎支原体ELISA恢复期血清抗体检测方法。本研究成功建立了基于Mhp336蛋白的猪肺炎支原体ELISA抗体检测方法,灵敏性和特异性均较好,为猪场猪支原体肺炎的净化提供了检测方法。

关键词：猪肺炎支原体原核表达灵敏性特异性临床样品

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西藏自治区动物疫病防控工作的思考和建议

西藏农业科技 2024年第3期46卷 104-107页

作者：苏中华王冬经林少卿西藏自治区动物疫病预防控制中心西藏拉萨850000 西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所西藏拉萨850009

为切实加强西藏自治区动物疫病防控工作,结合当前西藏自治区动物疫病防控工作中存在的一些问题进行思考,提出强化西藏自治区动物疫病防控工作的建议,以期为推动西藏自治区动物疫病防控事业高质量发展提供参考。

关键词：动物疫病防控建议

牦牛源A型产气荚膜梭菌的分离鉴定及生物学特性研究

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中国畜牧兽医 2024年第1期51卷 229-241页

作者：王冬经吴金措姆曾江勇西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所拉萨850009 省部共建青稞和牦牛种质资源与遗传改良国家重点实验室拉萨850009

【目的】2023年4月至2023年5月,西藏拉萨市多地出现牦牛严重腹泻、便血甚至死亡的现象。试验旨在确定牦牛腹泻的病原菌并研究其生物学特性,以期为该地区牦牛腹泻病的防治提供参考。【方法】采集新鲜牦牛腹泻粪便样品进行厌氧培养,通过... 详细信息

【目的】2023年4月至2023年5月,西藏拉萨市多地出现牦牛严重腹泻、便血甚至死亡的现象。试验旨在确定牦牛腹泻的病原菌并研究其生物学特性,以期为该地区牦牛腹泻病的防治提供参考。【方法】采集新鲜牦牛腹泻粪便样品进行厌氧培养,通过培养特性及染色镜检进行初步鉴定;对可疑阳性菌株进行生化特性、多重PCR毒素基因分型及cpe、netB、cpb2毒素鉴定,并进行cpa、cpb2、16S rRNA基因的遗传进化分析、部分分离株生长曲线测定及动物致病性试验;采用K-B法测定分离株的体外药物敏感性,统计不同分离株的多重耐药结果。【结果】从样品中分离纯化得到8株分离菌,在厌氧培养基中生长旺盛,在TSC培养基、5%脱纤维绵羊血平板、卵黄琼脂培养基上均呈现与产气荚膜梭菌相似的典型菌落,革兰染色为紫色大杆菌,初步判定为产气荚膜梭菌,命名为XZ-1~XZ-8。分离株生化检测结果与产气荚膜梭菌相符;分离株均携带cpa和cpb2基因,为A型产气荚膜梭菌;16S rRNA基因分析结果显示,8株分离株与产气荚膜梭菌参考株的相似性为97.3%~100%,在系统进化树中处于同一分支,而与屎肠球菌、大肠杆菌参考株处于不同分支;分离株cpa和cpb2基因存在一定的变异性。生长曲线显示,3株分离株(XZ-1、XZ-4、XZ-7)生长规律基本一致,其中0~4 h为迟缓期,4~8 h为对数期,8~22 h为稳定期,22 h后开始进入衰亡期。动物致病性试验结果显示,分离株对昆明小鼠具有较强的致病性。分离株对苯唑西林、红霉素、氯霉素、氧氟沙星、米诺环素、头孢哌酮、利福平及罗红霉素敏感,对青霉素、哌拉西林、羧苄西林、麦迪霉素、头孢曲松等22种药物均存在不同程度的耐药性,存在多重耐药性,其中XZ-7株耐药数量多达11种,6重以上耐药的菌株占75.0%。【结论】本研究成功从拉萨严重腹泻、血便牦牛粪样中分离出8株A型产气荚膜梭菌,分离株对小鼠具有较强的致病性,对青霉素、哌拉西林、羧苄西林等药物存在不同程度的耐药性。研究结果为该地区牦牛腹泻病防控提供了参考依据。

关键词：牦牛产气荚膜梭菌分离鉴定生长曲线动物致病性耐药性

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一株西藏牦牛源格氏乳球菌的分离鉴定

西藏农业科技 2024年第1期46卷 40-43页

作者：苏中华王冬经陈建春央珍益西旺扎格桑卓玛宁立宏曾江勇西藏自治区动物疫病预防控制中心西藏拉萨850000 西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所西藏拉萨850009 西藏昌都帽卡若区畜牧站西藏昌都854000 西藏山南市浪卡子县伦布学乡农牧综合服务中心西藏山南851100

为了弄清引起西藏牦牛乳腺炎的病原,采集患有乳腺炎的牦牛乳汁样品进行细菌培养,将分离到的1株细菌命名为XZ-1并进行染色镜检和16S rRNA基因扩增、比对,从GenBank上下载相似性最高细菌的16S rRNA基因,采用DNA Star软件进行同源性和遗传... 详细信息

为了弄清引起西藏牦牛乳腺炎的病原,采集患有乳腺炎的牦牛乳汁样品进行细菌培养,将分离到的1株细菌命名为XZ-1并进行染色镜检和16S rRNA基因扩增、比对,从GenBank上下载相似性最高细菌的16S rRNA基因,采用DNA Star软件进行同源性和遗传进化分析。结果显示,分离株细菌革兰氏染色,镜检为阳性,散在或成双或短链排列的球状菌;16S rRNA基因比对表明,与GenBank中格氏乳球菌的相似性达到99.43%~99.93%,与格氏乳球菌参考株的同源性为99.5%~100%;遗传进化分析表明,西藏分离株XZ-1与格氏乳球菌参考株形成一个大的分支,且与格氏乳球菌SCH和MS4-2参考株亲缘关系较近,聚为一簇。研究表明,该分离株为格氏乳球菌,是引起乳腺炎的病原之一,为今后开展牦牛乳腺炎病原及格氏乳球菌的研究提供参考依据。

关键词：西藏牦牛格氏乳球菌分离鉴定

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牦牛源地衣芽孢杆菌的分离鉴定

西藏农业科技 2023年第3期45卷 70-74页

作者：王冬经西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所/省部共建青稞和牦牛种质资源与遗传改良国家重点实验室西藏拉萨850000

为分离西藏牦牛源地衣芽孢杆菌并研究其生物学特性,为今后开发相关益生菌及其制剂奠定基础,采集西藏牦牛粪便,从粪便中分离培养、纯化病原菌,通过染色镜检、生化试验、16S rRNA PCR扩增、同源性分析、进化树构建等对分离株进行鉴定且对... 详细信息

为分离西藏牦牛源地衣芽孢杆菌并研究其生物学特性,为今后开发相关益生菌及其制剂奠定基础,采集西藏牦牛粪便,从粪便中分离培养、纯化病原菌,通过染色镜检、生化试验、16S rRNA PCR扩增、同源性分析、进化树构建等对分离株进行鉴定且对分离株进行耐药性试验。结果从样品中分离到3株地衣芽孢杆菌,革兰氏阳性杆菌,分别命名为XZ-1,XZ-2,XZ-3。3株分离株生化检测结果一致:可分解甘露醇、淀粉、阿拉伯糖,可还原硝酸盐,V-P试验呈阳性,不能水解明胶,不能产生红色吲哚。分离株16S rRNA PCR扩增产物电泳结果与预期结果一致,长度为1 500 bp左右。3株分离株之间同源性为96.0%~99.9%,与地衣芽孢杆菌分离株的同源性为98.3%~100%;3株分离株与地衣芽孢杆菌处于同一支,而与链球菌其他种属芽孢杆菌处于不同分支。分离株XZ-1对青霉素、氨苄西林耐药,对林可霉素中度敏感,对头孢曲松、四环素、红霉素、恩诺沙星、氯霉素、环丙沙星、阿莫西林敏感;分离株XZ-2对青霉素、氨苄西林、四环素、林可霉素耐药,对氯霉素中度敏感,对头孢曲松、红霉素、恩诺沙星、环丙沙星、阿莫西林敏感;分离株XZ-3对青霉素耐药,对氨苄西林、对林可霉素中度敏感,对头孢曲松、四环素、红霉素、恩诺沙星、氯霉素、环丙沙星、阿莫西林敏感。

关键词：牦牛地衣芽孢杆菌分离鉴定

西藏牦牛牛支原体的分离鉴定及其生长特性、耐药性分析

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中国农业大学学报 2020年第12期25卷 67-75页

作者：王冬经徐业芬索朗斯珠严明帅赵霞玲朱勇牛家强西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 西藏农牧学院西藏高原动物疫病研究自治区高校重点实验室西藏林芝860000 西藏农牧科学院畜牧兽医研究所拉萨850000

为确定引起西藏牦牛常发多发肺炎的细菌病原体,采集145份西藏牦牛鼻腔粘液,通过病原分离培养、菌落形态观察、生化试验和PCR鉴定等方法进行细菌检测;通过OD630和pH变化对分离株进行生长曲线测定;采用K-B纸片法进行药物敏感性试验。结果... 详细信息

为确定引起西藏牦牛常发多发肺炎的细菌病原体,采集145份西藏牦牛鼻腔粘液,通过病原分离培养、菌落形态观察、生化试验和PCR鉴定等方法进行细菌检测;通过OD630和pH变化对分离株进行生长曲线测定;采用K-B纸片法进行药物敏感性试验。结果显示:从145份牦牛鼻腔粘液中分离得到10株牛支原体;分离株菌落形态和生化试验结果均符合牛支原体的生物学特性;通过PCR分别扩增得到238bp的uvrC特异性基因与1500bp16SrRNA基因。10株分离株间的uvrC特异性基因和16SrRNA基因序列同源性较高,均与国际标准株PG45有高度同源性,uvrC特异性基因序列和16SrRNA基因序列与国际标准株PG45的同源性分别为98.4%~100%和99.1%~99.9%。生长曲线测定表明,分离株在PPLO培养基中培养24h内为迟缓期,培养42h后开始进入稳定期,78h后开始进入衰亡期;3个分离株培养物的平均pH随着培养时间延长不断降低,其中24~42h期间pH下降最快,随后下降速度减慢,至78h后几乎不再变化。药物敏感性试验表明,分离株对大环内酯类、氨基糖苷类和林可胺类等药物均存在不同程度的耐药,但对强力霉素和卡那霉素敏感或中度敏感。

关键词：西藏牦牛牛支原体分离鉴定生长曲线耐药性

西藏地区牦牛传染性鼻气管炎流行病学调查与分析

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黑龙江畜牧兽医 2019年第20期 76-79页

作者：苏中华孔新平王冬经贡嘎常攀参木友索朗斯珠西藏农牧学院动物科学学院西藏林芝860000 西藏自治区动物疫病预防控制中心拉萨850000 西藏自治区农牧科学院草业研究所拉萨850000

为了解西藏七个地区牦牛传染性鼻气管炎(IBR)的流行和分布情况,试验采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对来自西藏七个地区的300份牦牛血清样品进行IBR抗体、抗原检测,并用SPSS 19.0软件对七个地区IBR抗体、抗原阳性率进行显著性分析。结果表... 详细信息

为了解西藏七个地区牦牛传染性鼻气管炎(IBR)的流行和分布情况,试验采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对来自西藏七个地区的300份牦牛血清样品进行IBR抗体、抗原检测,并用SPSS 19.0软件对七个地区IBR抗体、抗原阳性率进行显著性分析。结果表明:西藏七个地区牦牛IBR平均抗体阳性率为11.00%(33/300),其中日喀则市和林芝市最高,均为17.78%(8/45);其次是拉萨市,为13.33%(4/30);那曲市为11.11%(5/45)、阿里地区为8.89%(4/45)、昌都市为2.22%(1/45);山南市最低,为0(0/45)。而牦牛IBR平均抗原阳性率为10.00%(30/300),其中日喀则市最高,为20.00%(9/45);其次是拉萨市,为16.67%(5/30);林芝市为15.56%(7/45)、那曲市为8.89%(4/45)、阿里地区为4.44%(2/45)、昌都市为4.44%(2/45)、山南市为2.22%(1/45)。日喀则市和林芝市IBR抗体阳性率与昌都市、山南市差异显著(P0.05)。日喀则市IBR血清抗原阳性率与阿里地区、昌都市和山南市差异显著(P经感染西藏牦牛群,且在流行和分布上存在一定的差异,其中日喀则市、林芝市、拉萨市相比其他地区较为严重。

关键词：西藏牦牛牛传染性鼻气管炎 ELISA 抗体抗原

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人工智能在城市自然灾害应急管理中的探索

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