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侵染新疆甜瓜的ZYMV衣壳蛋白基因克隆及其序列分析

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农业生物技术学报 2016年第5期24卷 718-728页

作者：李继洋杨渡韩盛何丹玉山江·麦麦提新疆农业大学农学院新疆农业科学院植物保护研究所/农业部西北荒漠绿洲作物有害生物综合治理重点实验室

新疆作为中国有名的瓜果之乡,其瓜类不仅成为其中最具代表性的品牌也日益成为农民增收致富的经济支柱产业。然而近年来由于新疆瓜果日益受到病毒病威胁,严重时造成大面积减产甚至绝收,大幅度制约了农民生产积极性和生活水平的提高。小... 详细信息

新疆作为中国有名的瓜果之乡,其瓜类不仅成为其中最具代表性的品牌也日益成为农民增收致富的经济支柱产业。然而近年来由于新疆瓜果日益受到病毒病威胁,严重时造成大面积减产甚至绝收,大幅度制约了农民生产积极性和生活水平的提高。小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)是其中比较具有代表性的病毒,为了对新疆不同主栽地区甜瓜(Cucumis melo)ZYMV进行生物防治和抗病毒甜瓜的研究。本研究利用同源克隆的方法,扩增获得了新疆19个样点ZYMV分离物衣壳蛋白(coat protein,CP)基因全长序列,ZYMV分离物CP基因全长介于1 080~1 180 bp,编码253~301个氨基酸,蛋白质大小约33 k D。序列比对发现,ZYMV核酸序列的3’和5’非编码区末端保守性较低,编码区及其周围序列保守性较高,氨基酸序列的N端保守性高于C端。ZYMV同源性比对结果发现,病毒属于同一ZYMV基因型。通过核酸序列构建的分子进化树可以将ZYMV分为4个亚组,亚组分离依据符合地区分布特性。根据对蛋白质理化性质,包括蛋白质的动力学、化学和热力学稳定性分析得出,ZYMV均属于稳定性蛋白。结合新疆夏季平均降水量和平均气温变化趋势发现,其与对应地区ZYMV CP的疏水性指数和脂溶性指数的变化趋势存在一定相关性。分析认为,不同地区ZYMV CP的稳定性存在一定的差异,这可能与新疆特殊的气候条件与分离物所处地理环境有关。本研究通过序列分析获得19个样点ZYMV CP核酸序列以及CP特征,为今后以RNA干扰技术或基因组编辑技术培育抗病毒甜瓜,进行生物农药研发等提供了基础的数据支持,同时为开展对植物病毒的致病机理以及探究环境与病毒传播机制的研究提供初期的研究方向。

关键词：新疆小西葫芦黄瓜花叶病毒(ZYMV) 克隆序列分析蛋白稳定性环境影响

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鲜杏采后病原菌鉴定及室内药剂筛选研究

新疆农业科学 2016年第5期53卷 866-876页

作者：韩盛玉山江.麦麦提潘俨车凤斌杨渡新疆农业科学院植物保护研究所/农业部西北荒漠绿洲作物有害生物综合治理重点实验室乌鲁木齐830091 新疆农业科学院农产品贮藏加工研究所乌鲁木齐830091

【目的】确定新疆杏采后病害的主要病原菌并筛选有效防治药剂。【方法】采集新疆伊犁、库车、喀什等地的李光杏、小白杏、色买提杏等鲜杏品种,在室温或4℃条件下贮藏,对贮藏期采后病害的病原菌进行分离鉴定,针对主要病原菌进行室内药剂... 详细信息

【目的】确定新疆杏采后病害的主要病原菌并筛选有效防治药剂。【方法】采集新疆伊犁、库车、喀什等地的李光杏、小白杏、色买提杏等鲜杏品种,在室温或4℃条件下贮藏,对贮藏期采后病害的病原菌进行分离鉴定,针对主要病原菌进行室内药剂筛选。【结果】引起新疆三种鲜杏采后果实病害的病原菌有:粉红聚端孢霉(Trichothecium roseum)、链格孢霉(Alternaria alternata)、黑根霉(Rhizopus nigricans)、青霉(Penicillium freguentans)、灰葡萄孢霉(Botrytis cinerea)、毛霉(Mucor spp.)、黄曲霉(Aspergillus flavus)、镰刀菌(Fusarium oxysporum)、黑曲霉(Aspergillus spp.)等9种真菌,其中黑根霉、灰葡萄孢霉、链格孢霉、青霉和粉红聚端孢霉为主要病原菌。精油A 1 000倍液对所有供试病原菌都有很强的抑菌效果,其对青霉、灰葡萄孢霉、链格孢霉、黑根霉、毛霉、镰刀菌的抑菌率均为100%,对黑曲霉的抑菌率也达97.87%。4℃贮藏条件下,精油A 500倍液和1 000倍液处理的鲜杏贮藏25 d时,杏果实发病率分别为0%、1.67%,贮藏32 d后,精油A 500倍液和1 000倍液处理的鲜杏发病率分别为10%、20%,精油A 500倍液和1 000倍液处理可显著延长4℃条件下鲜杏的贮藏时间。【结论】黑根霉、灰葡萄孢霉、链格孢霉、青霉和粉红聚端孢霉为新疆鲜杏采后贮期主要病原菌,精油A可作为鲜杏采后病害的有效防治药剂。

关键词：杏采后病害病原菌鉴定药剂筛选

水稻转录因子OsHOX6过量表达及其对水稻根生长作用

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分子植物育种 2019年第19期17卷 6350-6355页

作者：玉山江·麦麦提杨渡韩盛 Inez Hortense Slamet-Loedin 新疆农业科学院植物保护研究所农业部西北荒漠绿洲作物有害生物综合治理重点实验室乌鲁木齐830091 国际水稻研究所作物育种和生物化学系转基因研究室菲律宾马尼拉DAPOBox7777

同源异型域-亮氨酸拉链(Home domain-leucine-zipper)蛋白是植物发育进程和应答外界环境胁迫信号作用的一类转录因子,OsHOX6基因是HD-ZipⅠ转录因子家族的一个成员。本研究利用RT-PCR技术,从水稻中克隆OsHOX6基因,并构建了以Oslea为启... 详细信息

同源异型域-亮氨酸拉链(Home domain-leucine-zipper)蛋白是植物发育进程和应答外界环境胁迫信号作用的一类转录因子,OsHOX6基因是HD-ZipⅠ转录因子家族的一个成员。本研究利用RT-PCR技术,从水稻中克隆OsHOX6基因,并构建了以Oslea为启动子的植物表达载体pCAMBIA2300-Oslea:OsHOX6,并以水稻未成熟胚作为材料,通过农杆菌介导法,获得OsHOX6基因过量表达的36株转基因植株。利用Southern杂交技术确定各个株系的拷贝数后,选出3个单拷贝株系与野生型植株,并对其进行干旱胁迫研究。结果表明,在干旱胁迫条件下,OsHOX6过量表达植株的根长度、深度、密度明显高于野生型,株高与野生型没有明显的差异。正常灌水条件下转基因植株的表型与野生型没有明显的差异。研究结果说明,Oslea启动子是干旱胁迫诱导性启动子,OsHOX6基因对水稻根生长起促进作用,但其调控水稻根生长发育中和提高植物抗旱、抗盐等抗逆性机理有待进一步研究。

关键词：水稻(Oryza sativa L.) 转录因子 OsHOX6 基因过量表达

一氧化氮(NO)和湿度因子对哈密瓜采后耐冷性的影响

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现代食品科技 2019年第7期35卷 66-75页

作者：王霞魏佳张政玉山江·麦麦提胡江伟吴斌新疆农业大学食品科学与药学学院新疆乌鲁木齐830052 新疆农业科学院农产品贮藏加工研究所新疆乌鲁木齐830091

为探究湿度因子对一氧化氮(NO)提高哈密瓜采后耐冷性效果的影响,本文采用60μL/L NO在低湿(LH:35%~45%)、中湿(MH:65%~75%)和高湿(HH:90%~99%)条件下进行熏蒸处理。研究贮藏温度3℃条件下对哈密瓜采后冷害及品质参数变化的影响。结果表... 详细信息

为探究湿度因子对一氧化氮(NO)提高哈密瓜采后耐冷性效果的影响,本文采用60μL/L NO在低湿(LH:35%~45%)、中湿(MH:65%~75%)和高湿(HH:90%~99%)条件下进行熏蒸处理。研究贮藏温度3℃条件下对哈密瓜采后冷害及品质参数变化的影响。结果表明:在不同湿度熏蒸条件下,NO均能延缓哈密瓜采后冷害的发生和品质劣变。低湿度因子为35%~45%时可以显著提高哈密瓜采后贮藏过程的耐冷性,与对照相比,NO处理组冷害推迟5 d发生,贮藏30 d时,冷害指数最低,仅为40.00%;贮藏过程中,NO处理组果实品质保持效果较好,硬度下降速度缓慢,为17.07 N,仅比贮藏前下降了29.08%,细胞膜渗透率只上升了24.11%;能有效延缓果实品质中可滴定酸、抗坏血酸含量的下降,维持较高的可溶性固形物含量;NO处理可以降低呼吸速率和乙烯释放量,延迟呼吸高峰和乙烯高峰的出现,且峰值比对照低了33.80%和27.04%,从而减缓果实软化进程,有效延长哈密瓜的贮藏时间。明确了湿度因子是影响NO熏蒸效果的主要因素之一,在低湿度35%~45%条件熏蒸,NO可以更好的提高哈密瓜果实的耐冷性,保持较好的贮藏品质。

关键词：一氧化氮湿度因子品质冷害哈密瓜

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甜瓜叶脉坏死病毒病在新疆发生与分布

新疆农业科学 2017年第12期54卷 2262-2266页

作者：玉山江.麦麦提杨渡韩盛阿米乃姆.麦麦提古勤生农业部西北荒漠绿洲作物有害生物综合治理重点实验室/新疆农业科学院植物保护研究所乌鲁木齐830091 乌什县依麻木农业技术推广站新疆乌什83406 河南省果树瓜类生物学重点实验室/中国农业科学院郑州果树研究所郑州450009

【目的】调查与诊断新疆哈密瓜主栽区甜瓜叶脉坏死病毒病,研究该病在甜瓜种植区的发生与分布状况,为鉴别与防治甜瓜叶脉坏死病毒病提供方法与依据。【方法】摩擦接菌法,对健康的哈密瓜植株进行侵染,用透射电子显微镜,分别观察大田采集... 详细信息

【目的】调查与诊断新疆哈密瓜主栽区甜瓜叶脉坏死病毒病,研究该病在甜瓜种植区的发生与分布状况,为鉴别与防治甜瓜叶脉坏死病毒病提供方法与依据。【方法】摩擦接菌法,对健康的哈密瓜植株进行侵染,用透射电子显微镜,分别观察大田采集感甜瓜叶脉坏死病毒病样品与人工侵染的哈密瓜植株叶片病原形态特征。【结果】摩擦接菌的哈密瓜植株发病症状与大田一致,通过镜检,确定新疆哈密瓜主栽区的病害是香甜瓜叶脉坏死病毒Melon vein necrosis virus(MVNV),病原是属于香石竹潜隐病毒属(Carmovirus)、属于线形病毒科(Flex iv iridae)。该病在新疆甜瓜主栽区均有发生,不同地区或者同一地区不同年份该病的消长变化有很大的差异。【结论】甜瓜叶脉坏死病毒病在新疆瓜区普遍发生,在部分地区已导致甜瓜生产绝收,该病的发生流行规律待进一步研究。

关键词：甜瓜叶脉坏死病毒病摩擦接菌鉴定

侵染新疆甜瓜的黄瓜花叶病毒衣壳蛋白的克隆及其序列分析

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基因组学与应用生物学 2015年第12期34卷 2716-2727页

作者：李继洋何丹杨渡韩盛托乎提.艾买提玉山江.麦麦提新疆农业大学农学院乌鲁木齐830000 农业部西北荒漠绿洲作物有害生物综合治理重点实验室/新疆农业科学院植物保护研究所乌鲁木齐830091 新疆农业科学院墨玉农业试验站 830091

利用同源克隆的方法,扩增获得了新疆16个地区CMV病毒分离物CP蛋白基因全长序列,16个地区CMV病毒分离物CP蛋白基因全长约1 100 bp,最大开放阅读框介于630~690 bp,编码约210个氨基酸,蛋白质大小约25 k D。序列比对发现16个地区CMV病毒核... 详细信息

利用同源克隆的方法,扩增获得了新疆16个地区CMV病毒分离物CP蛋白基因全长序列,16个地区CMV病毒分离物CP蛋白基因全长约1 100 bp,最大开放阅读框介于630~690 bp,编码约210个氨基酸,蛋白质大小约25 k D。序列比对发现16个地区CMV病毒核酸序列的3’末端非编码区保守性较低,编码区及其5’端序列保守性较高,氨基酸序列的两端均存在不同数量的变异位点,根据CMV病毒同源性比对结果,16个地区病毒均属于同一CMV亚组。通过核酸序列构建的分子进化树分析发现,本研究分离获得的新疆16个地区CMV病毒衣壳蛋白基因序列则存在较高同源性且不同地区病毒分离物间相对遗传距离差异较小,16个地区与国内外15个地区病毒分离物相比均存在较大差异,统计分析显示,新疆CMV分离物组内核酸序列相对遗传距离差异不显著,相比参考序列,其差异则极显著,这一结果与聚类分析结果能够得到相互印证。分析认为,不同地区CMV病毒CP蛋白基因虽然与外来地区病毒基因存在较大差异,但由于本研究分离的新疆16个地区CMV病毒衣壳蛋白基因序列存在较高同源性且病毒因受不同理化条件的影响往往存在不同程度的变异率,因此认为,分离获得的新疆16个地区CMV病毒可能受地理位置、气候等因素的影响,其基因组中存在异于其他地区不同程度的变异趋势与类型,导致相应蛋白质稳定性也随之发生变化,从而更好的适应在新疆甜瓜植株上的侵染和定殖。

关键词：新疆 CMV 克隆序列分析序列差异性

新疆吐鲁番地区三种甜瓜病毒病的发生与分子鉴定

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新疆农业科学 2016年第10期53卷 1829-1842页

作者：韩盛韩成贵玉山江.麦麦提杨军杨渡新疆农业科学院植物保护研究所/农业部西北荒漠绿洲作物有害生物综合治理重点实验室乌鲁木齐830091 国家农业生物技术重点实验室/中国农业大学农学与生物技术学院北京100193 新疆葡萄瓜果开发研究中心新疆鄯善838201

【目的】明确吐鲁番地区西瓜花叶病毒(WMV)、小西葫芦黄化花叶病毒(ZYMV)、南瓜蚜传黄化病毒(CABYV)的发生情况及三种病毒不同来源分离物间的遗传差异。【方法】采用分子检测方法,确定吐鲁番地区甜瓜CABYV、WMV、ZYMV的侵染比例,应用序... 详细信息

【目的】明确吐鲁番地区西瓜花叶病毒(WMV)、小西葫芦黄化花叶病毒(ZYMV)、南瓜蚜传黄化病毒(CABYV)的发生情况及三种病毒不同来源分离物间的遗传差异。【方法】采用分子检测方法,确定吐鲁番地区甜瓜CABYV、WMV、ZYMV的侵染比例,应用序列比对及构建系统发育树分析三种病毒,吐鲁番分离物与国内外其他分离物间遗传差异。【结果】吐鲁番地区40份病毒病样中WMV、ZYMV、CABYV分子检测阳性比例分别达87.5%、50%、30%。ZYMV吐鲁番分离物等部分国内外分离物NIB与CP蛋白之间存在蛋白切割位点Q/S,WMV、ZYMV吐鲁番分离物等部分国内外分离物DAG基序的氨基酸序列均为DAG。依据系统发育树分析将三种病毒吐鲁番分离物分别划分至不同的亚组。【结论】WMV、ZYMV为吐鲁番地区甜瓜病毒病的优势毒原,CABYV为吐鲁番地区甜瓜病毒病的主要病毒之一。CABYV、WMV吐鲁番分离物与国内部分省份分离物亲缘关系更近,ZYMV吐鲁番分离物XJturufan2与东欧、中东国家的分离物亲缘关系更近,ZYMV吐鲁番分离物XJturufan与国内部分省份分离物及美国、西班牙、日本等国分离物亲缘关系更近。

关键词：西瓜花叶病毒小西葫芦黄化花叶病毒南瓜蚜传黄化病毒系统发育树 DAG基序

基于多重RT-PCR技术检测新疆甜瓜主栽区3种病毒病及其分布

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西北农业学报 2015年第8期24卷 123-130页

作者：李继洋杨渡韩盛何丹玉山江.麦麦提新疆农业大学乌鲁木齐830000 新疆农业科学院植物保护研究所乌鲁木齐830091

采用同源克隆的方法,从新疆感染病毒病的甜瓜中克隆获得WMV、CMV、ZYMV 3种病毒CP蛋白基因的部分片段。并基于单重RT-PCR扩增条件,采用单因素分析法,优化所获得多重RT-PCR的反应体系,利用多重PT-PCR体系对48份供试样品检测。结果表明,多... 详细信息

采用同源克隆的方法,从新疆感染病毒病的甜瓜中克隆获得WMV、CMV、ZYMV 3种病毒CP蛋白基因的部分片段。并基于单重RT-PCR扩增条件,采用单因素分析法,优化所获得多重RT-PCR的反应体系,利用多重PT-PCR体系对48份供试样品检测。结果表明,多重RT-PCR的检测结果与单重RT-PCR结果一致,说明构建的多重RT-PCR体系具有一定准确性和稳定性,可以用于WMV、CMV、ZYMV 3种病毒的快速检测、病源鉴定、阳性筛选等研究。通过分析甜瓜主要种植区病毒病的多重RT-PCR检测结果,初步得出新疆甜瓜主栽区3种病毒的分布现状与侵染形式,从而为病毒病的防治工作提供依据,以期对新疆瓜果生产中病毒防治,田间检测,流行病学调查以及抗病毒病甜瓜育种等研究提供相应的理论基础与依据。

关键词：新疆病毒病多重RT-PCR 分布

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干果贮藏害虫印度谷螟的研究

新疆农业科学 2016年第8期53卷 1474-1480页

作者：韩盛玉山江.麦麦提潘俨郑素慧车凤斌杨渡新疆农业科学院植物保护研究所/农业部西北荒漠绿洲作物有害生物综合治理重点实验室乌鲁木齐830091 新疆农业科学院农产品贮藏加工研究所乌鲁木齐830091

【目的】确定乌鲁木齐地区红枣、葡萄干、巴旦木、核桃、杏仁、杏脯等干果贮藏害虫种类及其优势种，研究优势贮藏害虫在乌鲁木齐的年生活史、不同食料对其发育历期的影响及自然天敌对其控制作用。【方法】采集不同来源贮藏害虫危害的干... 详细信息

【目的】确定乌鲁木齐地区红枣、葡萄干、巴旦木、核桃、杏仁、杏脯等干果贮藏害虫种类及其优势种，研究优势贮藏害虫在乌鲁木齐的年生活史、不同食料对其发育历期的影响及自然天敌对其控制作用。【方法】采集不同来源贮藏害虫危害的干果，鉴定其贮藏害虫种类及优势贮藏害虫，以印度谷螟幼虫接种葡萄干研究印度谷螟在乌鲁木齐的年生活史。采用初产印度谷螟卵接种红枣、葡萄干、玉米粉、黄豆粉、人工饲料等五种食料，分析五种食料对印度谷螟卵～成虫发育历期的影响。采集野生麦蛾茧蜂成蜂接种印度谷螟幼虫，分析麦蛾茧蜂对印度谷螟幼虫的控制作用。【结果】印度谷螟在供试五种干果样品中危害比例为100％，花斑皮蠹和锯谷盗仅在部分核桃、杏干、巴旦木等干果中有危害，印度谷螟一年可发生三代。28℃、40％RH培养条件下，人工饲料、黄豆粉、红枣、葡萄干、玉米粉卵一成虫发育历期分别为（30．66±5．02）d、（53．98±5．30）d、（59．91±5．48）d、（68．54±6．16）d、（74．61±9．24）d。野生麦蛾茧蜂对印度谷螟5～6龄老熟幼虫的单雌寄生率达（43．80±20．63）％，麻痹率达100％。【结论】乌鲁木齐地区干果优势贮藏害虫为印度谷螟，印度谷螟在乌鲁木齐一年可发生三代，五种食料培养条件下印度谷螟卵一成虫发育历期由长至短依次为玉米粉〉葡萄干〉红枣〉黄豆粉〉人工饲料，人工饲料可作为印度谷螟人工繁殖饲料，野生麦蛾茧蜂对印度谷螟幼虫具有较好的控制作用，其具备较好的生防应用前景。

关键词：印度谷螟年生活史麦蛾茧蜂发育历期