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更新教育观念深化教学改革

赤峰学院学报（自然科学版） 2007年第4期23卷 145-145,147页

作者：王丽廷赤峰市喀喇沁旗十家乡上烧锅小学内蒙古赤峰024000

通过改进师生关系和改变教学形式两方面阐述了深化教学改革的方向、方法,坚持了以人为本,实事求是的原则.

关键词：师生关系教学形式教学改革

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聚合草多肽的酶法制备及其免疫活性研究

核农学报 2017年第7期31卷 1330-1338页

作者：高文伟王震霍乃蕊王丽廷周芃来乔天磊郭泽恒苏文婷山西农业大学动物科技学院山西太谷030801

为了提高聚合草利用价值,开发聚合草免疫活性肽,利用Box-Behnken设计原理,以多肽含量为响应值,用响应面法构建数学模型,确定制备聚合草多肽的最优工艺条件,并建立Con A诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖的体系(MTT法)和LPS促进小鼠腹腔巨噬细胞... 详细信息

为了提高聚合草利用价值,开发聚合草免疫活性肽,利用Box-Behnken设计原理,以多肽含量为响应值,用响应面法构建数学模型,确定制备聚合草多肽的最优工艺条件,并建立Con A诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖的体系(MTT法)和LPS促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的体系(中性红法),探究所制备的聚合草多肽的免疫活性。结果表明,将聚合草以8%的料水比打浆,添加3%纤维素酶,调节pH值至6.0,45℃酶解2 h后,再添加4.57%的碱性蛋白酶,调节pH值至8.91,43.4℃酶解56 min,酶解液中的多肽含量达0.664 mg·m L^(-1)。用乙醇沉淀法收集酶解液中的多肽,制成多肽液,结果发现,66、0.66和0.066μg·m L^(-1)的聚合草多肽对小鼠脾淋巴细胞的增殖均具有显著促进作用;66、6.6和0.66μg·m L^(-1)的聚合草多肽对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能均具有显著增强作用。由此可见,本研究所制备的聚合草多肽具有免疫增强活性,这为聚合草的高值利用提供了理论依据。

关键词：聚合草多肽响应面法工艺优化免疫活性

G2系和G5系鸡感染马立克氏病毒早期细胞因子转录水平的变化

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中国预防兽医学报 2015年第12期37卷 957-961页

作者：蔡文博吴少莲彭蔚宇王丽廷陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/实验动物与比较医学团队黑龙江哈尔滨150001 常州市金坛区动物疫病预防控制中心江苏常州213200 山西农业大学动物科技学院山西太谷030801

为研究主要组织相容性抗原(MHC)不同的G2系和G5系鸡在感染马立克氏病毒(MDV)后立即早期病毒复制及细胞因子转录水平的动态变化,本实验对14日龄G2和G5系SPF鸡滴鼻接种超强毒(vv MDV)Md5株,以28S r RNA基因为内参,利用双重荧光定量RT-PCR(... 详细信息

为研究主要组织相容性抗原(MHC)不同的G2系和G5系鸡在感染马立克氏病毒(MDV)后立即早期病毒复制及细胞因子转录水平的动态变化,本实验对14日龄G2和G5系SPF鸡滴鼻接种超强毒(vv MDV)Md5株,以28S r RNA基因为内参,利用双重荧光定量RT-PCR(dq RT-PCR)方法对接种后4 h、24 h、48 h和96 h肺淋巴细胞、脾脏和外周血淋巴细胞(PBL)中MDV meq、IFN-γ、IL-18、IL-4和IL-10的m RNA含量进行检测。结果显示,接种后96 h仅在两品系感染鸡的肺淋巴细胞和脾脏中检测到了meq m RNA,G2系鸡群肺淋巴细胞中病毒m RNA含量高于G5系,但脾脏中较低。96 h肺淋巴细胞和脾脏中IFN-γ、IL-4和IL-10转录水平大幅上调,并且G2系鸡群均略高于G5。本研究结果提示G2系对MDV的抵抗能力强于G5,这两种品系鸡感染MDV后可能主要启动以Th2型为主的细胞免疫反应,为研究MDV对不同MHC单倍型鸡的致病性提供了实验依据。

关键词：马立克氏病毒 IFN-γ IL-18 IL-4 IL-10

去除信号肽有利鸡白细胞介素-10在哺乳动物细胞胞浆的表达

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实验动物科学 2017年第2期34卷 16-20,25页

作者：彭蔚宇王丽廷王兴童杨柳孟兴陈洪岩韩凌霞中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物与比较医学团队/兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150001 山西农业大学动物科技学院太谷030801

目的分析鸡白细胞介素10(chicken interleukin-10,chIL-10)的信号肽对体外表达的影响,以获得稳定表达chIL-10的细胞系。方法采用RT-PCR方法从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中分别扩增含信号肽(euchIL-10F)和去信号肽(euchIL-... 详细信息

目的分析鸡白细胞介素10(chicken interleukin-10,chIL-10)的信号肽对体外表达的影响,以获得稳定表达chIL-10的细胞系。方法采用RT-PCR方法从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中分别扩增含信号肽(euchIL-10F)和去信号肽(euchIL-10M)的chIL-10编码基因,克隆入含有报告基因e GFP和新霉素抗性基因(neo)的真核表达载体pEGFP-N1中,获得重组质粒N1-euchIL-10F和N1-euchIL-10M。分别转染中国仓鼠卵巢细胞系(CHO-K1),经G418加压筛选、纯化,获得稳定表达chIL-10蛋白的CHO-K1细胞系,利用激光共聚焦试验观察外源蛋白的细胞定位。结果通过RT-PCR、间接免疫荧光试验和免疫印迹试验,表明euchIL-10F和euchIL-10M均整合入细胞基因组中,且N1-euchIL-10M在胞浆大量表达较强的绿色荧光,而N1-euchIL-10F表达的荧光较弱,且胞浆内含量很低。结论去除信号肽利于chIL-10基因在体外真核细胞胞浆的表达。

关键词：鸡白细胞介素-10 信号肽真核表达 CHO-K1细胞

鸭肠炎病毒在HBK-SPF鸭B3系和B1系的体外致病性的比较

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鸭肠炎病毒在HBK-SPF鸭B3系和B1系的体外致病性的比较

鸭MHC基因型影响鸭肠炎病毒的体外增殖能力

中国畜牧兽医学会生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十二次学术研讨会

作者：王兴童牛银杰彭蔚宇王丽廷孟兴赵丽丽韩凌霞陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学创新团队山西农业大学动物科技学院

主要组织相容性复合体(MHC)是紧密连锁、富含多种免疫相关蛋白的基因簇,其基因型对特定疫病的致病性或免疫应答水平密切相关。HBK-B1和B3鸭是以中国禽类实验动物种子选育的无特定病原体(SPF)绍兴麻鸭HBK-SPF鸭为基础,根据毗邻MHCⅠ类分... 详细信息

主要组织相容性复合体(MHC)是紧密连锁、富含多种免疫相关蛋白的基因簇,其基因型对特定疫病的致病性或免疫应答水平密切相关。HBK-B1和B3鸭是以中国禽类实验动物种子选育的无特定病原体(SPF)绍兴麻鸭HBK-SPF鸭为基础,根据毗邻MHCⅠ类分子的抗原转运相关蛋白(TAP)基因的多态性选育成功的4个纯系SPF鸭群,本研究将DEV疫苗株C-KCE同DEV人工感染鸭血清均2倍倍比稀释后,将不同浓度的血清和病毒棋盘法混合接种于B3系和B1系鸭原代鸭胚成纤维细胞(DEF),96 h后比较DEV特异性致病变效应(CPE),对相同稀释度但病变程度有差异的8个孔进行实时荧光定量PCR,检测DEV拷贝数。结果血清抗体和病毒相同浓度时,B3系DEF出现的CPE比B1的严重,且被检孔的平均病毒拷贝数(8.38E×10)大于B1(1.89E×10)品系。被相同浓度血清抗体中和时,B3系的病毒含量更高,即增殖更快。本研究表明鸭的MHC基因型影响鸭肠炎病毒的复制能力,并且B3系HBK鸭比B1系更敏感,HBK单倍型鸭是开展水禽病免疫遗传学研究的良好模式动物。

关键词：鸭主要组织相容性复合体 HBK-SPF鸭鸭肠炎病毒敏感性

来源： cnki会议评论

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鸭MHC基因型影响鸭肠炎病毒的体外增殖能力

第十一届全国免疫学学术大会

背景/目的:主要组织相容性复合体(MHC)是紧密连锁、富含多种免疫相关蛋白的基因簇,其基因型对特定疫病的致病性或免疫应答水平密切相关。HBK-B1、B2、B3和B4鸭是以中国禽类实验动物种子选育的无特定病原体(SPF)绍兴麻鸭HBK-SPF鸭为基础... 详细信息

背景/目的:主要组织相容性复合体(MHC)是紧密连锁、富含多种免疫相关蛋白的基因簇,其基因型对特定疫病的致病性或免疫应答水平密切相关。HBK-B1、B2、B3和B4鸭是以中国禽类实验动物种子选育的无特定病原体(SPF)绍兴麻鸭HBK-SPF鸭为基础,根据毗邻MHC I类分子的抗原转运相关蛋白(TAP)基因的多态性选育成功的四个纯系SPF鸭群,具有MHC单倍型的遗传学特征。利用体内攻毒试验,B3系雏鸭对重组鸭肠炎病毒(DEV)载体表达的禽流感疫苗免疫产生的血凝抑制(HI)抗体明显高于其它3个品系。利用源自B3系和B1系HBK鸭的原代鸭胚成纤维细胞(DEF),体外比较对鸭肠炎病毒的复制能力的差异,筛选适合水禽免疫遗传学研究的实验动物。方法:取13日龄B1和B3系鸭胚各2枚,分别制备鸭胚成纤维细胞(DEF),将次代细胞各培养至2块96孔细胞培养板。将DEV疫苗株C-KCE同DEV人工感染鸭血清均2倍倍比稀释后,将不同浓度的血清和病毒棋盘法混合接种于细胞板。96 h后逐孔观察和比较DEV特异性致病变效应(CPE)。选择相同稀释度但病变程度有差异的孔(共8个)进一步进行实时荧光定量PCR,检测DEV拷贝数。结果:与无病毒或血清的对照孔相比,所有接种了病毒的细胞孔都表现出圆缩、空泡变性和脱落的特征性病变。血清抗体和病毒相同浓度时,B3系DEF出现的CPE比B1的严重,且被检孔的平均病毒拷贝数(8.38E×105)大于B1(1.89E×105)品系。被相同浓度血清抗体中和时,B3系的病毒含量更高,即增殖更快。结论:鸭的MHC基因型影响鸭肠炎病毒的复制能力,并且B3系HBK鸭比B1系更敏感,是开展水禽病免疫遗传学研究的良好模式动物。

关键词：鸭主要组织相容性复合体鸭肠炎病毒敏感性

来源： cnki会议评论

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Bnk蛋白可作为鸡NK细胞的表面标记

Bnk蛋白可作为鸡NK细胞的表面标记

原核系统表达的鸡白细胞介素-10的鼠抗血清体内研究的初步分析

第十二届全国免疫学学术大会

作者：韩凌霞王兴童尹蕾吴少莲王丽廷杨超孟兴佟相慧陈洪岩中国农业科学院哈尔滨兽医研究所

研究背景:自然杀伤(NK)细胞具有先天杀伤病毒感染细胞和转化细胞的功能,在未经抗原刺激的情况下能强表达IFN-γ,但目前鸡NK细胞的表面标记尚未鉴定,主要以来自14日龄鸡胚脾细胞经rIL-2刺激后的MHCI+CD3-混合细胞作为鸡NK细胞。C-型凝集... 详细信息

研究背景:自然杀伤(NK)细胞具有先天杀伤病毒感染细胞和转化细胞的功能,在未经抗原刺激的情况下能强表达IFN-γ,但目前鸡NK细胞的表面标记尚未鉴定,主要以来自14日龄鸡胚脾细胞经rIL-2刺激后的MHCI+CD3-混合细胞作为鸡NK细胞。C-型凝集素样受体蛋白BNK具有与小鼠和人NK细胞受体相类似的结构,可能是鸡NK细胞的表面标记。研究目的:鉴定鸡BNK蛋白能否作为鸡NK细胞的表面标记。方法:以原核表达的鸡BNK蛋白为免疫原制备获得2株特异性单抗3C10和1F12。将14日龄鸡胚脾细胞经rIL-2刺激48 h后,利用流式细胞术分选细胞,结果CD3、3C10和1F12阳性细胞的比例分别为2.22±1.31%、46.48±6.23%和38.34±9.16%;利用乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒检测,检测3C10和1F12分选细胞对小鼠NK细胞靶细胞yac-1的特异性杀伤(效靶比为20:1),特异性杀伤率分别为42.2%和37.8%;利用实时荧光定量PCR探针法比较MHCⅠ类分子重链、3C10和1F12阳性细胞表达IFN-γmRNA的水平,结果表明每百万个细胞中,IFN-rmRNA的拷贝数分别为3.94、2549.52和2650.34个。结论:在目前公认的鸡NK细胞制备来源的14日龄鸡胚脾细胞中,含有大量表面表达BNK蛋白的细胞,这些细胞能特异性杀伤小鼠NK细胞靶细胞yac-1,天然大量表达IFN-r,符合NK细胞的生物学特征,表明BNK蛋白可以作为鸡NK细胞的表面标记。

关键词：鸡自然杀伤细胞 C-型凝集素样受体蛋白BNK 流式细胞术特异性杀伤 IFN-γ

来源： cnki会议评论

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实验动物科学 2017年第3期34卷 1-5页

作者：王丽廷王兴童杨柳彭蔚宇孟兴陈洪岩高文伟韩凌霞山西农业大学动物科技学院太谷030801 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室实验动物与比较医学团队黑龙江省实验动物与比较医学重点实验室哈尔滨150069

目的获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性。方法采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原... 详细信息

目的获得鸡白介素-10(chIL-10)的原核表达产物,制备鼠抗血清,分析与真核系统表达的chIL-10的反应原性。方法采用RT-PCR从经脂多糖(LPS)体外刺激的鸡外周血淋巴细胞中扩增编码成熟IL-10的基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+),成功构建原核重组质粒pET-chIL-10;转化至大肠杆菌DH5α中IPTG诱导表达,切下含有重组蛋白的SDS-PAGE胶条,免疫制备鼠抗血清;分别与包含信号肽和去除信号肽的chIL-10真核表达细胞系CHO-euchIL-10F和CHO-euchIL-10M进行间接免疫荧光抗体试验(IFA)和蛋白免疫印迹试验(Western blot),验证有无反应性。结果成功构建chIL-10的原核表达载体pET-chIL-10,获得了高效价的鼠抗血清,能与表达chIL-10的真核细胞系反应。结论原核表达的chIL-10特异性鼠抗血清将能用于体内研究的检测。

关键词：鸡白介素-10 原核表达鼠抗血清体内实验

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蝇？蜂？——南瓜实蝇与蜜蜂的观察研究

发明与创新(中旬刊) 2025年第1期 20-23页

作者：吴俊廷湖南省娄底市第三完全小学

去年夏天一个炎热的下午,我在客厅悠闲地吃着西瓜。突然,厨房里传来了妈妈的尖叫声。我急忙跑过去,询问发生了什么事情。妈妈指着散落在地上的苦瓜片说:“苦瓜里面有虫!”我蹲下身子,仔细一看,苦瓜里真的有几条蠕动的蛆!我很惊讶:外表...

去年夏天一个炎热的下午,我在客厅悠闲地吃着西瓜。突然,厨房里传来了妈妈的尖叫声。我急忙跑过去,询问发生了什么事情。妈妈指着散落在地上的苦瓜片说:“苦瓜里面有虫!”我蹲下身子,仔细一看,苦瓜里真的有几条蠕动的蛆!我很惊讶:外表完好的苦瓜里怎么会有蛆呢?我连忙拨通外婆的电话,和她讲述了我的发现,外婆听后不以为意地说:“这有什么大惊小怪的,就是蜂子下在瓜里的小宝宝嘛!”外婆说的“蜂子”是蜜蜂吗?我见过蜜蜂的幼虫,它可不是长这样。那么,“蜂子”究竟是什么呢?

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