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8-Br-cAMP对Eca-109细胞c-myc,wtp53,iNOS基因和EGFR表达的影响

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郑州大学学报（医学版） 2003年第5期38卷 669-672页

作者：王红梅宫璀璀吴景兰王一菱郑州大学第一附属医院检验科郑州450052 解放军第153医院检验中心郑州450042 郑州大学分子细胞生物学研究中心郑州450052

目的 :探讨 8 Br cAMP对Eca 10 9细胞c myc、wtp5 3、iNOS基因和EGFR表达的影响。方法 :将贴壁培养的Eca 10 9细胞随机分为 2组 :①实验组 :加 8 Br cAMP至终浓度为 2× 10 -5mol/L ,培养 2 4h ;②对照组 :不加 8 Br cAMP ,培养 2 4h。... 详细信息

目的 :探讨 8 Br cAMP对Eca 10 9细胞c myc、wtp5 3、iNOS基因和EGFR表达的影响。方法 :将贴壁培养的Eca 10 9细胞随机分为 2组 :①实验组 :加 8 Br cAMP至终浓度为 2× 10 -5mol/L ,培养 2 4h ;②对照组 :不加 8 Br cAMP ,培养 2 4h。对 2组的细胞涂片和硝酸纤维素膜 (NCM)标本进行c myc、wtp5 3、iNOS基因和EGFR表达检测 ,并对扫描数值进行统计学处理。结果 :原位杂交及免疫组化反应信号皆定位于Eca 10 9细胞的胞质 ,扫描数值显示 :①c mycmRNA :实验组为 3.38± 0 .99,对照组为 5 .18± 1.39;②wtp5 3mRNA :实验组为 2 .74± 0 .83,对照组为 0 .38±0 .2 7;③iNOSmRNA :实验组为 4 .5 2± 0 .74 ,对照组为 2 .6 3± 0 .13;④EGFR IR :实验组为 2 .37± 1.0 5 ,对照组为 4 .38±0 .4 8。以上实验组与对照组比较差异有统计学意义 (P均 <0 .0 5 )。结论 :c myc、wtp5 3和NO均可参与 8 Br

关键词： c-myc基因 wtp53基因 iNOS基因 EGFR 8-Br-cAMP Eca-109细胞癌细胞

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冰冻切片抗体在石蜡切片免疫组化中的应用

郑州大学学报（医学版） 2003年第5期38卷 687-688页

作者：赵培荣王一菱吴景兰宫璀璀郑州大学分子细胞生物学研究中心郑州450052 解放军第153医院检验中心郑州450042

目的 :探讨经抗原系列修复后冰冻切片抗体应用于石蜡切片的免疫组化技术。方法 :在常规免疫组化的基础上 ,于TritonX 10 0处理后 ,用 0 .1mol/L的甘氨酸 4℃过夜或 0 .2mol/L的甘氨酸室温 2h。 0 .0 1mol/L枸橼酸缓冲液pH 6 .0 95～ 98... 详细信息

目的 :探讨经抗原系列修复后冰冻切片抗体应用于石蜡切片的免疫组化技术。方法 :在常规免疫组化的基础上 ,于TritonX 10 0处理后 ,用 0 .1mol/L的甘氨酸 4℃过夜或 0 .2mol/L的甘氨酸室温 2h。 0 .0 1mol/L枸橼酸缓冲液pH 6 .0 95～ 98℃微波 10min进行组织抗原修复。观察比较GDNF ,Caspase 3和XRCC1冰冻切片抗体在石蜡切片中的免疫反应性 (IR)。结果 :经过上述条件处理后 ,石蜡切片中均出现 3种冰冻抗体的IR阳性。其中GDNFIR反应性优于Caspase 3和XRCC1 IR ,但 3种冰冻抗体在冰冻切片或滴片中的IR均高于石蜡切片。结论 :石蜡切片经系列抗原修复后免疫反应有一定改善 ,但与应用的抗体类型有关。

关键词：组织抗原修复免疫组织化学冰冻切片抗体石蜡切片

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原位DNA结合蛋白显示技术的改进

郑州大学学报（医学版） 2003年第5期38卷 696-698页

作者：丁一赵培荣吴景兰张莹王一菱郑州大学分子细胞生物学研究中心郑州450052

目的 :探讨DNA结合蛋白定位技术的改进。方法 :以左旋咪唑 /酒精先消除细胞的内源性碱性磷酸酶(AP) ,再分别以DNase和RNase消除细胞内源性核酸 ,应用低盐浓度的杂交液预杂交后再加特异DNA的标记探针 ,以链霉亲和素SA AP中介 ,最终以四... 详细信息

目的 :探讨DNA结合蛋白定位技术的改进。方法 :以左旋咪唑 /酒精先消除细胞的内源性碱性磷酸酶(AP) ,再分别以DNase和RNase消除细胞内源性核酸 ,应用低盐浓度的杂交液预杂交后再加特异DNA的标记探针 ,以链霉亲和素SA AP中介 ,最终以四氮唑盐 /5溴 4 氯 3 吲哚磷酸 (NBT/BCIP)作为底物 ,37℃下显色。结果 :DBP阳性信号呈紫色细颗粒 ,主要定位于胞核。结论

关键词： DNA结合蛋白定位技术方法染色过程

8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞凋亡中P38和Caspase-3表达的影响

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郑州大学学报（医学版） 2003年第5期38卷 672-674页

作者：王红梅郑乃刚吴景兰王一菱宫璀璀郑州大学第一附属医院检验科郑州450052 郑州大学分子细胞生物学研究中心郑州450052 解放军第153医院检验中心郑州450042

目的 :探讨 8 Br cAMP和槲皮素对Eca 10 9细胞凋亡中P38、Caspase 3表达的影响。方法 :将贴壁培养的Eca 10 9细胞随机分为 3组 :①对照组 :只加DMEM(Sigma)培养液 (含体积分数 10 %胎牛血清 )培养 4 8h。②Br组 :终浓度为 2× 10 -5mol/... 详细信息

目的 :探讨 8 Br cAMP和槲皮素对Eca 10 9细胞凋亡中P38、Caspase 3表达的影响。方法 :将贴壁培养的Eca 10 9细胞随机分为 3组 :①对照组 :只加DMEM(Sigma)培养液 (含体积分数 10 %胎牛血清 )培养 4 8h。②Br组 :终浓度为 2× 10 -5mol/L 8 Br cAMP的培养液培养 4 8h。③Q组 :终浓度为 4 3μmol/L槲皮素的培养液培养 4 8h。对以上 3组细胞以TUNEL法染色计数细胞凋亡率。以免疫组化方法观察 3组细胞的P38MAPK IR和Caspase 3 IR反应性。结果 :Br组及Q组细胞凋亡率高于对照组 ;Br组及Q组细胞的P38MAPK IR高于对照组 ;Br组及Q组细胞的Caspase 3 IR亦高于对照组。P38MAPK IR与Caspase 3 IR呈正相关。P均 <0 .0 5。结论 :P38MAPK及Caspase 3参与了 8 Br cAMP及槲皮素诱导的Eca 10

关键词： P38 MAPK Caspase-3 细胞凋亡 Eca-109细胞 8-Br-cAMP 槲皮素

8-Br-cAMP对Eca-109细胞凋亡的影响

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郑州大学学报（医学版） 2004年第2期39卷 232-235页

作者：王红梅郑乃刚吴景兰王一菱宫璀璀郑州大学第一附属医院检验科郑州450052 郑州大学分子细胞生物学研究中心郑州450052 解放军153中心医院检验科郑州450042

目的:探讨8-Br-cAMP对人食管癌Eca-109细胞凋亡的影响及其相关基因表达的变化。方法:采用TUNEL法检测细胞凋亡,应用原位杂交、组织化学、免疫组织化学以及RNA和蛋白质斑点印迹技术相对定量,观察8-Br-cAMP对Eca-109细胞凋亡相关基因及凋... 详细信息

目的:探讨8-Br-cAMP对人食管癌Eca-109细胞凋亡的影响及其相关基因表达的变化。方法:采用TUNEL法检测细胞凋亡,应用原位杂交、组织化学、免疫组织化学以及RNA和蛋白质斑点印迹技术相对定量,观察8-Br-cAMP对Eca-109细胞凋亡相关基因及凋亡效应分子表达的影响。结果:8-Br-cAMP作用48 h后可显著诱导Eca-109细胞凋亡,并见到野生型(wt)p53及iNOS基因表达上调,bcl-2、c-myc基因表达下调,iNOS活性增强,Fas-IR减弱。结论:8-Br-cAMP通过调控凋亡相关基因及凋亡效应分子的表达,使之相互作用、相互协同,诱导人食管癌Eca-109细胞的凋亡。其中,wtp53在该凋亡的诸多因素中起着关键作用。

关键词：细胞凋亡 8—Br—cAMP Eca—109细胞系原位杂交斑点印迹

8-Br-cAMP对人食管癌Eca-109细胞生长相关基因表达的影响

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解剖学报 1999年第3期30卷 227-229,I009页

作者：陈奎生郑乃刚吴景兰丁一王一菱河南医科大学分子细胞生物学研究中心河南临床检验中心河南医科大学病理解剖教研室暨河南省肿瘤病理重点实验室

目的探讨８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对人Ｅｃａ－１０９细胞与生长相关基因表达的影响。方法体外培育的人食管癌Ｅｃａ－１０９细胞受８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ处理后，用原位杂交、免疫组织化学及ＲＮＡ、蛋白质斑点印迹技术研究了与细胞生长相关的... 详细信息

目的探讨８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ对人Ｅｃａ－１０９细胞与生长相关基因表达的影响。方法体外培育的人食管癌Ｅｃａ－１０９细胞受８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ处理后，用原位杂交、免疫组织化学及ＲＮＡ、蛋白质斑点印迹技术研究了与细胞生长相关的几种基因的表达变化。结果８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ可减弱ＥＧＦＲ、Ｈ－ｒａｓ、ｃ－ｍｙｃ、突变型ｐ５３等基因的表达，增强野生型ｐ５３基因表达和ｐ２１ＷＡＦ１蛋白的表达。结论８－Ｂｒ－ｃＡＭＰ可通过影响有关信号传递和细胞周期进程基因表达而抑制细胞生长。

关键词： 8-Br-cAMP 基因表达 Eca-109细胞系食管肿瘤

人胎儿胸腺内CD80和癌胚抗原的表达及定位

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解剖学报 2009年第2期40卷 307-311页

作者：曹阳宫璀璀吴景兰王一菱郑乃刚高峰解放军第153中心医院检验科郑州450042 郑州大学组织学胚胎学教研室郑州450052 郑州大学肿瘤基础学研究室郑州450001 河南省郑州大学医药科学研究院郑州450052

目的探讨人胎儿胸腺内CD80和癌胚抗原（CEA）的表达水平及定位与胎儿发育的关系。方法自附属医院妇产科收集流产死亡的胎儿12例,其中,小于4个月的4例列为早期,5个月的8例列为晚期。早晚期标本各分为两等份,一份制备冷冻切片进行HE染色、... 详细信息

目的探讨人胎儿胸腺内CD80和癌胚抗原（CEA）的表达水平及定位与胎儿发育的关系。方法自附属医院妇产科收集流产死亡的胎儿12例,其中,小于4个月的4例列为早期,5个月的8例列为晚期。早晚期标本各分为两等份,一份制备冷冻切片进行HE染色、α-醋酸萘酯酶（ANAE）组织化学染色、CD80及CEA免疫组织化学染色,另一份以Trizol提取蛋白后进行CD80的免疫印迹和CEA的酶联免疫吸附测定（ELISA）检测。结果早期胎儿胸腺髓质发育差,晚期胎儿胸腺CD80阳性网状上皮细胞可分为6型：Ⅰ型扁平细胞分布于被膜内面和小梁表面;Ⅱ型呈小星形分布于皮质内;Ⅲ型及Ⅳ型呈扁平状,位于皮髓质交界处;Ⅴ型呈大星形状,突起多而细长相连成网状;Ⅵ型位于哈氏小体。在胎儿胸腺髓质网孔处可见ANAE点型（CD4＋CD8-）和散粒型（CD4-CD8＋）细胞各呈丛状分布。早期组CEA阳性分布于髓质上皮细胞和哈氏小体,晚期组CEA阳性更集中于哈氏小体。CD80的免疫印迹和CEA的ELISA检测皆显示晚期组表达高于早期组。结论研究结果提示,人胎儿胸腺内CD80和CEA的表达及定位与胎儿胸腺细胞的发育及功能密切相关。

关键词：胸腺 CD80 癌胚抗原 α-醋酸萘酯酶免疫组织化学免疫印迹法人胎儿

针刺对小鼠腹腔巨噬细胞的热休克蛋白、诱导性一氧化氮合酶及其基因表达的效应

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解剖学报 1999年第3期30卷 279-281,I020页

作者：王一菱郑乃刚吴景兰王红梅丁一河南医科大学分子细胞生物学研究中心河南省临床检验中心

目的研究针刺对小鼠腹腔巨噬细胞的热休克蛋白（ＨＳＰ）、诱导性一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）及其ｍＲ－ＮＡ表达的效应。方法将２４只昆明小鼠腹腔注射无菌石蜡油后，随机分为３组：电针（ＥＡ）组、对照１（Ｃ１）组和对照２（Ｃ２）组... 详细信息

目的研究针刺对小鼠腹腔巨噬细胞的热休克蛋白（ＨＳＰ）、诱导性一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）及其ｍＲ－ＮＡ表达的效应。方法将２４只昆明小鼠腹腔注射无菌石蜡油后，随机分为３组：电针（ＥＡ）组、对照１（Ｃ１）组和对照２（Ｃ２）组。将３组收集的腹腔巨噬细胞制备成玻片和硝酸纤维素膜（ＮＣＭ）两种标本，应用原位杂交、免疫细胞化学、细胞化学及斑点印迹技术检测ＨＳＰ７０、ｉＮＯＳ及ｉＮＯＳｍＲＮＡ。结果ＨＳＰ７０定位于巨噬细胞的胞质和胞核；ｉＮＯＳｍＲＮＡ及ｉＮＯＳ均定位于巨噬细胞的胞质；３组的ｉＮＯＳｍＲＮＡ、ｉＮＯＳ、ＨＳＰ７０的斑点印迹的扫描数值均为ＥＡ组＞Ｃ２组＞Ｃ１组（Ｐ＜０．０１）。结论电针可显著提高小鼠腹腔巨噬细胞的ＨＳＰ７０、ｉＮＯＳ及ｉＮＯＳｍＲ－ＮＡ表达。

关键词：巨噬细胞一氧化氮合酶热休克蛋白电针疗法

8-Br-cAMP和槲皮素对Eca-109细胞核基质蛋白的影响

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郑州大学学报（医学版） 2003年第5期38卷 689-691页

作者：张钦宪张莹吴景兰苏安英丁一王一菱郑州大学分子细胞生物学研究中心郑州450052 河北工程学院医学部邯郸056029

目的 :探讨 8 Br cAMP和槲皮素对Eca 10 9细胞核基质蛋白的影响。方法 :将贴壁培养的Eca 10 9细胞随机分成 3组 ,Br组 :加 8 Br cAMP至终浓度为 2× 10 5mol/L ;Q组 :加槲皮素至终浓度为 4 3μmol/L ;C组 :不加任何药物 ,只加入新培养... 详细信息

目的 :探讨 8 Br cAMP和槲皮素对Eca 10 9细胞核基质蛋白的影响。方法 :将贴壁培养的Eca 10 9细胞随机分成 3组 ,Br组 :加 8 Br cAMP至终浓度为 2× 10 5mol/L ;Q组 :加槲皮素至终浓度为 4 3μmol/L ;C组 :不加任何药物 ,只加入新培养液培养。同时培养 4 8h ,应用SDS PAGE技术分析 3组细胞核基质蛋白成分。结果 :实验组 (Br组与Q组 )与对照组 (C组 )比较 ,相对分子质量 6 4 0 0 0、6 6 0 0 0、5 80 0 0为增加的条带 ,14 0 0 0、170 0 0、180 0 0为增强的条带 ,92 0 0 0是减弱的条带。 2个实验组相比 ,以Br组变动显著。结论 :8 Br cAMP和槲皮素可以诱导Eca 10 9细胞核基质蛋白成分改变 ,可能对肿瘤细胞基因表达调控。

关键词：食管癌核基质 8-Br-cAMP 槲皮素 SDS-PAGE