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不同检测策略在HIV感染诊断中的应用比较

中国艾滋病性病 2023年第12期29卷 1356-1358页

作者：雷达刘家虹熊长辉吴争唐翼龙丁晨靳廷丽程慧健江西省疾病预防控制中心南昌330001

随着我国艾滋病检测实验室能力的提升,HIV核酸检测方法逐步推广,不同检测策略的应用为HIV感染临床诊断提供更多依据。当HIV筛查试验呈有反应结果时,抗体确证或核酸检测的补充实验被《全国艾滋病检测技术规范》(2020年修订版)[1]所推荐... 详细信息

随着我国艾滋病检测实验室能力的提升,HIV核酸检测方法逐步推广,不同检测策略的应用为HIV感染临床诊断提供更多依据。当HIV筛查试验呈有反应结果时,抗体确证或核酸检测的补充实验被《全国艾滋病检测技术规范》(2020年修订版)[1]所推荐。同时,《艾滋病和艾滋病病毒感染诊断》(WS293-2019)[2]中也提出,对于HIV筛查有反应样本,抗体确证结果阳性或核酸定量结果>5000拷贝/mL,即可诊断HIV感染。本研究通过收集江西省2597例样本抗体确证及核酸检测数据进行回顾分析,对比不同检测策略在HIV感染诊断中的应用。

关键词：艾滋病病毒检测策略感染诊断

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霍乱弧菌分子生物学检测技术介绍

现代预防医学 2012年第17期39卷 4536-4539页

作者：熊长辉江西省疾病预防控制中心

随着医学分子生物学的迅速发展,大量的分子生物学技术被用于霍乱弧菌的研究,为霍乱弧菌快速检测及分型提供了重要依据,也进一步从分子水平阐明了霍乱弧菌的变异和不同菌株之间的遗传关系,以及霍乱疫情的溯源、菌株类型和流行性质。

关键词：霍乱弧菌分子生物学检测技术

1例宏基因二代测序提示钩端螺旋体感染患者的实验室诊断

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中国人兽共患病学报 2022年第6期38卷 478-480,485页

作者：孙爱猛周信云罗滢娟朱端昊熊长辉吉安市疾病预防控制中心吉安343000 江西省疾病预防控制中心南昌330006

目的对一不明原因发热伴呼吸困难患者进行实验室诊断,探讨钩端螺旋体实验室确诊的检测方法。方法利用宏基因二代测序技术(mNGS)对一不明原因发热伴呼吸困难患者的肺泡灌洗液进行病原体分析,利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)、显微镜... 详细信息

目的对一不明原因发热伴呼吸困难患者进行实验室诊断,探讨钩端螺旋体实验室确诊的检测方法。方法利用宏基因二代测序技术(mNGS)对一不明原因发热伴呼吸困难患者的肺泡灌洗液进行病原体分析,利用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)、显微镜凝集试验(MAT)和传统培养方法对患者进行实验室确诊。结果mNGS对不明原因发热伴呼吸困难患者的肺泡灌洗液进行病原体分析提示患者可能被问号钩端螺旋体感染,Real-time PCR和传统培养方法对患者的肺泡灌洗液、血液和尿液检测均为阴性,血清抗体检测(MAT法)致病性钩端螺旋体澳洲型滴度为1∶800。结论该患者确诊为致病性钩端螺旋体澳洲型感染,mNGS与实验室传统方法的有机结合有助于对不明原因发热伴呼吸困难患者实验室诊断,特别是对钩端螺旋体的实验室诊断具有重要意义。

关键词： mNGS 不明原因发热感染钩端螺旋体

霍乱弧菌zot基因的克隆表达及其对人小肠上皮细胞凋亡作用的研究

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霍乱弧菌zot基因的克隆表达及其对人小肠上皮细胞凋亡作用的研究

作者：熊长辉南昌大学

学位级别：硕士

目的:用PCR方法检测霍乱弧菌ctxAB和zot毒力基因,研究两毒力基因之间的共存关系,从霍乱弧菌(Vibriocholera)M045中克隆小带联结毒素(zonulaoccludenstoxin,zot)的全基因序列,构建其原核表达质粒pET-32a(+)-zot并转化至大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中,通过诱导表达和亲和层析纯化重组蛋白,初步研究zot表达蛋白对人小肠上皮细胞的凋亡作用。方法:1、用PCR检测方法检测江西省2000012年分离的239株霍乱弧菌中ctxAB和zot毒力基因。2、采用PCR技术从霍乱弧菌M045中抽提基因组DNA中扩增出zot基因。3、将zot基因克隆至原核表达质粒pET-32a(+)中,构建原核表达质粒pET-32a(+)-zot,双酶切鉴定并DNA测序验证。4、将重组质粒pET-32a(+)-zot转化至大肠杆菌BL21(DE3)筛选表达菌株E.coliBL21(DE3)/pET-32a(+)-zot,并用IPTG诱导其表达zot蛋白,利用SDSPAGE分析蛋白产物。5、利用亲和层析柱(Ni-IDAResin)纯化表达蛋白,用Westernblot对纯化蛋白进行鉴定。6、将纯化的zot表达蛋白作用于已贴壁生长的人小肠上皮细胞后用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:1、41株ctxAB毒力基因检测阳性的霍乱弧菌检测zot基因为阴性,说明ctxAB和zot毒力基因之间不存在共存关系。2、克隆出了全长约1200bp的霍乱弧菌zot基因编码区,说明PCR扩增zot全基因成功。3、重组质粒双酶切及DNA测序结果显示pET-32a(+)-zot构建成功。4、SDS-PAGE分析表达菌株总蛋白显示在与目标蛋白大小一致的位置出现一条亮的条带,说明zot蛋白表达成功。5、利用亲和层析柱(Ni-IDAResin)获得纯化的重组蛋白,经SDS-PAGE和凝胶成像系统分析,纯化蛋白的分子量约为47kD,浓度为0.324mg/ml,经Westernblot验证重组蛋白为目的蛋白。6、用流式细胞仪检测经重组蛋白作用的人小肠上皮细胞显示zot表达蛋白能引起人小肠上皮细胞的早期凋亡。结论:本论文成功地克隆了zot的全基因,成功构建重组质粒pET-32a(+)-zot,成功构建了重组菌株E.coliBL21(DE3)/pET-32a(+)-zot,获得zot表达的纯化蛋白,zot表达蛋白能引起人小肠上皮细胞的早期凋亡。

关键词：霍乱弧菌克隆表达 zot基因人小肠上皮细胞

中国男男性行为者HIV自我检测接受意愿的Meta分析

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中国艾滋病性病 2023年第6期29卷 730-732,F0003,F0004页

作者：雷达刘家虹熊长辉吴争张娜唐翼龙丁晨靳廷丽江西省疾病预防控制中心南昌330001

目的了解中国MSM对于HIV自我检测的接受意愿,为进一步推广HIV自我检测提供参考依据。方法通过中国知网、万方、维普、中国生物医学文献数据库、PubMed、The Cochrane Library、Science Direct和Web of Science检索有关中国MSM中HIV自我... 详细信息

目的了解中国MSM对于HIV自我检测的接受意愿,为进一步推广HIV自我检测提供参考依据。方法通过中国知网、万方、维普、中国生物医学文献数据库、PubMed、The Cochrane Library、Science Direct和Web of Science检索有关中国MSM中HIV自我检测的相关研究,对符合纳入标准的文献提取数据后运用RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果共纳入32篇文献,其中中文文献26篇,英文文献6篇,样本总量为40991例。Meta分析得出MSM接受HIV自检意愿率为72%(95%CI:61%~83%),实际自检率为52%(95%CI:42%~62%)。MSM对于尿液自检的接受率77%(95%CI:62%~93%)高于血液自检接受率71%(95%CI:42%~100%)及口腔黏膜渗出液自检的接受率62%(95%CI:43%~80%),差异有统计学意义(P<0.05)。年龄<40岁、月收入≥3000元、高中及以下、曾经做过传统HIV检测的MSM对自检的接受率相对较高。结论我国MSM对于HIV自检的接受意愿较高,加强HIV自检在MSM中的推广应用,可有助于了解自身感染状况。

关键词：艾滋病病毒自我检测男男性行为者接受意愿

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江西省钩端螺旋体病流行病学分析

中国公共卫生 2010年第3期26卷 330-331页

作者：徐建民王建熊长辉郭世成江西省疾病预防控制中心传染病预防控制所南昌330029

目的分析江西省钩端螺旋体病的流行状况,为钩端螺旋体病防治提供科学依据。方法采用描述流行病学方法对江西省2001-2008年钩端螺旋体病疫情资料和监测资料进行流行病学分析。结果2001-2008年全省共报告钩端螺旋体病病例1 405例,年报告... 详细信息

目的分析江西省钩端螺旋体病的流行状况,为钩端螺旋体病防治提供科学依据。方法采用描述流行病学方法对江西省2001-2008年钩端螺旋体病疫情资料和监测资料进行流行病学分析。结果2001-2008年全省共报告钩端螺旋体病病例1 405例,年报告发病率在0.11/10万~1.15/10万,年均发病率为0.42/10万;共报告钩端螺旋体病死亡病例38例,病死率为2.75%,病例以散发为主;病例主要发生在江西省的赣州市、宜春市和上饶市,3市病例占全省总病例数的74.59%;7-8月为钩体病发病高峰,占总病例数的71.96%;职业以农民为主,占总病例数的76.44%;发病年龄集中在10~59岁,占全部病例的91.74%;男女性别之比约为2∶1;2002-2007年钩体病监测发现流行菌群为黄疸出血群（32.61%）和澳洲群（15.94%）。结论2001-2008年江西省钩体病发病率呈逐年下降趋势,但部分地区发病率仍较高,7-8月为高发季节,与早晚季水稻＂双抢＂有关,也与职业人群相符,表现为稻田型流行特征;主要传染源及流行菌群分别为野外鼠和黄疸出血群钩体。

关键词：钩端螺旋体病流行病学人畜共患

2000-2021年江西省O1群和O139群霍乱弧菌非产毒株基因组学研究

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疾病监测 2022年第11期37卷 1419-1422页

作者：王鹏赵文轩徐晓倩周海健熊长辉李小英章承锋袁辉杨梦江西省疾病预防控制中心江西南昌330029 山西医科大学公共卫生学院山西太原030001 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所传染病预防控制国家重点实验室北京102206

目的分析2000—2021年江西省O1群和O139群霍乱弧菌非产毒株的基因组变异特征。方法使用基因组重测序技术获得菌株的基因组精细图,使用IQ-tree构建基于核心基因组单核苷酸多态性(SNP)的遗传系统发生树,使用脉冲场凝胶电泳(PFGE)研究密切... 详细信息

目的分析2000—2021年江西省O1群和O139群霍乱弧菌非产毒株的基因组变异特征。方法使用基因组重测序技术获得菌株的基因组精细图,使用IQ-tree构建基于核心基因组单核苷酸多态性(SNP)的遗传系统发生树,使用脉冲场凝胶电泳(PFGE)研究密切相关菌株的差异,使用最小抑制浓度(MIC)测定菌株的抗生素敏感性。结果江西省的O1群和O139群霍乱弧菌非产毒株基因组多态性较引起霍乱流行和大流行的产毒株高,其中部分O1群霍乱弧菌非产毒株携带耐药质粒,表现出对多种抗生素的敏感性降低。结论O1群和O139群霍乱弧菌的基因组多态性高,应该密切关注携带多耐药质粒的霍乱弧菌非产毒株。

关键词：基因组抗生素敏感性质粒

江西省人感染猪链球菌病原学和基因组特征分析

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中国人兽共患病学报 2023年第4期39卷 358-363页

作者：杨梦王鹏徐晓倩熊长辉李小英潘欢弘袁辉章承锋周海健江西省疾病预防控制中心南昌330029 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所北京102206

目的了解江西省2005-2020年猪链球菌菌株病原学和基因组特征,分析15年间分离株之间的关联,为人感染猪链球菌病防控提供参考依据。方法通过聚合酶链反应法扩增猪链球菌基因组上的16S rRNA、cps2j、mr、sly、ef、gapdh毒力基因,通过测定... 详细信息

目的了解江西省2005-2020年猪链球菌菌株病原学和基因组特征,分析15年间分离株之间的关联,为人感染猪链球菌病防控提供参考依据。方法通过聚合酶链反应法扩增猪链球菌基因组上的16S rRNA、cps2j、mr、sly、ef、gapdh毒力基因,通过测定最小抑菌浓度确定菌株的耐药性,通过全基因组测序和序列比对分析菌株之间的遗传多态性。结果10株人源和8株猪源猪链球菌均为血清2型菌株,毒力基因谱不同,至少携带3种毒力基因。对阿奇霉素和四环素耐药率高达89.89%和77.78%,携带氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类及叶酸通道拮抗剂4类耐药基因。分为3个ST型,其中ST7型12株、ST1型5株、ST373型1株。全基因组序列分析显示2005年疫情菌株与四川省暴发疫情菌株同源,2006-2020年分离菌株基因组多态性大。结论江西省人感染猪链球菌病均为散发,菌株基因组多态性大,2005年疫情菌株与四川省暴发菌株相关,随后年份为多点平行传播。

关键词：猪链球菌血清2型全基因组序列抗生素敏感性毒力基因

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脑膜炎奈瑟菌检测及基因分群

中国公共卫生 2015年第5期31卷 578-580页

作者：熊长辉杨梦刘晓青徐晓倩王鹏袁辉江西省疾病预防控制中心传染病所江西南昌330029

目的建立多重聚合酶链反应(PCR)技术对脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)的快速诊断及分群方法。方法应用多重PCR技术对本实验室保存的70株已鉴定Nm进行核酸鉴定及基因分群,同时检测23例流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)疑似病例脑脊... 详细信息

目的建立多重聚合酶链反应(PCR)技术对脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis,Nm)的快速诊断及分群方法。方法应用多重PCR技术对本实验室保存的70株已鉴定Nm进行核酸鉴定及基因分群,同时检测23例流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)疑似病例脑脊液标本中脑膜炎奈瑟菌特异性DNA片段。用传统的细菌培养法和血清凝集法作对照,比较其特异性。结果 68株Nm的多重PCR检测结果与血清分群结果一致,2株血清未能分群的Nm经多重PCR检测为C群;23例流脑疑似病例脑脊液标本经多重PCR检测有5例为C群,1例为A群,1例为B群,阳性检出率为30.43%。传统的病原分离培养、生化鉴定和血清学鉴定出4例为C群,阳性检出率为17.39%。结论多重PCR技术对脑膜炎奈瑟菌检测的特异性优于传统的细菌培养法以及血清凝集法。

关键词：多重PCR 脑膜炎奈瑟菌基因分群