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作者：王冠熙江苏省血吸虫病防治研究所

学位级别：硕士

白纹伊蚊(Aedes albopictus)是全球排名前百的侵袭性物种之一,在我国分布广泛,是登革热、黄热病、寨卡病毒病等蚊媒传播疾病的主要传播媒介。媒介控制是预防或减少蚊媒疾病传播最有效的手段之一,以杀虫剂为主的化学控制措施是目前主要... 详细信息

白纹伊蚊(Aedes albopictus)是全球排名前百的侵袭性物种之一,在我国分布广泛,是登革热、黄热病、寨卡病毒病等蚊媒传播疾病的主要传播媒介。媒介控制是预防或减少蚊媒疾病传播最有效的手段之一,以杀虫剂为主的化学控制措施是目前主要使用的方式之一,其中以拟除虫菊酯类杀虫剂的应用最为广泛。但由于此类杀虫剂的长期广泛使用,使白纹伊蚊长期处于选择压力之下,白纹伊蚊对此类杀虫剂的抗药性也随之增强。为了解江苏省白纹伊蚊对拟除虫菊酯类杀虫剂-溴氰菊酯的抗药性水平和抗性机制,本研究分别收集了徐州市睢宁县(SN)、淮安市淮阴区(HY)、无锡市宜兴市(YX)等3个不同地区的现场白纹伊蚊,并对其开展杀虫剂抗性水平的测定及其机制研究。本研究主要分三个部分:一、白纹伊蚊溴氰菊酯抗性测定及与kdr突变相关性分析为了解江苏省白纹伊蚊的抗性水平、击倒抗性(knockdown resistance,kdr)突变情况以及与抗性的相关性,通过实验室敏感品系确定白纹伊蚊对溴氰菊酯的CDC生物瓶法诊断剂量、诊断时间分别为4μg/bottle、30min。在此基础上开展的抗性测定结果显示,SN校正平均死亡率为28.2%,HY平均死亡率为64.4%,YX平均死亡率为56.3%,三地白纹伊蚊种群均表现出了对溴氰菊酯的抗药性。对三地白纹伊蚊电压门控钠离子通道(VGSC)基因进行测序,结果发现kdr基因1532和1534位点均存在突变。其中,1532位点共存在两种等位基因,分别为野生型ATC(279/298,93.6%)和突变型ACC(19/298,6.4%);3种基因型,分别为野生型纯合子I/I(133/149,89.3%)、野生型/突变型杂合子I/T(13/149,8.7%)和突变型纯合子T/T(3/149,2.0%)。1534位点共有4种等位基因,分别为野生型TTC(275/298,92.3%)、突变型TCC(5/298,1.7%)、TTA(14/298,4.7%)和TTG(4/298,1.3%);4种基因型分别为野生型纯合子F/F(128/149,85.9%)、突变型/野生型杂合子F/S(5/149,3.4%)和F/L(14/149,9.4%),突变型纯合子L/L(2/149,1.3%)。检验结果显示,三地白纹伊蚊溴氰菊酯抗性表型与kdr基因1532、1534突变位点基因型的相关性未发现统计学差异(P>0.05)。可见,现场白纹伊蚊kdr基因1532和1534突变位点突变频率均较低,未发现抗性表型与kdr基因1532位点和1534位点突变的相关性,提示可能存在其他抗性机制参与白纹伊蚊溴氰菊酯抗性的产生。二、现场白纹伊蚊代谢酶活性分析及增效剂协同作用研究代谢酶活性实验发现,现场白纹伊蚊种群的多功能氧化酶(MFO)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)活性较敏感品系有不同程度的升高,现场白纹伊蚊MFO和GST两种酶活性分别是敏感品系白纹伊蚊的1.31、1.13倍。为了进一步研究代谢抗性与现场种群抗性机制的相关性,选取分别作用于MFO和GST的胡椒基丁醚(PBO)和马来酸二乙酯(DM)两种增效剂,现场白纹伊蚊种群在PBO和DM两种增效剂的协同作用下,与诊断剂量溴氰菊酯接触15分钟后,死亡率从23.3%分别升至47.5%和54.3%,表明PBO和DM可以增强溴氰菊酯对现场白纹伊蚊种群的毒性作用,提示现场白纹伊蚊抗性种群对溴氰菊酯的抗性可能与MFO和GST活性升高有关。三、溴氰菊酯抗性白纹伊蚊转录组(RNA-seq)分析运用转录组测序(RNA-seq)对白纹伊蚊现场抗性种群和实验室敏感品系间差异表达基因(DEG)进行分析。结果显示,现场抗性低剂量溴氰菊酯处理组(SNL)和实验室敏感品系(LB)相比,共鉴定出3422个DEG,其中表达上调有1837个,表达下调有1585个;现场抗性高剂量溴氰菊酯处理组(SNH)和LB相比,共鉴定出3364个DEG,其中表达上调有1861个,表达下调有1503个;SNH和SNL相比,共鉴定出303个DEG,其中表达上调有174个,表达下调有129个。三组两两比较后发现均表达上调的DEG有14个,均表达下调的DEG有8个。不同组别差异表达基因GO分类和KEGG富集分析结果显示,和敏感蚊相比,“昆虫激素的生物合成”“萜类骨架的生物合成”、“嘧啶代谢”等代谢通路可能和现场抗性种群的抗性机制有关;现场抗性蚊不同溴氰菊酯处理浓度组间的差异可能与“单加氧酶活性”等功能和“谷胱甘肽代谢”、“药物代谢-细胞色素P450”、“细胞色素P450对异生物素的代谢”等代谢通路有关;现场抗性蚊不同溴氰菊酯处理浓度组和敏感蚊各组间的差异可能与“胆固醇代谢”通路有关。

关键词：白纹伊蚊溴氰菊酯击倒抗性代谢抗性转录组测序

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作者：王冠熙

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江苏省白纹伊蚊对溴氰菊酯抗药性及击倒抗性突变分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2022年

作者：王冠熙李雅姝李月月曹园园杨蒙蒙张梅花吴竞瑶梁成李菊林周华云唐建霞朱国鼎江苏省血吸虫病防治研究所、世界卫生组织消除疟疾研究与培训合作中心、国家卫生健康委员会寄生虫病预防与控制技术重点实验室、江苏寄生虫与媒介控制技术重点实验室

目的了解江苏省白纹伊蚊对溴氰菊酯的抗性,探究与击倒抗性（kdr）突变的关联,为白纹伊蚊科学防治提供理论依据。方法用美国疾病预防控制中心生物瓶法制备溴氰菊酯含量为1、2、4、6、8μg/瓶的测试瓶和不含溴氰菊酯的对照瓶,每瓶放10～2...

目的了解江苏省白纹伊蚊对溴氰菊酯的抗性,探究与击倒抗性（kdr）突变的关联,为白纹伊蚊科学防治提供理论依据。方法用美国疾病预防控制中心生物瓶法制备溴氰菊酯含量为1、2、4、6、8μg/瓶的测试瓶和不含溴氰菊酯的对照瓶,每瓶放10～25只实验室培养的敏感白纹伊蚊,确定诊断剂量。2020年8—9月,分别从徐州市睢宁县、淮安市淮阴区和无锡市宜兴市采集白纹伊蚊的幼虫或蛹,培养至子一代（F1代）,取10～25只F1代雌蚊置含诊断剂量溴氰菊酯的测试瓶或对照瓶中充分接触30 min,计算白纹伊蚊的死亡率,评价其抗性水平。提取抗性测试后蚊虫的DNA,PCR扩增电压门控钠离子通道（VGSC）跨膜结构域Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ片段并测序,用Bioedit、Seqman等软件分析kdr突变,统计kdr基因型和突变频率,抗性表型与敏感表型蚊虫kdr突变率的差异使用χ;检验。结果用白纹伊蚊实验室敏感品系确定的溴氰菊酯诊断剂量为4μg/瓶。从睢宁县、淮阴区和宜兴市共采集到白纹伊蚊149只。睢宁县的白纹伊蚊在诊断剂量下的校正平均死亡率为（28.2±1.4）%,淮阴区和宜兴市的平均死亡率分别为（64.4±5.5）%、（56.3±17.71）%,3个县（市、区）白的纹伊蚊对溴氰菊酯均已产生抗药性。共获得DNA序列447条,测序结果显示,3个县（市、区）白纹伊蚊VGSC结构域Ⅳ的基因编码区1532和1534位点均存在kdr突变,其中1532位点共有2种等位基因,分别为野生型ATC/I （279/298,93.6%）和突变型ACC/T （19/298,6.4%）;组成3种基因型,分别为野生型纯合子I/I （133/149,89.3%）、野生型/突变型杂合子I/T （13/149,8.7%）和突变型纯合子T/T （3/149,2.0%）。1534位点共有4种等位基因,分别为野生型TTC/F （275/298,92.3%）和突变型TCC/S （5/298,1.7%）、TTA/L （14/298,4.7%）和TTG/L （4/298,1.3%）;组成4种基因型,分别为野生型纯合子F/F （128/149,85.9%）、突变型/野生型杂合子F/S （5/149,3.4%）和F/L （14/149,9.4%）,突变型纯合子L/L （2/149,1.3%）。72只抗性表型的成蚊中,1532、1534位点野生型分别占87.5%（63/72）和86.1%（62/72）,kdr突变型分别占12.5%（9/72）和13.9%（10/72）;77只敏感成蚊中,1532和1534位点野生型分别占90.9%（70/77）和85.7%（66/77）.kdr突变型分别占9.2%（7/77）和14.3%（11/77）。抗性表型和敏感表型个体中,1532和1534位点kdr突变基因型间的差异无统计学意义（χ;=0.168、4.111,P> 0.05）。结论江苏省睢宁县、淮阴区和宜兴市的白纹伊蚊对溴氰菊酯均产生抗药性,白纹伊蚊1532和1534位点kdr突变频率均较低,白纹伊蚊对溴氰菊酯的抗性表型与kdr突变无相关性。

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中华按蚊幼虫溴氰菊酯暴露后应急代谢变化研究

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中国血吸虫病防治杂志 2021年第4期33卷 387-395页

作者：李雅姝唐建霞李菊林梁成张梅花吴竞瑶王冠熙朱国鼎曹俊江苏省血吸虫病防治研究所、世界卫生组织消除疟疾研究与培训合作中心、国家卫生健康委员会寄生虫病预防与控制技术重点实验室、江苏寄生虫与媒介控制技术重点实验室无锡214064

目的分析实验室溴氰菊酯敏感品系中华按蚊幼虫暴露溴氰菊酯后机体内小分子代谢物变化,为研究中华按蚊溴氰菊酯杀虫剂代谢通路、筛选代谢标志物提供科学依据。方法测定实验室溴氰菊酯敏感品系中华按蚊幼虫溴氰菊酯半数致死浓度(LC_(50))... 详细信息

目的分析实验室溴氰菊酯敏感品系中华按蚊幼虫暴露溴氰菊酯后机体内小分子代谢物变化,为研究中华按蚊溴氰菊酯杀虫剂代谢通路、筛选代谢标志物提供科学依据。方法测定实验室溴氰菊酯敏感品系中华按蚊幼虫溴氰菊酯半数致死浓度(LC_(50))和75%致死浓度(LC_(75))浓度,分别暴露于LC_(50)、LC_(75)浓度下30 min和24h,运用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术检测幼虫代谢物种类和含量,分析代谢物变化趋势。结果溴氰菊酯对中华按蚊溴氰菊酯敏感品系幼虫的LC50和LC75值分别为4.36×10^(-3)μg/mL和1.12×10^(-2)μg/mL。中华按蚊溴氰菊酯敏感品系幼虫暴露于溴氰菊酯30 min后,LC_(50)、LC_(75)两浓度组差异代谢物主要集中于有机氧化合物、羧酸及其衍生物、脂肪酰基、嘧啶核苷酸等,其中葡萄糖水平在溴氰菊酯接触组中浓度降低;暴露24 h后,差异代谢物主要集中于有机氧化合物、羧酸及其衍生物、脂肪族酰基、嘌呤核苷酸等,其中葡萄糖水平在溴氰菊酯接触组中浓度升高。结论中华按蚊溴氰菊酯敏感品系幼虫暴露于溴氰菊酯后,代谢产物变化提示糖类和羧酸及其衍生物、脂肪族酰基类、氨基酸及其衍生物可能在溴氰菊酯代谢过程中发挥重要作用。

关键词：中华按蚊幼虫溴氰菊酯代谢

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寓创造教育于化学教学之中

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临沂师专学报 1998年第6期32卷 45-47页

作者：章国贞王冠熙山东师范大学化学系临沂市招生办公室

在科学知识飞速发展的今天，新学科、新知识不断涌现，知识更新的周期不断缩短，社会需要大批具有创造才能的人才，而人才源自于教育．因此，我们应适应形势发展的要求，在教学中注重创造教育，而化学是一门以实验为基础，广泛应用于国... 详细信息

在科学知识飞速发展的今天，新学科、新知识不断涌现，知识更新的周期不断缩短，社会需要大批具有创造才能的人才，而人才源自于教育．因此，我们应适应形势发展的要求，在教学中注重创造教育，而化学是一门以实验为基础，广泛应用于国民生产各个领域的自然科学，因此在化...

关键词：创造教育化学教学创造思维创造型人才创造性思维实验教学发展创造力培养学生教学内容元素周期律

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2018-2019年江苏省库蚊监测结果分析

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中国血吸虫病防治杂志 2021年第5期33卷 510-512,522页

作者：李菊林唐建霞吴竞瑶杨蒙蒙梁成张梅花李雅姝王冠熙周华云朱国鼎曹俊 WHO消除疟疾研究与培训合作中心、国家卫生健康委员会寄生虫病预防与控制技术重点实验室、江苏省寄生虫与媒介控制技术重点实验室、江苏省血吸虫病防治研究所无锡214064

目的了解2018-2019年江苏省库蚊种群分布、密度变化及淡色库蚊对杀虫剂的抗性水平。方法 2018-2019年6-10月,选择江苏省苏南、苏北和苏中6个县(市、区)作为监测点,采用全通宵诱蚊灯法调查库蚊种群密度。采集苏中地区南通市海安市和盐城... 详细信息

目的了解2018-2019年江苏省库蚊种群分布、密度变化及淡色库蚊对杀虫剂的抗性水平。方法 2018-2019年6-10月,选择江苏省苏南、苏北和苏中6个县(市、区)作为监测点,采用全通宵诱蚊灯法调查库蚊种群密度。采集苏中地区南通市海安市和盐城市盐都区淡色库蚊,采用WHO推荐的接触筒强迫接触法测定子1代雌性淡色库蚊对二氯二苯三氯乙烷(dichlorodiphenyltrichloroethane, DDT)、马拉硫磷、残杀威、高效氯氰菊酯和溴氰菊酯5种杀虫剂的敏感性。结果 2018-2019年在江苏省6个监测点累计库蚊104 423只,蚊种以致倦库蚊、淡色库蚊和三带喙库蚊为主,分别占49.11%、28.38%和21.04%;库蚊种群密度从6月初开始升高,7月左右达到峰值,10月下旬趋近于低值。海安市淡色库蚊对马拉硫磷抗性级别为敏感,盐都区淡色库蚊对马拉硫磷抗性级别为初步抗性;盐都区、海安市淡色库蚊对残杀威抗性级别均为初步抗性;盐都区、海安市淡色库蚊对DDT、高效氯氰菊酯、溴氰菊酯抗性级别均为抗性。结论江苏省库蚊种群以致倦库蚊、淡色库蚊、三带喙库蚊为主;苏中地区淡色库蚊已对DDT、高效氯氰菊酯和溴氰菊酯产生抗性。

关键词：库蚊种群密度杀虫剂抗性江苏省

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江苏省白纹伊蚊对溴氰菊酯抗性及击倒抗性突变分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2022年第4期40卷 468-474,480页

作者：王冠熙李雅姝李月月曹园园杨蒙蒙张梅花吴竞瑶梁成李菊林周华云唐建霞朱国鼎江苏省血吸虫病防治研究所、世界卫生组织消除疟疾研究与培训合作中心、国家卫生健康委员会寄生虫病预防与控制技术重点实验室、江苏寄生虫与媒介控制技术重点实验室无锡214064

目的了解江苏省白纹伊蚊对溴氰菊酯的抗性,探究其与击倒抗性(kdr)基因突变的关联,为白纹伊蚊科学防治提供理论依据。方法用美国疾病预防与控制中心生物瓶法制备溴氰菊酯含量为1、2、4、6和8μg/瓶的测试瓶和不含溴氰菊酯的对照瓶,每瓶放... 详细信息

目的了解江苏省白纹伊蚊对溴氰菊酯的抗性,探究其与击倒抗性(kdr)基因突变的关联,为白纹伊蚊科学防治提供理论依据。方法用美国疾病预防与控制中心生物瓶法制备溴氰菊酯含量为1、2、4、6和8μg/瓶的测试瓶和不含溴氰菊酯的对照瓶,每瓶放10~25只实验室培养的敏感品系白纹伊蚊,确定诊断剂量。2020年8—9月,分别从徐州市睢宁县、淮安市淮阴区和无锡市宜兴市采集白纹伊蚊的幼虫或蛹,培养至子一代(F1代),取10~25只F1代雌蚊置含诊断剂量溴氰菊酯的测试瓶或对照瓶中充分接触30 min,计算白纹伊蚊的死亡率,评价其抗性水平。提取抗性测试后蚊虫的DNA,PCR扩增电压门控钠离子通道(VGSC)跨膜结构域Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的基因编码区并测序,用Bioedit、Seqman等软件分析kdr基因突变情况,统计kdr基因型和突变频率,抗性表型与敏感表型蚊虫kdr突变率的差异使用χ^(2)检验。结果用实验室敏感品系白纹伊蚊确定的溴氰菊酯诊断剂量为4μg/瓶。从睢宁县、淮阴区和宜兴市共采集到白纹伊蚊149只。睢宁县的白纹伊蚊在诊断剂量下的校正平均死亡率为(28.2±1.4)%,淮阴区和宜兴市的平均死亡率分别为(64.4±5.5)%、(56.3±17.7)%,3个县(市、区)的白纹伊蚊对溴氰菊酯均已产生抗药性。共获得DNA序列447条,测序结果显示,3个县(市、区)白纹伊蚊VGSC结构域Ⅳ的基因编码区1532和1534位点均存在kdr基因突变,其中1532位点共有2种等位基因,分别为野生型ATC/I(279/298,93.6%)和突变型ACC/T(19/298,6.4%);组成3种基因型,分别为野生型纯合子I/I(133/149,89.3%)、野生型/突变型杂合子I/T(13/149,8.7%)和突变型纯合子T/T(3/149,2.0%)。1534位点共有4种等位基因,分别为野生型TTC/F(275/298,92.3%)和突变型TCC/S(5/298,1.7%)、TTA/L(14/298,4.7%)和TTG/L(4/298,1.3%);组成4种基因型,分别为野生型纯合子F/F(128/149,85.9%)、突变型/野生型杂合子F/S(5/149,3.4%)和F/L(14/149,9.4%),突变型纯合子L/L(2/149,1.3%)。72只有抗性表型的白纹伊蚊成蚊中,1532、1534位点野生型分别占87.5%(63/72)和86.1%(62/72),kdr基因突变型分别占12.5%(9/72)和13.9%(10/72);77只敏感表型白纹伊蚊成蚊中,1532和1534位点野生型分别占90.9%(70/77)和85.7%(66/77),kdr基因突变型分别占9.2%(7/77)和14.3%(11/77)。抗性表型和敏感表型个体中,1532和1534位点kdr基因突变型间的差异无统计学意义(χ^(2)=0.168、4.111,P>0.05)。结论江苏省睢宁县、淮阴区和宜兴市的白纹伊蚊对溴氰菊酯均产生抗药性,但1532和1534位点kdr基因突变频率均较低,未发现抗性表型与1532位点、1534位点kdr基因突变的相关性。

关键词：白纹伊蚊溴氰菊酯 CDC生物瓶法抗药性击倒抗性突变

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新经济时代市场营销发展的实践创新途径

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经济研究导刊 2017年第23期 188-189页

作者：刘大旭李硕熙王冠卓黑龙江中医药大学佳木斯学院黑龙江佳木斯154007

新经济时代使竞争资源发生变化。传统市场营销模式在信息经济、知识经济和技术经济的影响下,表现出反应迟钝、机制落后、竞争力衰退的缺陷,需要从本质上改变营销思路。应在注重产品开发、技术革新的基础上,对传统营销模式、营销理念、... 详细信息

新经济时代使竞争资源发生变化。传统市场营销模式在信息经济、知识经济和技术经济的影响下,表现出反应迟钝、机制落后、竞争力衰退的缺陷,需要从本质上改变营销思路。应在注重产品开发、技术革新的基础上,对传统营销模式、营销理念、营销技术和组织形式进行全面变革和创新,以适应市场发展变化的趋势,以创新手段赢得市场先机,提高企业经营的营销效率。

关键词：新经济时代市场营销发展实践途径创新

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