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四氢姜黄素经PI3K/Akt信号通路对人血小板活化和聚集的调控作用

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食品科学 2022年第13期43卷 72-79页

作者：马永洁李玮琪张春梅普俊牙甫礼大理大学公共卫生学院云南大理671000 河口海关云南河口661300 大理大学代谢性疾病转化医学研究院云南大理671000

目的:探讨姜黄素的主要肠道代谢物四氢姜黄素(tetrahydrocurcumin,THC)对血小板活化和聚集的影响及其可能的分子机制。方法:在体外实验中,用不同浓度的THC(0、0.5、1、10μmol/L)提前与健康人纯化血小板共同孵育40 min,然后加入凝血酶... 详细信息

目的:探讨姜黄素的主要肠道代谢物四氢姜黄素(tetrahydrocurcumin,THC)对血小板活化和聚集的影响及其可能的分子机制。方法:在体外实验中,用不同浓度的THC(0、0.5、1、10μmol/L)提前与健康人纯化血小板共同孵育40 min,然后加入凝血酶激活血小板2 min,用流式细胞术测定血小板表面CD62P和CD63的表达量,用酶联免疫吸附法测定血小板释放血小板因子-4(platelet factor-4,PF4)和趋化因子配体-5(chemokine ligand 5,CCL5)水平,用血小板聚集仪检测血小板释放ATP水平和血小板最大聚集率,用Western blot蛋白免疫印迹法检测血小板磷酸肌醇-3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)和Akt蛋白的磷酸化水平。结果:与模型组(血小板悬液中加入0.05%二甲基亚砜)相比,THC能抑制凝血酶诱导的血小板表面CD62P和CD63的表达,抑制PF4、CCL5和ATP的释放,降低血小板最大聚集率,下调PI3K和Akt蛋白的磷酸化水平,且呈浓度依赖效应,其中10μmol/L的浓度下作用效果显著(P<0.01、P<0.001)。PI3K的特异性激动剂740 Y-P可部分逆转THC对PF4和CCL5释放和血小板聚集的抑制作用(P<0.05、P<0.01)。结论:THC具有显著抑制血小板活化和聚集的作用,其机制可能是THC可下调PI3K/Akt介导的信号通路。

关键词：四氢姜黄素血小板活化血小板聚集

姜黄素对H_(2)O_(2)诱导血小板凋亡的抑制作用及分子机制

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食品科学 2021年第13期42卷 151-157页

作者：牙甫礼 XIN Yu 张春梅陈彬林李玮琪马永洁大理大学公共卫生学院预防医学研究所云南大理671000 大理大学代谢性疾病转化医学研究院云南大理671000 大理大学基础医学院云南大理671000 河口海关云南河口661300 广西壮族自治区妇幼保健院营养科广西南宁530000

目的:血小板凋亡在心血管疾病发生发展过程中发挥重要作用,姜黄素(curcumin,Cur)是存在于姜科植物根茎中的一种多酚类化合物,具有多种生物学活性,但是Cur对血小板凋亡是否具有调控作用尚鲜见报道,本研究通过体外实验探讨Cur对H_(2)O_(2... 详细信息

目的:血小板凋亡在心血管疾病发生发展过程中发挥重要作用,姜黄素(curcumin,Cur)是存在于姜科植物根茎中的一种多酚类化合物,具有多种生物学活性,但是Cur对血小板凋亡是否具有调控作用尚鲜见报道,本研究通过体外实验探讨Cur对H_(2)O_(2)诱导血小板凋亡的影响及其潜在的机制。方法:用不同浓度(0、1、10、100μmol/L)的Cur与健康人纯化血小板在体外共同孵育30 min,然后加入H_(2)O_(2)(100μmol/L)干预血小板60 min,用流式细胞术检测血小板磷脂酰丝氨酸的暴露水平和线粒体膜电位(ΔΨm)去极化水平;用酶联免疫吸附法测定血小板凋亡蛋白Caspase-3和Caspase-9活化水平、胞内总活性氧以及超氧化物生成水平;用Western blot蛋白免疫印迹法检测血小板促凋亡蛋白Bax、Bak和细胞色素c的表达水平。结果:与对照组相比,10、100μmol/L Cur显著抑制H_(2)O_(2)诱导的血小板磷脂酰丝氨酸暴露和ΔΨm去极化(P<0.05);同时,Western blot结果显示,Cur能显著降低H_(2)O_(2)诱导的血小板促凋亡蛋白Bax、Bak和细胞色素c的表达水平的升高(P<0.05);酶联免疫吸附测定结果表明,H_(2)O_(2)诱导的血小板Caspase-3和Caspase-9的活化可被10、100μmol/L Cur显著抑制(P<0.05);此外,H_(2)O_(2)处理时,血小板内总活性氧水平和超氧化物水平显著上调,Cur干预可显著抑制胞内总活性氧和超氧化物生成(P<0.05)。结论:Cur具有显著抑制H_(2)O_(2)诱导的血小板凋亡的作用。

关键词：姜黄素血小板凋亡过氧化氢氧化应激心血管疾病

黑米花色苷矢车菊素-3-O-β-葡萄糖苷对脂多糖诱导的人THP-1单核细胞炎症损伤的保护作用

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食品科学 2023年第5期44卷 143-152页

作者：牙甫礼李玮琪马永洁周昕榆伍春婷黄新惠大理大学公共卫生学院云南大理671000 大理大学代谢性疾病转化医学研究院云南大理671000

单核细胞介导的炎症反应在动脉粥样硬化发生和发展过程中起关键作用。花色苷是一种具有多种生物学活性的多酚类黄酮化合物,富含于各种深色的蔬菜、水果及谷类中,其中矢车菊素-3-O-β-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-β-glucoside,Cy-3-g)是花色... 详细信息

单核细胞介导的炎症反应在动脉粥样硬化发生和发展过程中起关键作用。花色苷是一种具有多种生物学活性的多酚类黄酮化合物,富含于各种深色的蔬菜、水果及谷类中,其中矢车菊素-3-O-β-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-β-glucoside,Cy-3-g)是花色苷中重要的单体,本研究旨在探讨黑米来源的Cy-3-g对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人单核白血病细胞(Tohoku hospital pediatrics-1,THP-1)炎症损伤的作用及可能的分子机制。采用乙醇-盐酸溶液浸提、大孔树脂吸附洗脱等步骤得到黑米花色苷粗提物,然后用中压液相层析联合紫外检测提取得到纯化的Cy-3-g(纯度>96.5%)。用不同质量浓度(0、0.10、0.25μg/mL和0.50μg/mL)Cy-3-g与THP-1细胞共孵育4 h,然后加入LPS(质量浓度50 ng/mL)与细胞继续孵育48 h,用酶联免疫吸附试验法测定培养液中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、IL-8、IL-10和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平,用定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测细胞中IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、Toll-样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)和核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)p65的mRNA表达水平,用Western blot蛋白免疫印迹法检测TLR4、NF-κB p65、核因子κB抑制因子(inhibitor of NF-κB,IκBα)蛋白表达水平。结果表明,与溶剂对照组相比,LPS诱导的THP-1细胞IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA相对表达量和释放水平可被不同质量浓度Cy-3-g显著抑制(P0.05)。质量浓度0.25、0.50μg/m L Cy-3-g能够显著抑制TLR4和NF-κB p65的m RNA和蛋白表达(P0.05)。综上,黑米花色苷Cy-3-g能够对LPS诱导的THP-1单核细胞炎症损伤起到保护作用,其机制可能是下调TLR4/NF-κB介导的信号通路。

关键词：花色苷矢车菊素-3-O-β-葡萄糖苷脂多糖单核细胞炎症损伤

黑米花色苷矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对脂多糖诱导的人THP-1单核细胞炎症损伤的保护作用

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食品科学 2022年

作者：牙甫礼李玮琪马永洁周昕榆伍春婷黄新惠大理大学公共卫生学院大理大学代谢性疾病转化医学研究院

目的：单核细胞介导的炎症反应在动脉粥样硬化发生和发展过程中起关键作用。花色苷是一种具有多种生物学活性的多酚类黄酮化合物，富含于各种深色的蔬菜、水果及谷类中，矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(Cyanidin-3-O-β-glucoside，Cy-3-g)是花...

目的：单核细胞介导的炎症反应在动脉粥样硬化发生和发展过程中起关键作用。花色苷是一种具有多种生物学活性的多酚类黄酮化合物，富含于各种深色的蔬菜、水果及谷类中，矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(Cyanidin-3-O-β-glucoside，Cy-3-g)是花色苷中重要的单体，本研究旨在探讨黑米来源的Cy-3-g对脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)诱导的人THP-1单核细胞炎症损伤的作用及可能的分子机制。方法：本研究采用乙醇-盐酸溶液浸提、大孔树脂吸附洗脱等步骤得到黑米花色苷粗提物，然后用中压液相层析联合紫外检测提取得到纯化的Cy-3-g（纯度>96.5%）。用不同浓度的Cy-3-g（0μg/mL、0.1μg/mL、0.25μg/mL和0.5μg/mL）与THP-1细胞提前共孵育4h，然后加入LPS (50ng/mL)与细胞继续孵育48h，用酶联免疫吸附法测定培养液中IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10和TNF-α水平，用定量PCR检测细胞中IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、Toll-样受体4(Toll-likereceptor4，TLR4)和 NFκBp65的mRNA表达水平，用Westernblot蛋白免疫印迹法检测 TLR4、NFκBp65、IκBα蛋白表达水平。结果：LPS诱导的THP-1细胞IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达水平和释放水平可被不同浓度的Cy-3-g所显著抑制(P 0.05)。机制上，Cy-3-g显著抑制TLR4和NFκBp65的mRNA和蛋白表达，同时抑制IκBα和NFκB p65的磷酸化表达水平，并抑制LPS对IκBα的降解作用 (P 0.05)。结论：黑米花色苷Cy-3-g对LPS诱导的THP-1单核细胞炎症损伤起保护作用，其机制可能是下调TLR4/NFκB介导的信号通路。

关键词：

矢车菊素-3-葡萄糖苷对人巨核细胞株Dami增殖分化的影响

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食品科学 2015年第1期36卷 196-200页

作者：任婧邓秀娟王燕燕张莉珂牙甫礼卢敏琪张擎杨燕中山大学公共卫生学院广东广州510080 广东省营养膳食与健康重点实验室广东广州510080 中山大学生命科学学院广东广州510275

目的:研究植物花色苷单体矢车菊素-3-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-β-glucoside,Cy-3-g)对人巨核细胞株Dami的增殖、分化作用。方法:不同浓度的花色苷Cy-3-g(0.05、0.50、5.00、50.00、100.00 mmol/L)与人巨核细胞株Dami细胞共同培养,并将用... 详细信息

目的:研究植物花色苷单体矢车菊素-3-葡萄糖苷(cyanidin-3-O-β-glucoside,Cy-3-g)对人巨核细胞株Dami的增殖、分化作用。方法:不同浓度的花色苷Cy-3-g(0.05、0.50、5.00、50.00、100.00 mmol/L)与人巨核细胞株Dami细胞共同培养,并将用完全培养基培养的细胞设为对照组。培养结束后,用台盼蓝染色法检测巨核细胞活性、噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)染色法检测细胞增殖能力,软琼脂细胞集落培养法观察巨核细胞集落生成情况。采用Giemsa染色法观察细胞形态、流式细胞术检测巨核细胞DNA多倍体的生成及细胞表面CD41阳性表达率。结果:与对照组相比,50.00、100.00 mmol/L的Cy-3-g可增强Dami细胞活性,差异具有统计学意义(P<0.05);各Cy-3-g剂量组与对照组相比,均可明显增强Dami细胞增殖能力(P<0.01);Dami细胞集落数目、DNA多倍体数目以及CD41的阳性表达率在50.00、100.00 mmol/L Cy-3-g作用下明显升高,且与对照组相比均具有统计学差异(P<0.01)。结论:Cy-3-g能够明显促进人巨核细胞株Dami的增殖、分化,这可以为花色苷促进血小板生成提供可能的理论依据。

关键词：矢车菊素-3-葡萄糖苷巨核细胞增殖分化

课程思政视域下PBL与Seminar教学法在营养与食品卫生学中的应用与反思

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中国食品工业 2024年第2期 149-151页

作者：张春梅牙甫礼大理大学公共卫生学院云南大理671000

营养与食品卫生学是公共卫生与预防医学专业的核心课程,它是研究食物、营养与人体健康关系的一门学科,在指导改善国民营养健康观念、增进国民体质、预防疾病、保障食品安全、提高健康水平等方面发挥重要作用。课程思政视域下进行教学方... 详细信息

营养与食品卫生学是公共卫生与预防医学专业的核心课程,它是研究食物、营养与人体健康关系的一门学科,在指导改善国民营养健康观念、增进国民体质、预防疾病、保障食品安全、提高健康水平等方面发挥重要作用。课程思政视域下进行教学方法的改革探索在营养与食品卫生学课程实施过程中尤为重要。为充分发挥营养与食品卫生学的课程优势,本文主要探讨在课程思政背景下,以问题为导向(Problem-based learning,PBL)的教学法和以研究讨论(Seminar)为教学形式的教学法在营养与食品卫生学的运用,以期达到课程思政与知识传授的更好融合。

关键词：课程思政 PBL教学法 Seminar教学法营养与食品卫生学

矢车菊素-3-葡萄糖苷抑制ApoE^(-/-)小鼠血小板趋化因子及白细胞表面受体

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中山大学学报（医学版） 2018年第2期39卷 171-177页

作者：姚艳玲张献丹牙甫礼陈彬林李卿杨燕中山大学公共卫生学院营养学系广东广州510080 广东省营养与膳食健康重点实验室广东广州510080 广西壮族自治区人民医院营养科广西南宁530000 中山大学公共卫生学院(深圳) 广东深圳510006

【目的】探讨不同剂量的植物化学物花色苷活性成分矢车菊素-3-葡萄糖苷(Cy-3-g)对ApoE^(-/-)小鼠血小板来源的趋化因子及白细胞受体表达的抑制作用。【方法】75只8周龄ApoE^(-/-)雄性小鼠随机分为5组,每组15只,分别用添加200 mg/kg(低)... 详细信息

【目的】探讨不同剂量的植物化学物花色苷活性成分矢车菊素-3-葡萄糖苷(Cy-3-g)对ApoE^(-/-)小鼠血小板来源的趋化因子及白细胞受体表达的抑制作用。【方法】75只8周龄ApoE^(-/-)雄性小鼠随机分为5组,每组15只,分别用添加200 mg/kg(低)、400 mg/kg(中)、800 mg/kg(高)三个剂量Cy-3-g的高脂饲料喂养,标准饲料和高脂饲料分别为对照组和高脂组。实验周期为16周。每周记录小鼠体质量变化和摄食量,实验末期用试剂盒测定血脂四项水平,分离小鼠颈动脉切片后做油红O染色,ELISA法测定血清中MIF,CXCL12及CCL2的水平流式细胞仪测定白细胞表面CXCR4、CXCR7的表达,同时进行尾部出血时间测定。【结果】与高脂组比较,中、高剂量Cy-3-g降低了小鼠的血脂水平(P0.05)。【结论】在不造成出血风险的前提下,花色苷Cy-3-g能显著抑制ApoE^(-/-)小鼠血清中趋化因子CXCL12、CCL2及白细胞上相应受体CXCR4、CXCR7的水平。

关键词：血小板趋化因子趋化因子受体花色苷动脉粥样硬化 APOE基因敲除小鼠

水溶性番茄浓缩物Fruitflow通过调控血小板PI3K/Akt和MAPKs信号通路抑制其活化、聚集及血栓形成

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中山大学学报（医学科学版） 2020年第2期41卷 243-250页

作者：凡蝶田泽众马熙麟左晓牙甫礼杨燕中山大学公共卫生学院营养系广东广州510080 中山大学公共卫生学院(深圳) 广东深圳51800 广东省营养与健康重点实验室广东广州510080 广东省营养转化工程技术研究中心广东广州510080

[目的]血小板过度活化可促进血栓以及心血管疾病的发生发展,水溶性番茄浓缩物Fruitflow作为膳食补充剂在预防心血管疾病中发挥重要作用,但机制未明,且尚无Fruitflow对血栓形成影响的研究.本研究拟探讨Fruitflow对健康人血小板聚集、活... 详细信息

[目的]血小板过度活化可促进血栓以及心血管疾病的发生发展,水溶性番茄浓缩物Fruitflow作为膳食补充剂在预防心血管疾病中发挥重要作用,但机制未明,且尚无Fruitflow对血栓形成影响的研究.本研究拟探讨Fruitflow对健康人血小板聚集、活化及血栓形成的影响,并探索其可能的作用机制.[方法]用不同浓度(0、20、40、80 mg/L)的Fruitflow与健康成人血小板在体外共孵育,使用血小板聚集仪测定血小板聚集率;用流式细胞仪测定血小板表面αIIbβ3活化及纤维蛋白原结合率;用体视荧光显微镜观察FeCl3诱导的小鼠肠系膜动脉血栓模型中血栓的形成;通过小鼠剪尾实验测定出血时间;用Westernblot检测血小板Akt、Erk1/2、JNK总蛋白表达及其磷酸化水平.[结果]在ADP诱导下,20、40、80 mg/L的Fruitflow均可有效降低血小板聚集率,且效应呈剂量依赖性,其中80 mg/L的Fruitflow干预组血小板聚集率从对照组的(43.75±5.91)%降到了(8.25±4.57)%(P0.05);Fruitflow下调血小板Akt、Erk1/2和JNK蛋白的磷酸化水平,与对照组相比,80 mg/L Fruitflow干预后P-Akt/Akt由0.97±0.07降至0.33±0.13(P<0.001),P-Erk1/2/Erk1/2由0.89±0.09降至0.24±0.02(P<0.01),P-JNK/JNK由0.97±0.12降至0.45±0.04(P<0.01).[结论]抑制血小板PI3K/Akt和MAPKs信号可能是Fruitflow抑制血小板聚集活化和血栓形成的机制之一.

关键词：水溶性番茄浓缩物血小板活化血小板聚集血栓 PI3K/Akt/MAPKs信号通路

莱菔硫烷下调PI3K/Akt信号通路对高糖诱导人血小板凋亡的保护作用

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实用医学杂志 2024年第18期40卷 2530-2536页

作者：张春梅黄新惠胡锦秋毕晓艳牙甫礼大理大学公共卫生学院实验教学中心云南大理671000 大理大学公共卫生学院营养与食品卫生学教研室云南大理671000

目的探讨莱菔硫烷(sulforaphane, SFN)对高糖(high glucose, HG)诱导人血小板凋亡的保护作用及机制。方法将不同浓度(5、10、20μmol/L)的SFN或溶剂对照(0.05%DMSO)与健康人纯化血小板在体外共同孵育40 min,然后加入normal glucose(NG... 详细信息

目的探讨莱菔硫烷(sulforaphane, SFN)对高糖(high glucose, HG)诱导人血小板凋亡的保护作用及机制。方法将不同浓度(5、10、20μmol/L)的SFN或溶剂对照(0.05%DMSO)与健康人纯化血小板在体外共同孵育40 min,然后加入normal glucose(NG, 5 mmol/L)或HG(25 mmol/L)的葡萄糖溶液干预血小板90 min,用流式细胞术检测血小板线粒体膜电位(ΔΨm)去极化、磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)暴露和胞内总活性氧(reactive oxygen species, ROS)生成水平,用蛋白免疫印迹法检测PI3K、Akt蛋白磷酸化水平。结果与NG组相比,HG可显著增加血小板ΔΨm去极化和PS暴露水平(P <0.001),且可被不同浓度的SFN显著抑制(P <0.001)。机制上,与溶剂对照组相比,SFN显著下调HG诱导的血小板PI3K(P <0.01)和Akt(P <0.05)蛋白的磷酸化水平,显著降低HG诱导的胞内总ROS生成水平(P <0.001);PI3K的特异性激动剂740 Y-P可完全逆转SFN对HG诱导的PI3K和Akt蛋白磷酸化的抑制作用,部分逆转SFN对总ROS生成、ΔΨm去极化和PS暴露的抑制作用。结论 SFN在体外具有保护HG诱导健康人血小板凋亡的作用,其作用机制可能是下调PI3K/Akt介导的信号通路。

关键词：莱菔硫烷高糖血小板凋亡糖尿病