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自噬通过影响PTPMT1表达促进乳腺癌细胞的恶性生物学行为

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自噬通过影响PTPMT1表达促进乳腺癌细胞的恶性生物学行为

作者：王仕清安徽医科大学

学位级别：硕士

【实验研究背景】乳腺癌作为全球范围女性最常见肿瘤之一,发病率与死亡率均位居女性疾病首位。虽然随着医疗水平的不断进步与提高,建立起以手术为主放化疗为辅的治疗方案,乳腺癌患者的五年生存率得到明显改善,但乳腺癌的复发与转移仍使... 详细信息

【实验研究背景】乳腺癌作为全球范围女性最常见肿瘤之一,发病率与死亡率均位居女性疾病首位。虽然随着医疗水平的不断进步与提高,建立起以手术为主放化疗为辅的治疗方案,乳腺癌患者的五年生存率得到明显改善,但乳腺癌的复发与转移仍使疾病死亡率难以下降。近期研究表明某些基因与乳腺癌的发生发展有着密切联系,实验室关注的便是PTPMT1。PTPMT1是由核DNA编码的一种类似于PTEN的酪氨酸磷酸酶,其在各类组织的线粒体中广泛分布。实验室此前免疫组化研究结果提示高表达PTPMT1可能起到抑制乳腺癌的作用。于是预实验中选取人正常乳腺上皮细胞MCF-10A和四种乳腺癌细胞,在m RNA和蛋白质水平分别检测其PTPMT1的表达,结果发现两者存在较大差异。根据这一结果推测在此过程中是否发生了蛋白质的降解,并进一步推测是否是由于自噬造成的蛋白质降解。自噬作为常见的病理生理过程,通过自噬机体能实现细胞本身的代谢需要以及细胞器的更新。近些年自噬已成为肿瘤研究的一个重要课题,但关于自噬与肿瘤的关系目前仍众说纷纭。为了探索PTPMT1在乳腺癌的发生发展中起到的作用与可能存在的机制,以及PTPMT1在m RNA与蛋白质水平表达差异的可能机制,本课题通过瞬时转染改变乳腺癌细胞中PTPMT1的表达并进行一系列相关实验来探讨PTPMT1在乳腺癌中发挥的作用及其机制,为乳腺癌的研究与治疗提供新的思路与线索。【实验研究方法】1.利用RT-PCR和Western-Blot检测PTPMT1在正常乳腺上皮细胞和乳腺癌细胞中的表达。2.利用Western-Blot检测正常乳腺上皮细胞和乳腺癌细胞自噬相关marker表达。3.T47D细胞株瞬时转染WT-PTPMT1质粒抬高其PTPMT1表达,细胞行为学实验检测PTPMT1对细胞恶性生物学行为的作用。***-10A和MCF-7细胞株瞬时转染Sh RNA质粒敲低其PTPMT1表达,细胞行为学实验检测PTPMT1对细胞恶性生物学行为的作用。5.T47D细胞株瞬时转染WT-PTPMT1质粒抬高其PTPMT1表达后加入自噬抑制剂氯喹,细胞行为学实验检测抑制自噬后细胞恶性生物学行为变化,WesternBlot检测PTPMT1表达的变化。***-10A细胞株瞬时转染Sh RNA质粒敲低其PTPMT1表达后加入自噬抑制剂氯喹,细胞行为学实验检测抑制自噬后细胞恶性生物学行为变化,WesternBlot检测PTPMT1表达的变化。7.改变PTPMT1表达后利用Western-Blot检测Bcl-2的表达。【实验研究结果】***-PCR实验结果显示:正常乳腺上皮细胞和乳腺癌细胞在m RNA水平上PTPMT1表达没有明显差异;在蛋白水平上,正常乳腺上皮细胞PTPMT1表达显著高于乳腺癌细胞。2.乳腺癌细胞的自噬水平显著高于正常乳腺上皮细胞,并且低表达PTPMT1的T47D细胞株表现出更强的自噬水平。3.抬高T47D细胞株中PTPMT1的表达后,减轻了乳腺癌细胞的迁移、侵袭、克隆形成等恶性生物学行为。4.敲低MCF-10A和MCF-7细胞株中PTPMT1的表达后,增加了细胞的迁移、侵袭、克隆形成等恶性生物学行为。5.在抬高T47D细胞株PTPMT1的表达后使用自噬抑制剂氯喹能够使细胞内PTPMT1表达进一步升高,并减轻细胞的恶性生物学行为。6.在敲低MCF-10A细胞株PTPMT1的表达后使用自噬抑制剂氯喹能够使细胞内PTPMT1表达升高,并减轻细胞的恶性生物学行为。7.抬高T47D细胞株PTPMT1表达后其Bcl-2表达也升高,敲低MCF-10A细胞株PTPMT1表达后其Bcl-2表达也随之降低。【结论】低表达PTPMT1能够促进乳腺癌细胞的恶性生物学行为。若使用自噬抑制剂氯喹能够使细胞PTPMT1表达升高并减轻细胞恶性生物学行为。

关键词：乳腺癌 PTPMT1 自噬氯喹抗凋亡蛋白

恢刺阿是穴联合等长抗阻力疗法治疗颈型颈椎病的临床观察

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恢刺阿是穴联合等长抗阻力疗法治疗颈型颈椎病的临床观察

作者：王仕清黑龙江中医药大学

学位级别：硕士

目的:观察恢刺阿是穴联合等长抗阻力疗法治疗颈型颈椎病的临床疗效,为临床治疗颈型颈椎病提供临床依据和新思路。方法:本研究共纳入60例NTCS患者,将其分为治疗组和对照组(随机分配),每组共30例。其中治疗组采用恢刺阿是穴联合等长抗阻... 详细信息

目的:观察恢刺阿是穴联合等长抗阻力疗法治疗颈型颈椎病的临床疗效,为临床治疗颈型颈椎病提供临床依据和新思路。方法:本研究共纳入60例NTCS患者,将其分为治疗组和对照组(随机分配),每组共30例。其中治疗组采用恢刺阿是穴联合等长抗阻力疗法治疗,对照组采用毫针常规针刺治疗。疗程:日1次,6次为一个疗程,进行为期2周的临床观察。通过比较治疗前、后(NRS、SF-MPQ-2、NPQ、NDI、ROM)的评分变化,对颈型颈椎病(Neck Type of Cervical Spondylosis,NTCS)的疼痛、生活质量及颈椎活动度的影响进行研究。结果:(1)对颈痛的干预效果主要从以下两个方面进行评估:(1)治疗前、后比较两组都可以有效降低NRS评分(P<0.05);与对照组比较,治疗组的评分差值更大,组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。(2)SF-MPQ-2评分方面:治疗前、后比较两组都可以有效降低SF-MPQ-2评分(P<0.05);与对照组比较,治疗组的评分差值更大,组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。(2)对NTCS患者生活质量改善情况主要从以下两个方面进行评估(1)NPQ评分方面:治疗前、后比较两组都可以有效降低NPQ评分(P<0.05);与对照组比较,治疗组的评分差值更大,组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。(2)NDI评分方面:治疗前、后比较两组都可以有效降低NDI评分(P<0.05);与对照组比较,治疗组的评分差值更大,组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。(3)对于颈椎活动度的改善情况主要从ROM积分变化进行评估:治疗前、后比较两组都可以有效提高ROM积分(P<0.05);与对照组比较,治疗组的评分差值更大,组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。(4)两组治疗后总有效率:治疗组83.33%,对照组73.33%,两组差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.恢刺阿是穴联合等长抗阻力疗法能够有效缓解颈型颈椎病患者颈部疼痛不适的临床症状。2.恢刺阿是穴联合等长抗阻力疗法能够有效改善颈型颈椎病患者的生活质量。3.恢刺阿是穴联合等长抗阻力疗法能够有效改善颈型颈椎病患者的颈椎活动度。

关键词：恢刺阿是穴等长抗阻力疗法颈型颈椎病

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四字鉴略

旋后手法复位高分子石膏夹板治疗桡骨远端Smith骨折42例分析

丛书名：插图本中国文化启蒙丛书

2004年

作者：（清）王仕云撰张万钧注解

该书对每篇作品均进行了讲解，并配有插图。

ISBN: (纸本)7534823552

该书对每篇作品均进行了讲解，并配有插图。

关键词：古代汉语

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中医临床研究 2015年第27期7卷 115-116页

作者：王仕清陈昉张思平东莞市清溪医院广东东莞523660

目的：观察旋后手法复位高分子夹板治疗桡骨远端Smith骨折的疗效。方法：选取自2011年1月—2015年1月采用旋后手法复位高分子石膏夹板外固定治疗桡骨远端Smith骨折42例,男性18例,女性24例,年龄9-72岁,均有外伤史,采用Anelerson评价法评... 详细信息

目的：观察旋后手法复位高分子夹板治疗桡骨远端Smith骨折的疗效。方法：选取自2011年1月—2015年1月采用旋后手法复位高分子石膏夹板外固定治疗桡骨远端Smith骨折42例,男性18例,女性24例,年龄9-72岁,均有外伤史,采用Anelerson评价法评定疗效。结果：所有患者均获随访,时间4个月-2年,平均1年,骨性愈合对位对线良好38例,4例略向掌侧移位1-2 mm,最终功能：35例腕前臂活动自如,7例轻度功能受限。按Anderson成人前臂骨折治疗效果评价分级标准评定,优35例,良7例。结论：采用旋后手法复位高分子石膏夹板治疗桡骨远端Smith骨折,复位成功率高,外固定可靠,容易操作,值得临床推广。

关键词： Smith骨折高分子石膏夹板旋后手法复位疗效

对比改良小针刀联合曲安奈德治疗狭窄性腱鞘炎的疗效研究

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中国实用医药 2015年第30期10卷 173-174页

作者：王仕清张思平陈昉东莞市清溪医院急诊科 523660 东莞市清溪医院手外科 523660 东莞市清溪医院骨科 523660

目的研究对比改良小针刀联合曲安奈德治疗屈指肌腱狭窄性腱鞘炎的疗效。方法 300例屈指肌腱狭窄性腱鞘炎患者,随机分为封闭组、小针刀组、改良小针刀联合曲安奈德组,每组100例。对三组治疗效果临床对比分析。结果所有患者经随访6~12个月... 详细信息

目的研究对比改良小针刀联合曲安奈德治疗屈指肌腱狭窄性腱鞘炎的疗效。方法 300例屈指肌腱狭窄性腱鞘炎患者,随机分为封闭组、小针刀组、改良小针刀联合曲安奈德组,每组100例。对三组治疗效果临床对比分析。结果所有患者经随访6~12个月,改良小针刀联合曲安奈德组治愈率96.46%,小针刀组治愈率90.57%,封闭组治愈率61.17%,三组治愈率比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论改良小针刀联合曲安奈德治疗屈指肌腱狭窄性腱鞘炎,其疗效明显优于单纯封闭、单纯小针刀的治疗方法 ,操作简单易行、治疗时间短、疗效确切、复发率低、治疗费低、并发症少,一般1次即可治愈,符合中医的简、便、廉、验的特点,值得临床推广。

关键词：改良小针刀狭窄性腱鞘炎曲安奈德疗效

河北宽城中元古界高于庄组古海洋氧化还原状态及其对真核生物早期演化的启示

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河北宽城中元古界高于庄组古海洋氧化还原状态及其对真核生物早期...

重金属污染物镉通过EMT机制加强结肠癌细胞株HCT-116的恶性生物学行为

第十五届全国古地理学及沉积学学术会议

作者：马鹏飞郭华王仕清王琛中国地质大学(武汉)生物地质与环境地质国家重点实验室地球科学学院

重建古海洋氧化还原条件一直是古环境研究中的焦点。大量的研究表明,早期真核生物以及后生动物等的起源及演化与大气氧的浓度相关联,海水中的自由氧主要来源于与大气间的交换作用,因此,古海洋氧化还原条件对于研究海洋化学与生物圈演化...

重建古海洋氧化还原条件一直是古环境研究中的焦点。大量的研究表明,早期真核生物以及后生动物等的起源及演化与大气氧的浓度相关联,海水中的自由氧主要来源于与大气间的交换作用,因此,古海洋氧化还原条件对于研究海洋化学与生物圈演化和大气之间的联系至关重要。近年来随着古生物研究的深入,在我国华北燕山盆地中元古界高于庄组地层（约1.60～1.55Ga）中发现了分米级多细胞大型真核生物化石（Zhu et al., 2016）,与此宏观藻类化石层位相当,微型真核生物化石的丰度和分异度也有了显著增加（Shi et al., 2017）。为了探索真核生物早期演化的环境背景,本研究选取河北宽城地区高于庄组地层进行了碳酸盐岩沉积学、微量元素以及CAS（碳酸盐岩晶格硫酸盐）硫同位素的综合研究。

关键词：

来源： cnki会议评论

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世界华人消化杂志 2016年第30期24卷 4185-4192页

作者：钱燕陈丹蕾任海风王仕清于丹丹汪思应安徽医科大学基础医学院病理生理学教研室安徽省合肥市230032 安庆医药高等专科学校生理病理教研室安徽省安庆市246052

目的探讨重金属污染物镉(cadmium,Cd)对人结肠癌细胞株HCT-116的恶性生物学行为的影响及其相关机制.方法选用低浓度Cd诱导的人类结肠癌稳定细胞株HCT-116和未诱导的细胞株HCT-116为研究对象.通过MTT实验、平板克隆形成实验、黏附实验、T... 详细信息

目的探讨重金属污染物镉(cadmium,Cd)对人结肠癌细胞株HCT-116的恶性生物学行为的影响及其相关机制.方法选用低浓度Cd诱导的人类结肠癌稳定细胞株HCT-116和未诱导的细胞株HCT-116为研究对象.通过MTT实验、平板克隆形成实验、黏附实验、Tran swell细胞迁移和侵袭实验等,观察HCT-116细胞的恶性生物学行为的变化;蛋白免疫印迹法检测E-cadherin、Vimentin、E-盒结合锌指蛋白1、MMP-3、MMP-9等上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白的表达水平.结果与对照组相比,Cd诱导组细胞的恶性生物学行为增强(P<0.05),且转化后的细胞间呈间充质样链接;相较于对照组,Cd诱导24 h后,间质样标志物Vimentin蛋白的相对表达量明显增加(2.20±0.11 vs 1.03±0.08,P<0.01)、MMP-3(5.76±0.20 vs 1.00±0.09,P<0.01)、MMP-9(3-46±0.05 vs 0.99±0.04,P<0.01)的蛋白相对表达量也上升,而上皮样标志物E-cadherin蛋白的相对表达显著下降(0.30±0.03 vs 1.0l±0.05,P<0.01),且他们均呈现时司依赖性结论形态学和分子生物学都提示HCT-116细胞在慢性低剂量Cd暴露后会引起EMT机制.

关键词：镉结直肠癌上皮-间质转化钙黏附蛋白E 波形蛋白

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炼化企业能量利用优化案例分析

石油炼制与化工 2024年第2期55卷 178-185页

作者：王仕文中海石油宁波大榭石化有限公司浙江宁波315812

基于炼化企业生产用能规律及特点,借助流程模拟、对标、大数据分析等方法,中海石油宁波大榭石化有限公司开展了全厂能量利用优化研究,在装置工艺过程、换热网络、低温热合理利用、蒸汽梯级能量利用等方面提出了改进措施和优化方案,并实... 详细信息

基于炼化企业生产用能规律及特点,借助流程模拟、对标、大数据分析等方法,中海石油宁波大榭石化有限公司开展了全厂能量利用优化研究,在装置工艺过程、换热网络、低温热合理利用、蒸汽梯级能量利用等方面提出了改进措施和优化方案,并实施了提高DCC装置原料直供比及分馏塔塔顶循环换热流程优化、乙苯装置低温余热回收利用、甲苯塔进料换热网络设计优化、抽提蒸馏装置蒸汽喷射泵技术应用等节能优化改造,每年产生经济效益约5727万元,实现节能36 ktCE(1 tCE=29.3 GJ),减少CO_(2)排放103 kt,全厂低温热利用率提高了16.3%。

关键词：炼油厂节能低碳能量利用优化梯级利用热泵

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弹力钢丝治疗甲沟炎的效果观察及护理

中国现代药物应用 2017年第9期11卷 169-170页

作者：谢颖硕王仕清罗云香袁芳萍钟丽虹广东省东莞市清溪医院 523660

目的探讨采用弹力钢丝结合相应护理治疗甲沟炎的效果。方法 100例甲沟炎患者,按随机数字表法分为对照组和干预组,各50例。对照组采取2%硼酸溶液并结合相应护理措施,干预组则采用弹力钢丝治疗护理甲沟炎,对比两组临床效果及护理满意度的... 详细信息

目的探讨采用弹力钢丝结合相应护理治疗甲沟炎的效果。方法 100例甲沟炎患者,按随机数字表法分为对照组和干预组,各50例。对照组采取2%硼酸溶液并结合相应护理措施,干预组则采用弹力钢丝治疗护理甲沟炎,对比两组临床效果及护理满意度的差异。结果干预组总有效率为92.0%,明显高于对照组的70.0%,差异具有统计学意义(P0.05)。结论弹力钢丝治疗青少年患者的疗效确切,临床应用此方法操作简便,可取得良好的临床治疗护理效果,社会效益和经济效益大,减轻了患者的病痛与经济负担,值得临床护理甲沟炎的推广和应用。

关键词：弹力钢丝甲沟炎护理