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湖南娄底市犬弓首蛔虫流行状况及线粒体cox 1和nad 4序列变异分析

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中国兽医杂志 2022年第4期58卷 40-44页

作者：王先坤李静娄底职业技术学院湖南娄底417000

为了解湖南省娄底市犬弓首蛔虫流行状况及虫株遗传变异情况,本试验于2021年3—9月对该地区368份犬粪便和104份环境(土壤和水源)样品的犬弓首蛔虫污染情况进行调查;对9个犬弓首蛔虫分离株线粒体cox 1和nad 4序列进行扩增、测序与分析。... 详细信息

为了解湖南省娄底市犬弓首蛔虫流行状况及虫株遗传变异情况,本试验于2021年3—9月对该地区368份犬粪便和104份环境(土壤和水源)样品的犬弓首蛔虫污染情况进行调查;对9个犬弓首蛔虫分离株线粒体cox 1和nad 4序列进行扩增、测序与分析。结果显示:被调查的犬粪便和环境样品的犬弓首蛔虫虫卵检出率分别为13.59%(50/368)和18.27%(19/104);其中宠物犬(11.74%)较流浪犬(17.36%)来源粪便样品检出率低,公园来源土壤样品(9.09%)较小区来源样品(3.92%)检出率高;9个犬弓首蛔虫分离株线粒体cox 1和nad 4序列长度分别为424 bp和1197 bp,核苷酸序列同源性为99.4%~100.0%和98.7%~100.0%,与其他具有代表性蛔虫分离株对应序列同源性均低于90%;9个犬弓首蛔虫分离株线粒体cox 1和nad 4序列核苷酸多样性分别为0.007±0.002和0.006±0.003。结果表明湖南娄底市犬弓首蛔虫分离株遗传变异较低,但虫卵流行状况严重,且存在于公共环境中,对人类健康造成潜在威胁。

关键词：犬弓首蛔虫流行情况线粒体cox 1和nad 4 遗传变异

猪伪狂犬病毒HN-LD株分离鉴定及部分毒力基因遗传进化分析

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江苏农业科学 2022年第10期50卷 171-176页

作者：王先坤谭磊徐凯文李静娄底职业技术学院湖南娄底417000 湖南农业大学动物医学院湖南长沙410128

为了解湖南省伪狂犬病毒(PRV)病原特征及遗传变异情况,从湖南娄底某猪场采集疑似感染伪狂犬病(PR)病料,通过细胞传代、PCR鉴定、间接免疫荧光试验(IFA)等进行病毒分离鉴定;对该毒株的gC、TK和gE基因进行PCR扩增及测序,分析其变异情况。... 详细信息

为了解湖南省伪狂犬病毒(PRV)病原特征及遗传变异情况,从湖南娄底某猪场采集疑似感染伪狂犬病(PR)病料,通过细胞传代、PCR鉴定、间接免疫荧光试验(IFA)等进行病毒分离鉴定;对该毒株的gC、TK和gE基因进行PCR扩增及测序,分析其变异情况。结果表明,临床病料接种PK15细胞后有1份样品出现细胞病变,经过PCR和IFA鉴定结果表明分离的毒株为PRV(命名为HuN-LD株),盲传第6代病毒的滴度为10^(7.5)TCID_(50)/mL。与参考PRV毒株相比,该毒株gE、TK和gC基因序列与国内流行变异株对应序列同源性最高,与其他毒株同源性相对较低。基于gC基因序列构建的系统进化数分析结果表明,该毒株与国内2011年后流行变异株亲缘关系最近,属于同一分支,但与国外流行的毒株(NIA3和Becker等)相隔较远,属于不同分支。提示成功分离得到1株PRV变异株,该结果可为湖南省PRV流行病学研究及疫苗研发等提供科学依据。

关键词：猪伪狂犬病毒分离鉴定遗传变异进化分析湖南省

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一例犬皮肤黏膜脓皮症的病例报告

湖南畜牧兽医 2022年第4期 28-31页

作者：王先坤彭小军娄底职业技术学院湖南娄底417000 深圳市海秀卡拉宠物医院有限公司广东深圳518000

犬的皮肤黏膜脓皮病在临床上比较罕见,是一种皮肤和黏膜结合处的细菌感染,犬不常见,德国牧羊犬及相关品种具有易感性。病变的特点是黏膜皮肤交界处肿胀、红斑和形成结痂,常为对称性分布,也可为单侧。患宠疼痛或瘙痒,以及自体损伤,有渗... 详细信息

犬的皮肤黏膜脓皮病在临床上比较罕见,是一种皮肤和黏膜结合处的细菌感染,犬不常见,德国牧羊犬及相关品种具有易感性。病变的特点是黏膜皮肤交界处肿胀、红斑和形成结痂,常为对称性分布,也可为单侧。患宠疼痛或瘙痒,以及自体损伤,有渗出、糜烂、裂口和色素减退。唇边以及口角处更易发生。报告了一例成年去势公犬罹患犬皮肤黏膜脓皮症病例的治疗始末,其中包括背景资料、临床表现以及采用的诊断技术和治疗方法。

关键词：皮肤黏膜脓皮病诊断治疗

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冶金机械材料腐蚀的原因及防腐措施分析

中国金属通报 2023年第15期 23-25页

作者：张书维王琳王先坤江苏安全技术职业学院(机械学院)

冶金机械材料被腐蚀的可能性较大,且多方面因素均能够成为其发生腐蚀的影响因素,为了提升冶金机械材料的应用价值,有必要对相应的防腐蚀策略进行科学合理的设计。因此,本文针对冶金机械材料发生腐蚀的原因进行分析,并提出相应的防腐策略。

关键词：冶金机械材料腐蚀原因防腐措施

纺锤链霉菌SD-07遗传转移体系的建立及产多烯大环内酯类抗生素基因簇的初步研究

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纺锤链霉菌SD-07遗传转移体系的建立及产多烯大环内酯类抗生素基...

作者：王先坤山东大学

学位级别：硕士

纺锤链霉菌(Streptomyce netropsis) SD-07系本实验室2007年于山东省济南市南部山区分离得到,能产生广谱高效的多烯大环内酯类抗真菌抗生素。其中,五烯大环内酯含量最高,七烯大环内酯次之,还包含极少量的四烯大环内酯和／或六烯大环内酯... 详细信息

纺锤链霉菌(Streptomyce netropsis) SD-07系本实验室2007年于山东省济南市南部山区分离得到,能产生广谱高效的多烯大环内酯类抗真菌抗生素。其中,五烯大环内酯含量最高,七烯大环内酯次之,还包含极少量的四烯大环内酯和／或六烯大环内酯,其中有些具有新的化学分子式。因其抗菌活性远高于目前临床上广泛使用的多烯大环内酯类抗真菌抗生素(两性霉素B),有进一步研发成国家一类新药的潜力(新型抗真菌抗生素)。为研究其抗生素产生基因簇及相关的调控基因的功能,有必要获得抗生素合成基因簇的核酸序列等相关信息,以及建立其遗传操作体系。因此,本文工作包括以下3部分：1.完成了全基因组的扫描测序,并对抗生素合成基因簇进行了初步分析。得到的基因序列全长7685111bp,384个scaffold, G+C含量为71.7%。利用基因预测软件和NCBI在线序列比对,完成了对orf的注释,共得到60个包含抗生素合成相关基因的orf,定位在37个scaffold上。利用模块型PKS(polyketide synthases)分析系统数据库ASMPKS对预测所得到的PKS序列中包含的模块及可能合成的产物进行了预测,这些orf共包含32个酮基合成酶(KS, ketosynthase)结构域,27个酰基转移酶(AT, acyl transferase)结构域,42个酰基载体蛋白(ACP, acyl carrier protein)结构域,12个脱氢酶(DH,dehydratase)结构域,24个酮基还原酶(KR, ketoreductase)结构域,4个烯基还原酶(ER, enoyl reductase)结构域和2个硫酯酶(TE, thioesterase)结构域。这为研究纺锤链霉菌SD-07菌株的多烯大环内酯类抗生素合成基因簇及其调控序列的功能提供了基本数据。但是,全基因组的扫描测序结果没有给出多烯大环内酯类抗生素合成基因簇的完整序列。 2.建立了抗生素合成基因簇的亚克隆文库。建立抗生素合成基因簇的亚克隆文库,不仅可以用来测序以获得抗生素合成基因簇的完整序列,还可以用于今后抗生素合成基因表达调控研究。本文利用质粒pJTU2554建立了S.netropsis SD-07的fosmid基因组文库,得到并保存了2304个克隆子。其中,每个克隆子包含外源DNA片段的长度约为34kb。以SD-07基因组为8×106bp计,此基因文库的覆盖率为：99.45%。随后,利用多烯类抗生素聚酮合酶PKS同源序列设计的两组DNA探针：KS-AT和DH-KR,通过两轮Southern杂交从上述2304个克隆子中筛选出含有KS-AT或DH-KR同源基因的克隆子101个。这101个克隆子经KS序列引物PCR扩增验证全部为阳性,表明这些克隆子都至少包含1个抗生素合成基因。因此,它们组成了包含抗生素合成基因簇的亚克隆文库,经计算此文库的覆盖率为99.9%。为今后获得抗生素合成基因簇的完整核酸序列、以及研究抗生素合成基因的表达调控等打下了基础。 3.成功建立了纺锤链霉菌SD-07菌株的遗传操作系统。尽管链霉菌的遗传转移体系早已建立,包括接合转移,原生质体转化和电转化三种方法。但至今国内外仍没有关于纺锤链霉菌遗传转移体系的成功报道。本文首次建立了纺锤链霉菌SD-07接合转移体系。用于接合转移的质粒为整合型质粒pSET152,从甲基化修饰缺陷的大肠杆菌ET12567(pUZ8002)成功转移到纺锤链霉菌SD-07中并稳定整合在染色体上。优化了纺锤链霉菌SD-07接合转移的主要影响因素,使接合频率提高了近万倍。结果显示：纺锤链霉菌SD-07接合转移体系的最佳条件为：供体菌／受体菌比例为1/1(108：108),孢子热激条件为45℃,10min或者15min,孢子萌发时间为6h,接合转移培养基为GSY(含60mM CaCl2和60mM MgCl2),抗生素覆盖时间为16-20h,萘啶酮酸45μg/ml,阿伯拉霉素为30μg/ml,最高接合频率约为6×10-4/受体细胞。发现了影响接合转移频率的新因素。Ca2+的加入及其浓度是影响接合转移效率的最重要因素。Ca2+比Mg2+更能提高接合频率,两者相差10-100倍。60mM CaCl2,60mM MgCl2是提高接合频率的最佳组合。其次,发现接合转移培养基中有机氮源含量是影响接合频率的另一重要因素。以上两点的影响作用比以前报道的其它因素的影响作用更大,如供受体比例,热激条件、孢子萌发时间、抗生素覆盖时间等。随后我们还尝试利用更加快捷的电转化方法建立纺锤链霉菌SD-07的遗传操作系统。对电击条件与存活率之间的关系、受体细胞的预处理条件(溶菌酶处理)等进行了探索。尽管目前没有最终完成,但是目前所得到的实验结果和数据及其所反映的规律,为之后的研究打下了基础。

关键词：纺锤链霉菌(Streptomyces netropsis) 多烯大环内酯类抗真菌抗生素 PKS基因簇链霉菌接合转移电转化

犬弓首蛔虫线粒体cox1基因测序鉴定及生物学特性研究

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犬弓首蛔虫线粒体cox1基因测序鉴定及生物学特性研究

作者：王先坤湖南农业大学

学位级别：硕士

犬弓首蛔虫属于蛔目(Ascarididea)弓首科(Toxocaridae)弓首属(Toxocara),寄生于犬和其它动物(包括人)的小肠和胃内的一种线虫。本研究为了了解犬弓首蛔虫虫卵在体外发育情况、鉴别其感染性虫卵,掌握幼虫在小鸡体内移行情况,而做了一系... 详细信息

犬弓首蛔虫属于蛔目(Ascarididea)弓首科(Toxocaridae)弓首属(Toxocara),寄生于犬和其它动物(包括人)的小肠和胃内的一种线虫。本研究为了了解犬弓首蛔虫虫卵在体外发育情况、鉴别其感染性虫卵,掌握幼虫在小鸡体内移行情况,而做了一系列的相关研究,为犬弓首蛔虫病的诊断和防治提供了大量科学依据。本研究的第一部分对7株犬蛔虫cox1基因进行测序与序列分析。结果显示7株犬蛔虫cox1基因序列长度为440bp。线粒体cox1基因的种内相似性为96.7%～100%,种间相似性为86.4%-90.8%。本研究的第二部分设在5种温度下,采用十种试剂培养方法来体外培养犬弓首蛔虫虫卵,以及对犬弓首蛔虫虫卵在自然生活环境中进行体外模拟培养试验,结果显示,在15℃、25℃、35℃条件下,各体外试剂培养方法组和各模拟试验组的犬弓首蛔虫虫卵均有发育,在5℃、45℃条件下各组均未发育。十种体外试剂培养方法中,以25℃1molH2SO4培养犬弓首蛔虫虫卵孵化最快。模拟实验中,以25℃清水中的犬弓首蛔虫虫卵孵化最快。本研究的第三部分为犬弓首蛔虫感染性虫卵的鉴定和犬弓首蛔虫幼虫在小鸡体内移行试验。结果显示含两圈幼虫期(6字形会动)虫卵和含两圈幼虫期(8字形会动)虫卵为感染性虫卵,其幼胚长度均为238-270μm。在小鸡感染幼虫12小时肝脏最早分离出幼虫,肺脏分离出幼虫最早时间为感染后24h。本研究为国内首次对犬弓首蛔虫虫卵在自然环境进行模拟体外培养试验,以及对犬弓首蛔虫感染性虫卵进行的鉴别,在国内首次犬弓首蛔虫幼虫在小鸡体内移行试验。本研究为犬弓首蛔虫的分子生物学、生物学特性、临床试验以及公共卫生学等诸多研究提供了依据。

关键词：犬弓首蛔虫 cox1 虫卵培养感染性虫卵幼虫移行

少数民族地区150例地高辛血药浓度结果分析

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中国医院药学杂志 2014年第8期34卷 639-642页

作者：王雪王先坤温彩兰黔南州布依族苗族自治州人民医院药剂科贵州都匀558000

目的：回顾性分析少数民族地区150例地高辛血药浓度结果，为临床安全、合理、有效使用地高辛提供参考。方法：采用电化学发光免疫测定（ECLIA）法对地高辛进行血药浓度检测，查阅被监测患者的病历，建立药历，根据对地高辛监测结果，对... 详细信息

目的：回顾性分析少数民族地区150例地高辛血药浓度结果，为临床安全、合理、有效使用地高辛提供参考。方法：采用电化学发光免疫测定（ECLIA）法对地高辛进行血药浓度检测，查阅被监测患者的病历，建立药历，根据对地高辛监测结果，对影响地高辛血药浓度的因素进行分析。结果：150例中，血药浓度〈0．5ng·ml^-1。的有8例，在有效血药浓度范围0．5～2．0ng·ml^-1的有110例，出现中毒症状5例；血药浓度〉2．0ng·ml^-1的有32例，出现中毒症状24例。不同民族、年龄、性别对地高辛血药浓度和中毒发生率影响无显著性差异，去乙酰毛花苷和肾衰可显著提高地高辛血药浓度和中毒发生率（P〈0．05）。布依族、苗族、水族的地高辛血药浓度和中毒发生率较汉族有降低的趋势，女性地高辛血药浓度有高于男性的趋势。结论：地高辛血药浓度受多种因素影响，包括对医嘱的遵从性、生理N素、病理因素、联合用药等，开展血药浓度检测，是保障疗效，减少和纠正中毒事件发生的必要途径。

关键词：少数民族地区地高辛电化学发光免疫测定血药浓度监测

我院2009-2010年革兰阳性菌耐药性分析与临床用药对策

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中国药房 2012年第6期23卷 534-536页

作者：王雪王先坤贵州省黔南州人民医院贵州都匀558000

目的:分析我院革兰阳性菌耐药情况,提出指导和干预临床合理使用抗生素的对策。方法:分离本院2009-2010年住院患者各类标本的非重复革兰阳性菌,采用K-B纸片扩散法测定细菌对15种抗菌药物的敏感性,用WHONET5.4软件进行数据分析,并将耐药... 详细信息

目的:分析我院革兰阳性菌耐药情况,提出指导和干预临床合理使用抗生素的对策。方法:分离本院2009-2010年住院患者各类标本的非重复革兰阳性菌,采用K-B纸片扩散法测定细菌对15种抗菌药物的敏感性,用WHONET5.4软件进行数据分析,并将耐药率结果与Mohnarin监测结果比较,据此提出指导和干预临床用药的对策。结果:2年共分离革兰阳性菌1082株,除金黄色葡萄球菌对监测药物组合的耐药率明显低于Mohnarin监测结果(P<0.05)外,溶血葡萄球菌、表皮葡萄球菌对监测药物的耐药率与Mohnarin监测结果无显著性差异,葡萄球菌属已出现对喹奴普丁/达福普汀的耐药菌株,耐药率为0.35%～16.67%;肠球菌未发现对阿莫西林/克拉维酸钾不敏感菌株;链球菌属对左氧氟沙星的耐药率明显高于Mohnarin细菌耐药监测结果。结论:金黄色葡萄球菌感染可优选复方磺胺甲唑治疗;溶血葡萄球菌、木糖葡萄球菌感染则需要选择含酶抑制剂的抗菌药物,不能控制症状时可考虑选择喹奴普丁/达福普汀;表皮葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌感染可优选苯唑西林治疗;肠球菌感染使用阿莫西林/克拉维酸钾治疗;链球菌感染避免使用喹诺酮类药,优选β-内酰胺类抗生素治疗;万古霉素依然对革兰阳性菌显示了良好的抗菌活性,可以在其他药治疗无效时选用。

关键词：革兰阳性菌抗菌药物耐药性合理用药用药对策

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白细胞介素-18与急性胰腺炎

中国急救医学 2005年第6期25卷 449-451页

作者：王先坤王世文詹乐恒兰州医学院第二附属医院急救中心甘肃兰州730030

急性胰腺炎(AP)是一种常见的急腹症,也是一种具有潜在威胁的疾病,它的发病率较高,总死亡率为10%.临床上根据病情的严重度将其分为轻型急性胰腺炎(MAP)和重症急性胰腺炎(SAP),其中MAP具有自限性,预后较好,而SAP波及邻近组织并可并发远隔... 详细信息

急性胰腺炎(AP)是一种常见的急腹症,也是一种具有潜在威胁的疾病,它的发病率较高,总死亡率为10%.临床上根据病情的严重度将其分为轻型急性胰腺炎(MAP)和重症急性胰腺炎(SAP),其中MAP具有自限性,预后较好,而SAP波及邻近组织并可并发远隔脏器的损害,导致多脏器功能不全综合征(MODS)的发生,预后差,死亡率高达20%～30%[1].近些年来的研究表明,过度的炎症反应是导致AP病情加重的关键因素.白细胞介素-18(IL-18)是一种新的促炎症细胞因子,在SAP进程中也发挥重要作用.本文综述IL-18的结构、生物学功能及其在AP发病中的作用,为AP的研究及治疗方面提供一条新的思路及手段.……

关键词：胰腺炎白细胞介素-18