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重组CARDs TX蛋白的克隆、表达与纯化及多克隆抗体制备

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重组CARDs TX蛋白的克隆、表达与纯化及多克隆抗体制备

作者：牛健天津医科大学

学位级别：硕士

目的：肺炎支原体作为非典型肺炎的病原体,不仅能够引起急、慢性呼吸道感染,还可以引起包括皮肤、关节、中枢神经系统等一系列肺外系统疾病。目前,肺炎支原体的致病机制仍未被阐明。近期,研究者们发现一种名为社区获得性呼吸窘迫综合征... 详细信息

目的：肺炎支原体作为非典型肺炎的病原体,不仅能够引起急、慢性呼吸道感染,还可以引起包括皮肤、关节、中枢神经系统等一系列肺外系统疾病。目前,肺炎支原体的致病机制仍未被阐明。近期,研究者们发现一种名为社区获得性呼吸窘迫综合征毒素(CARDs TX)蛋白,其被认为是目前为止,肺炎支原体体内单一的毒力因子,在肺炎支原体的致病过程中起到了至关重要的作用。本课题拟构建pET28a-CARDs TX重组质粒,观察其在BL21中表达,并对CARDsTX蛋白进行纯化,利用纯化CARDs TX蛋白免疫动物制备抗血清,并对抗血清的效价和特异性进行检测,探讨其应用价值。方法：一、重组质粒的构建及鉴定：以肺炎支原体基因组为模板,利用PCR技术扩增出带有BamHI和Xhol I酶切位点的CARDs TX基因CMPN372),将其克隆入pET28a,经8次点突变(UGA-UGG)获得pET28a-CARDs TX重组质粒。对重组质粒分别进行酶切与测序鉴定。二、重组质粒的表达及鉴定：将重组质粒转入BL21中,利用IPTG诱导带有pET28a-CARDs TX重组质粒的BL21细菌表达目的蛋白,分别通过SDS-PAGE和Wetern Blot检测CARDs TX蛋白的表达并对目的蛋白可溶性进行鉴定。三、CARDs TX蛋白的纯化及鉴定：利用亲和层析技术(Ni-NTA)对CARDsTX进行纯化,并通过SDS-PAGE和Wetern Blot方法鉴定目的蛋白纯化情况。四、多克隆抗体的制备和鉴定：适应性饲养2只雄性大白兔2周后进行初次免疫,将1ml1mg/ml CARDs TX蛋白与等体积的弗氏完全佐剂充分混合,于大白兔皮下多点免疫。2周后,每隔1周用1ml1mg/ml蛋白与等体积的弗氏不完全佐剂混合,进行多点加强免疫。初次免疫前采取大白兔耳缘静脉血为对照,末次免疫两周后颈动脉取血。利用Western blot方法检测其效价及特异性,ELISA法检测抗血清的应用价值。结果：一、经酶切鉴定发现外源基因、载体及重组质粒均位于正确的大小位置。经测序鉴定,结果发现外源基因碱基序列与Genbank公布的MPN372碱基序列一致,且成功将8个UGA位点突变成UGG。二、对SDS-PAGE和Wetern Blot结果进行分析,我们发现在IPTG的诱导后,在68kDa的位置有蛋白量明显增多。同时也发现该蛋白为不可溶性蛋白。三、利用亲和层析技术对目的蛋白进行纯化并对纯化蛋白进行SDS-PAGE和Wetern Blot分析,结果发现,在68kDa的位置上有特异的目的条带。四、成功制备特异、高效价的重组CARDs TX蛋白多克隆抗体,且在肺炎支原体的检测中有较好的应用价值,为对肺炎支原体的预防、诊断和治疗提供了依据。结论：成功构建出pET28α-CARDs TX重组质粒。经IPTG诱导后,在BL21中CARDs TX蛋白的表达明显增加,并成功将CARDs TX蛋白纯化出来,并成功制备出高效价、特异的多克隆抗体。

关键词： CARDs TX 质粒构建点突变蛋白纯化多克隆抗体制备

阶梯式教学法在高校篮球选项课中的实验与应用研究

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阶梯式教学法在高校篮球选项课中的实验与应用研究

作者：牛健牡丹江师范学院

学位级别：硕士

伴随科学技术和社会的迅速发展,知识的更新周期逐渐缩短,世界已进入以人才为主体的新常态。在《国家中长期教育改革和发展规划纲要》中明确指出:“提高质量是高等教育发展的核心任务,是建设高等教育强国的基本要求”。教育部为了《国家... 详细信息

伴随科学技术和社会的迅速发展,知识的更新周期逐渐缩短,世界已进入以人才为主体的新常态。在《国家中长期教育改革和发展规划纲要》中明确指出:“提高质量是高等教育发展的核心任务,是建设高等教育强国的基本要求”。教育部为了《国家中长期教育改革和发展规划纲要》,促进学生的健康发展,颁布实施了《新课标》。要从主动适应学生个性发展和社会发展需要为基本出发点,坚持健康第一、以人为本的指导思想。本文通过文献资料法、专家访谈法、问卷调查法、实地测量法、数理统计法、实验法等研究方法,以牡丹江师范学院大学生公共体育普修课的2014级大学生和牡丹江大学2015级大学生为研究对象,运用“阶梯教学法”与“传统教学方法”进行比较,得出以下结果:1.阶梯教学法比传统教学法更能有效的激发学生运动参与的热情。对体育锻炼习惯、体育锻炼态度、体育锻炼行为这三个运动参与的维度都有很好的提升效果。2.阶梯教学法比传统教学法更能有效发展学生的运动技能。采用阶梯教学法的实验班在知识掌握及篮球基本技能方面,具有显著性意义。说明阶梯式教学法相对于常规教学法可以更好的使学生掌握运动技能。3.阶梯教学法在提高学生身体健康方面呈现不同的训练效果。受限于本次教学实验的课时,学生的身体形态、身体机能两方面变化并不显著,但在身体素质指标方面有显著性变化。4.阶梯教学法比传统教学法更能有培养学生心理健康和社会适应能力。采用阶梯教学法在感觉、情感、人际关系、自我管理四个维度均出现了非常显著性差异,这说明阶梯教学法在提高学生心理健康及增强社会适应领域优于传统教学法,值得肯定。5.阶梯教学法本着“分层施教”的理念,对不同水平层次的学生采用不同的指导方法,积极调动学生的主动性和自主性,尊重学生的主体地位,强调学生在学习过程中的能动作用,在教学效果评价方面优于传统教学法。

关键词：阶梯教学法普通高校篮球选项课

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美国新闻署：产生的理由消失的根据

美国新闻署：产生的理由消失的根据

作者：牛健吉林大学

学位级别：硕士

本文主要论述美国新闻署从建立到消亡的整个发展演变过程。在美国外交史上,对外宣传占有重要地位。在第二次世界大战中,进行对外宣传是美国面对纳粹德国的战争宣传所作出的反映,也是美国为了加速赢得战争的重要手段。本来随着战争的结束... 详细信息

本文主要论述美国新闻署从建立到消亡的整个发展演变过程。在美国外交史上,对外宣传占有重要地位。在第二次世界大战中,进行对外宣传是美国面对纳粹德国的战争宣传所作出的反映,也是美国为了加速赢得战争的重要手段。本来随着战争的结束,对外宣传机构应该被取消。但冷战的爆发使对外宣传又被重新提到了重要的地位。在此背景下,美国新闻署成立了。它在整个存在期间的变化也是随着冷战形势的变化而发生变化。当冷战结束,美国成为世界上唯一的超级大国,这时世界形势的变化使美国改变了对外宣传战略,也导致了美国新闻署的消亡。美国新闻署为对外宣传美国的外交政策,向外输出美国的价值观都起了十分重要的作用。本文是以美国新闻署的发展变化为主线,考察和分析它的主要特点和作用,进而得出它建立和消亡的原因。

关键词：冷战美国新闻署对外宣传文化交流

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实用阶梯英语听说教程商务篇 2

丛书名：新世纪高职高专英语专业类课程规划教材

2012年

作者：牛健曹淑萍总

本书以商贸为背景，以日常商务主要环节为主线编写，一个单元内容围绕一个主题编写，以单元主题为话题组织听说操练，通过完成教材设计的以主题为中心的教学任务实现对学生听说技能的重构和提高。

ISBN: (纸本)9787561157220

关键词：商务

来源：畅想之星图书光盘版（南... 评论

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数字化建筑设计模式与应用

辽宁工程技术大学学报（自然科学版） 2011年第6期30卷 880-883页

作者：杨姝扬牛健沈阳建筑大学建筑与规划学院辽宁沈阳110168 沈阳农业大学审计处辽宁沈阳110866

为了解读当代建筑不断地从模糊性、静态性逐渐转向可以超越视觉的想象性、动态性这一趋势,采用总结归纳的方法研究当代建筑呈现出多样性的本质因素。结果表明:建筑外部形体及内部功能呈现纷繁变化的原因是由于在设计过程中运用了数字化... 详细信息

为了解读当代建筑不断地从模糊性、静态性逐渐转向可以超越视觉的想象性、动态性这一趋势,采用总结归纳的方法研究当代建筑呈现出多样性的本质因素。结果表明:建筑外部形体及内部功能呈现纷繁变化的原因是由于在设计过程中运用了数字化设计中的衍生式设计、性能驱动式设计以及更高层次的一体化设计方法得以实现的。结合建筑实例加以分析,能够较为直观地阐述现代建筑多样形体产生的过程,可以为建筑设计人员更好地实现设计效果提供借鉴与参考。

关键词：数字化建筑衍生式设计性能驱动式设计一体化设计参数分析外部形体内部功能

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焦化副产对活性焦性质的影响

焦化副产对活性焦性质的影响

作者：牛健山西大学

学位级别：硕士

焦粉、苯渣是焦化生产过程中的副产物,我国每年在焦炭过程中产生的焦粉约1600万吨,苯渣约100万吨。焦粉、苯渣产量巨大,亟需合理高效利用。由于焦粉、苯渣固定碳含量较高,同时还含有一定量的H、O、N元素,有望作为活性焦添加剂用于改善... 详细信息

焦粉、苯渣是焦化生产过程中的副产物,我国每年在焦炭过程中产生的焦粉约1600万吨,苯渣约100万吨。焦粉、苯渣产量巨大,亟需合理高效利用。由于焦粉、苯渣固定碳含量较高,同时还含有一定量的H、O、N元素,有望作为活性焦添加剂用于改善活性焦的性质。为了进一步探究焦化副产在活性焦制备的应用潜力,本文在阳城无烟煤(Y):襄垣贫煤(X):府谷烟煤(F):粘结剂(沥青和煤焦油的混合物,AT)=7:1:2:3的基础上添加了不同比例的苯渣(2%,4%,6%,8%)、焦粉(3%,5%,10%),经过600°C炭化、900°C水蒸气活化制备得到了高比表面、分级多孔结构的成型活性焦,分别考察了不同焦化副产添加对活性焦理化结构和污染物脱除性能的影响。主要结论如下:(1)在煤复配的基础上加入不同比例的苯渣(2%,4%,6%,8%)制备得到了分级多孔的高比表面积活性焦。苯渣的加入可以改善活性焦的孔结构和表面化学性质,进而促进活性焦的吸附性能。苯渣由于较高的挥发分和具有较好的反应性,活性焦制备过程中炭化失重率和活化烧失率均有一定程度的升高。苯渣的加入使活性焦的比表面先升高再降低,4%苯渣加入后使活性焦的比表面积由709 m/g升高到782m/g,提高了10.3%。同时,苯渣的加入促进了活性焦的石墨化程度。脱硫结果表明,添加8%苯渣后活性焦具有最高的脱硫性能,硫容由50.0 mg/g升高到58.7 mg/g,提高了17.4%。罗丹明B(RhB)吸附结果表明,添加4%苯渣的活性焦具有最好的吸附性能,吸附量由未添加时的82.8 mg/g升高到109.8 mg/g,提高了32.6%。(2)为了使更多种类、更多添加量的焦化副产能用于活性焦的制备,达到焦化副产高值化利用的目的。在煤复配的基础上同时加入不同比例的焦粉(3%,5%,10%)和苯渣(4%,8%)成功制备得到了成型活性焦。焦粉、苯渣在活性焦制备过程中共同影响了活性焦的理化结构发育和吸附性能。焦粉添加量为10%时,活性焦的产率由39.6%提高到45.8%,总比表面积由700 m/g下降至532 m/g,降低了24.0%。苯渣的加入使活性焦的产率有一定的降低,但在添加10%焦粉的基础上添加8%的苯渣使比表面积回升到了610 m/g。焦粉、苯渣共同促进了活性焦的石墨化程度。脱硫测试表明,活性焦的硫容随焦粉添加量的增加呈降低趋势,苯渣加入后减缓了硫容降低的程度。添加10%的焦粉和8%苯渣时,活性焦的硫容由只添加10%焦粉时的39.2mg/g回升到44.1 mg/g。焦粉、苯渣的加入略微影响了活性焦处理焦化废水的色度、COD的能力。综上所述,苯渣促进了焦粉添加量的增加,使焦粉、苯渣的添加量高达18%,一定程度上降低了活性焦的制备成本。本研究为焦化副产的高值化利用提供了新途径,提高了活性焦处理污染物的能力,更好的实现了焦化厂内碳循环,降低了活性焦的制备成本。

关键词：焦化副产活性焦焦粉(C) 苯渣(B) 性质

核心力量训练对拉丁舞专项学生基本技术影响的研究

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核心力量训练对拉丁舞专项学生基本技术影响的研究

作者：牛健山东体育学院

学位级别：硕士

上世纪80年代,拉丁舞这一舶来品在中国大地如雨后春笋般的迅速发展起来,但是拉丁舞大多起源于美洲地区由于中西方艺术文化差异,它在我国的发展也带来了许许多多的问题。目前我国拉丁舞的发展现状主要以拉丁舞的普及与拉丁舞健身功能的... 详细信息

上世纪80年代,拉丁舞这一舶来品在中国大地如雨后春笋般的迅速发展起来,但是拉丁舞大多起源于美洲地区由于中西方艺术文化差异,它在我国的发展也带来了许许多多的问题。目前我国拉丁舞的发展现状主要以拉丁舞的普及与拉丁舞健身功能的研究为主,对于拉丁舞技术训练方面的研究较少,使我国拉丁舞的技术训练缺乏系统性。因此,导致我国拉丁舞选手在国际比赛中成绩不理想,虽然有个别选手成绩较好但是我国拉丁舞选手的整体技术水平较低。我国拉丁舞技术训练手段和方法的落后,直接导致了我国与西方国家拉丁舞选手之间存在较大的技术水平差距。拉丁舞专项学生作为我国拉丁舞后备人才的重要组成部分,加强对拉丁舞专项学生的培养就成为了首要目标。利用核心力量训练对拉丁舞专项学生的基本技术进行训练,探索核心力量训练对其的影响,研究出适合于拉丁舞专项学生基本技术训练的方法,使拉丁舞专项学生的基本技术更加扎实,最终使学生在比赛中取得优异的成绩。为以后提升我国拉丁舞整体竞技能力水平的发展打下坚实的基础,具有重要的意义。本文选用文献资料法、专家访谈法、实验法和数理统计法等研究方法,通过核心力量训练对山东体育学院2013级体育舞蹈专项60名学生影响及应用的研究,得出以下结论:1、在身体技术方面,核心力量训练忽视对拉丁舞专项学生手臂动作的训练,对其作用较小,对腿部动作及身体姿态有较大作用。2、在身体动律方面,核心力量训练对拉丁舞专项学生的重心推动及稳定性有较大作用,髋部动律更加清晰有力。3、在双人配合方面,核心力量训练对舞伴间的力量传递及力量感知有较大作用。

关键词：核心力量拉丁舞基本技术

中石油集团资金管理研究 ——以吉林石化公司为例

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中石油集团资金管理研究 ——以吉林石化公司为例

作者：牛健华东理工大学

学位级别：硕士

许多优秀的公司在发展过程中,由于忽略了对企业资金的管理,使得公司的资金链出现了问题,最终导致公司的衰败和破产。这些企业几乎都极力地追求利润成长和公司自身规模的扩张,对于公司扩张和发展过程中出现的债务规模与资金缺口不够重视... 详细信息

许多优秀的公司在发展过程中,由于忽略了对企业资金的管理,使得公司的资金链出现了问题,最终导致公司的衰败和破产。这些企业几乎都极力地追求利润成长和公司自身规模的扩张,对于公司扩张和发展过程中出现的债务规模与资金缺口不够重视,从而对于经济波动风险的抵抗力较低,导致企业的现金流无法实现平稳有效运行,在经济周期转换过程中很容易出现资金链断裂的情况。因此,强化企业的资金管理就显得异常重要。而中石油集团作为大型资源型企业,随着公司的壮大和发展,企业的资金管理对企业的发展的影响也日益增加,企业实施资金集中管理的紧迫性也日益加重。在此背景下,本文以中石油集团下属吉林石化公司(以下简称“吉林石化公司”)的为例,对中石油集团的资金管理现状进行探析,发现现实中资金管理方面存在的问题。具体通过五个部分的内容来对中石油集团的资金集中管理策略进行分析：首先,通过序言部分对本文的研究背景、研究意义以及国内外目前关于资金集中管理的研究现状进行述评;之后通过对本文研究所涉及的相管理论和概念进行详尽的说明;接着本文通过国外以及国内相关企业关于资金集中管理的现状进行描述,力图对中石油集团的资金集中管理策略提供一定的借鉴;随后则通过对吉林石化公司的资金集中管理现状进行分析,发现中石油集团目前资金集中管理中存在的不足及这些问题出现的原因;最后则是对中石油集团的资金管理策略提供意见和建议,为其他的石油企业加强资金集中管理具有一定的借鉴意义。文章通过对吉林石化公司的资金管理进行分析,发现中石油集团目前资金集中管理存在的难题主要有资金管理的集中程度需要进一步提高、资金的运作缺乏理性、注重集中而忽视管理的执行,资金运行财务风险大,闲置资金较多等。而导致这些问题产生的原因主要是历史、市场经济等原因的影响,集团属于资金密集,投资大的高风险企业,财务资金管理体制不完善以及资金管理手段和运行监管方式等方面不尽如人意等。针对上述问题,通过学习借鉴国外西门子及其他大型跨国企业和国内知名企业的资金管理模式;在此基础上,本文重点探究提出了制定合理的资金管理方式,逐步完善资金共享服务平台的功能,完善集团资金管理运行模式,构建良好的中石油集团财务控制环境,加强集团资金管理的信息披露建设等几个方面内容的中石油集团资金管理策略。

关键词：中石油集团吉林石化资金管理问题对策

服务型政府视角下鄂尔多斯市东胜区旧城道路改造问题研究

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服务型政府视角下鄂尔多斯市东胜区旧城道路改造问题研究

作者：牛健内蒙古大学

学位级别：硕士

随着城市经济发展水平的提高,城市道路也逐渐成为我们最为熟悉,也最为关注的公共设施之一。城市的快速发展与城市道路交通有着密切的联系,对于城市的旧城区来说,道路路网体系是在一定的历史条件下并且结合各个地区的实际情况下形成的,... 详细信息

随着城市经济发展水平的提高,城市道路也逐渐成为我们最为熟悉,也最为关注的公共设施之一。城市的快速发展与城市道路交通有着密切的联系,对于城市的旧城区来说,道路路网体系是在一定的历史条件下并且结合各个地区的实际情况下形成的,国内外的许多城市旧城区由于缺乏统一规划,加之城市道路建设条件有限,以至在老旧城区存在着道路系统混乱,道路功能不明确,道路曲折狭窄等问题,随着城市内生产生活及交通的发展,许多城市的旧道路需要进行改造,来满足城市交通的需求。旧城区道路改造的过程中由于规划,设计,施工,管理等一系列原因,在旧城道路中会有诸多的矛盾,高速增长的机动车拥有量和狭窄的街道的矛盾,上下班高峰时交通拥堵问题,还有,随着人们生活水平的提高,对交通环境的要求也越来越高,污水横流、坑坑洼洼的街道使得城市居民的批评声越来越高,当地政府部门倍感压力。本文将以鄂尔多斯市东胜区旧城区城市道路改造为例,站在服务型政府的角度下,以前人研究的基础上除了对旧城区道路规划等方面的问题进行进一步研究,从旧城区道路改造中存在的矛盾及旧城区道路改造规划设计,道路改造造价,路网布局,现场施工和道路管理等方面进行分析研究,力图最大限度改善城市环境并在提升城市的建设品质方面能起到积极作用。

关键词：服务型政府东胜区道路改造规划设计管理