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第十一次中国中西医结合实验医学学术研讨会

作者：梁清华徐则林熊新贵陈疆郭亚静肖玉美中南大学湘雅医院中西医结合研究所

目的:检测痹肿消汤按湿、热、毒、瘀拆方对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、细胞外信号调节激酶5(ERK5)表达的影响,从湿、热、毒、瘀探讨类风湿性关节炎的作用机制。方法:采用皮下注射牛Ⅱ型胶原蛋白与完... 详细信息

目的:检测痹肿消汤按湿、热、毒、瘀拆方对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠滑膜细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、细胞外信号调节激酶5(ERK5)表达的影响,从湿、热、毒、瘀探讨类风湿性关节炎的作用机制。方法:采用皮下注射牛Ⅱ型胶原蛋白与完全弗氏佐剂诱导SD大鼠的CIA模型,并设立正常组。采用免疫印迹法(Western blot)同步检测正常组、模型组、痹肿消汤组、清热解毒组(拆方1组)、祛湿组(拆方2组)、活血组(拆方3组)大鼠在不同时间点滑膜ERK1/2、ERK5的磷酸化水平,运用灰度扫描软件对结果进行分析。结果:造模14、21、28d后,模型组滑膜ERK1/2、ERK5表达逐渐呈递增趋势(P<0.05)。痹肿消汤组及拆方各组治疗后,ERK1/2、ERK5的表达水平则明显下降(P<0.05)。其中拆方2组ERK1/2表达的下降幅度比拆方1组、拆方3组更明显,而拆方1组ERK5表达的下降幅度比其余拆方组更显著(P<0.05)。结论:在RA病变过程中,ERK1/2、ERK5与RA滑膜病变密切相关;痹肿消汤组、拆方各组均能抑制ERK1/2、ERK5蛋白激酶的激活。其中祛湿组尤能抑制ERK1/2信号通路的活化;清热解毒组尤能抑制ERK5信号通路的活化。提示拆方各组都有阻抑关节滑膜增殖和骨质侵蚀的作用。但清热解毒、祛湿通络、活血祛瘀各治法对通路调节作用优势有不同,提示用中医药治病,也有其特有的效应靶位。

关键词：痹肿消汤拆方胶原诱导性关节炎细胞外信号调节激酶1/2 细胞外信号调节激酶5 免疫印迹法滑膜

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脑梗死急性期、恢复期患者的腺苷酸环化酶表达及意义

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山东医药 2009年第21期49卷 6-7页

作者：曾年菊梁清华萧梅芳区建刚熊新贵卢明中南大学湘雅医院中西医结合研究所长沙410008 解放军第163医院

目的观察脑梗死(CI)急性期、恢复期患者的腺苷酸环化酶(AC)表达,探讨其不同病期的病理生理过程。方法选择CI急性期、恢复期患者各30例,健康者15例,抽取三组外周血分离淋巴细胞,抽提总RNA,用RT-PCR技术检测AC表达。结果CI急性期患者AC m... 详细信息

目的观察脑梗死(CI)急性期、恢复期患者的腺苷酸环化酶(AC)表达,探讨其不同病期的病理生理过程。方法选择CI急性期、恢复期患者各30例,健康者15例,抽取三组外周血分离淋巴细胞,抽提总RNA,用RT-PCR技术检测AC表达。结果CI急性期患者AC mRNA表达缺失,恢复期患者较健康者表达降低(P<0.05)。结论CI缺血缺氧状态下机体抑制性激素可能占主导地位,与抑制型G蛋白耦联结合后抑制AC活性,降低细胞基础cAMP水平。

关键词：脑梗死腺苷酸环化酶逆转录聚合酶链反应

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类风湿性关节炎患者关节滑膜组织蛋白质组学

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中国组织工程研究 2012年第28期16卷 5206-5211页

作者：陈疆熊新贵梁清华杨波吴丹中南大学湘雅医院远程医疗中心湖南省长沙市410008 中南大学湘雅医院中西医结合科湖南省长沙市410008

背景:已有研究表明滑膜炎持久反复发作,最终导致关节内软骨和骨的破坏,国内关于类风湿性关节炎滑膜组织的蛋白质组学研究报道较少。目的:通过比较类风湿性关节炎患者和无关节滑膜损伤患者滑膜组织蛋白质表达的差异,探讨类风湿性关节炎... 详细信息

背景:已有研究表明滑膜炎持久反复发作,最终导致关节内软骨和骨的破坏,国内关于类风湿性关节炎滑膜组织的蛋白质组学研究报道较少。目的:通过比较类风湿性关节炎患者和无关节滑膜损伤患者滑膜组织蛋白质表达的差异,探讨类风湿性关节炎可能的发病机制,寻找类风湿性关节炎致病相关蛋白。方法:选取6例无关节滑膜损伤患者及6例活动期类风湿性关节炎患者行关节镜手术得到的滑膜组织,提取总蛋白质后进行双向凝胶电泳,考马斯亮蓝染色,PDQUEST软件分析,对差异蛋白质点采用基质辅助激光解析电离质谱(MALDI-TOF-MS)技术进行鉴定,并用Mascot软件在SwissProt和NCBInr数据库中进行同源比较和分析鉴定。结果与结论:建立了类风湿性关节炎组及对照组滑膜组织双向凝胶电泳图谱,获得130个差异在2倍以上的蛋白质点数,选取其中分辨清楚的39个点进行鉴定,初步鉴定出29个蛋白质,其中21个蛋白质点在类风湿性关节炎组中表达上调,8个表达下调,其功能涉及功能代谢、细胞信号传导、抗氧化、分子伴侣等。结果表明类风湿关节炎滑膜病变是一个多种蛋白质参与的复杂过程,这些表达差异蛋白质可能是类风湿性关节炎发病的内在因素。

关键词：类风湿关节炎蛋白质组学滑膜组织双向凝胶电泳:质:组织构建

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从脑肠轴异常-肝郁脾虚途径探讨逍遥散类方抗抑郁促胃肠动力的分子机制

从脑肠轴异常-肝郁脾虚途径探讨逍遥散类方抗抑郁促胃肠动力的分...

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第六届全国中西医结合基础理论研究学术研讨会暨第二届湖南省中西医结合学会肝病专业学术年会

作者：任平黄熙王杨范荣张海男唐涛张春虎熊新贵中南大学湘雅医院药剂科中南大学湘雅医院中西医结合研究所

抑郁症伴胃肠道躯体症状者,与抑郁症肝郁脾虚型的临床表现类似。一线SSRIs抗抑郁兼抑制胃肠动力,呈现治疗的矛盾性。疏肝健脾复方,如逍遥散、柴胡疏肝散等抗抑郁兼减轻胃肠道症状,具有治疗学上的优势。2008年Nature有文呼吁进行抑郁症...

抑郁症伴胃肠道躯体症状者,与抑郁症肝郁脾虚型的临床表现类似。一线SSRIs抗抑郁兼抑制胃肠动力,呈现治疗的矛盾性。疏肝健脾复方,如逍遥散、柴胡疏肝散等抗抑郁兼减轻胃肠道症状,具有治疗学上的优势。2008年Nature有文呼吁进行抑郁症的脑与周围器官双向性相互作用的研究;中医肝郁脾虚/疏肝健脾与此不谋而合!且其物质基础可能与脑肠轴相关。由此本文提出"抑郁症肝郁脾虚型存在脑肠轴异常,逍遥散等类方疏肝理气健脾,抗抑郁作用的优势在于通过脑肠轴途径抗抑郁兼促胃肠动力"假说。其意义在于:紧跟了当前抑郁症发病学机制研究的新趋势,为抑郁症的发病学机理及抗抑郁药物的治疗学机制研究探索新的思路和方法。

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胶原诱导性关节炎大鼠滑膜病变的蛋白质组学研究

胶原诱导性关节炎大鼠滑膜病变的蛋白质组学研究

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第八届全国中西医结合实验医学研讨会

作者：梁清华杨波谢薇蔡颖陈疆熊新贵张花先

胶原性关节炎(collagen-indticed arthritis,CIA)大鼠模型模拟人类RA发病机制,且和RA具有众多的共同点而被广泛应用于RA研究。我们采用牛Ⅱ型胶原与完全福氏佐剂成功复制SD大鼠实验性关节炎(CIA)模型,模拟人类RA发病过程,应用二维凝胶... 详细信息

胶原性关节炎(collagen-indticed arthritis,CIA)大鼠模型模拟人类RA发病机制,且和RA具有众多的共同点而被广泛应用于RA研究。我们采用牛Ⅱ型胶原与完全福氏佐剂成功复制SD大鼠实验性关节炎(CIA)模型,模拟人类RA发病过程,应用二维凝胶电泳和质谱技术筛选、鉴定CIA大鼠滑膜病变过程中表达量发生变化的蛋白质,试图从蛋白质角度为RA的发病及防治提供新的线索。

关键词：胶原诱导关节炎滑膜病变蛋白质组学发病机制

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清热解毒法对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜组织蛋白作用关系的影响

清热解毒法对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜组织蛋白作用关系的影响

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全国第十届中西医结合风湿病学术会议

作者：熊新贵梁清华吴丹陈疆杨波蔡颖郭亚静范荣中南大学湘雅医院中西结合研究所

目的:同步观察胶原诱导性关节炎大鼠滑膜组织A1dolase A、AnnexinⅠ、AnnexinⅤ表达的相互关系及清热解毒方药痹肿消汤的干预作用,探讨其蛋白质间网络与骨质侵蚀的关系及痹肿消汤的干预作用。方法:在蛋白质组学研究的基础上,选择与RA骨... 详细信息

目的:同步观察胶原诱导性关节炎大鼠滑膜组织A1dolase A、AnnexinⅠ、AnnexinⅤ表达的相互关系及清热解毒方药痹肿消汤的干预作用,探讨其蛋白质间网络与骨质侵蚀的关系及痹肿消汤的干预作用。方法:在蛋白质组学研究的基础上,选择与RA骨质侵蚀密切相关的蛋白Aldolase A、AnnexinⅠ、AnnexinⅤ等蛋白为同步检测指标,采用皮下注射Ⅱ型胶原酶与完全弗氏佐剂诱导CIA大鼠模型,应用Western blot于造模后25d,35d,45d不同时间点同步动态观察模型组、痹肿消汤组及正常组大鼠滑膜的Aldolase A与AnnexinⅠ、AnnexinⅤ蛋白的表达;运用Image too1 3.0灰度扫描软件对结果进行半定量分析,分析上述蛋白质间的相关关系,并与不同时间点关节炎指数积分进行规律分析。结果:造模25d后,模型组大鼠Aldolase A表达明显高于正常组(P<0.05),而AnnexinⅠ与AnnexinⅤ表达均明显低于正常组(均P<0.05),随着免疫时间的延长、关节症状加重(关节炎指数积分增加),模型组Aldolase A表达逐渐增加(P<0.05),AnnexinⅠ与AnnexinⅤ表达则逐渐洚低(均P<0.05)。痹肿消汤治疗后,Aldolase A在各时间点表达均明显低于同时间模型组(P<0.05);在25d、35d、45d表达水平均呈递减趋势(均P<0.05),AnnexinⅠ与AnnexinⅤ表达在各时间点均明显高于同时间模型组(均P<0.05),在25d、35d、45d表达均呈水平递增趋势(均P<0.05),各时间点的模型组、治疗组大鼠滑膜组织Adolase A与Annexin 1、AnnexinⅤ的表达变化均呈负相关关系。结论:在RA病理过程中,随着关节症状加重,Adolase A表达逐渐上调,AnnexinⅠ与AnnexinⅤ表达则逐渐下调,治疗后Adolase A表达逐渐下调,AnnexinⅠ与AnnexinⅤ表达则逐渐上调,提示Adolase A与骨质侵蚀密切相关,可能为骨质侵蚀破坏性蛋白。且Adolase A与AnnexinⅠ、AnnexinⅤ于各时间点均呈负相关,提示Adolase A、AnnexinⅠ、AnnexinⅤ等蛋白不仅与RA滑膜病变(关节炎症、骨质侵蚀)密切相关,而且它们之间存在相互负影响关系,形成了复杂的蛋白质网络的负性循环,清热解毒方药痹肿消汤能调节上述蛋白的异常表达,调节蛋白质网络的负性循环。

关键词：清热解毒法类风湿关节炎胶原诱导性关节炎大鼠

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胶原诱导性关节炎大鼠滑膜组织中磷酸化p38与JNK通路及痹肿消汤的影响

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中国组织工程研究与临床康复 2011年第33期15卷 6216-6219页

作者：肖玉美熊新贵陈疆梁清华郭亚静徐则林吴丹范荣中南大学湘雅医院中西医结合科湖南省长沙市410008

背景:有研究报道滑膜细胞信号传导异常是类风湿关节炎发病的重要机制之一。目的:观察胶原诱导性关节炎大鼠中丝裂原活化蛋白激酶通路中磷酸化p38和磷酸化JNK的活化及痹肿消汤的影响。方法:将72只SD大鼠随机分为正常组、模型组、痹肿消... 详细信息

背景:有研究报道滑膜细胞信号传导异常是类风湿关节炎发病的重要机制之一。目的:观察胶原诱导性关节炎大鼠中丝裂原活化蛋白激酶通路中磷酸化p38和磷酸化JNK的活化及痹肿消汤的影响。方法:将72只SD大鼠随机分为正常组、模型组、痹肿消汤组。模型组及痹肿消汤组大鼠足趾注射胶原蛋白乳剂制备胶原诱导性关节炎模型大鼠,10d后加强免疫,初次免疫后第14天开始给痹肿消汤组大鼠每天痹肿消汤灌胃,模型组蒸馏水灌胃,正常组自由饮水。结果与结论:Westernblot检测结果显示,胶原诱导性关节炎大鼠中磷酸化p38及JNK的表达较正常组显著增高(P<0.05)。与模型组相比,痹肿消汤组能下调磷酸化p38及JNK蛋白的表达(P<0.05)。说明痹肿消汤可抑制类风湿关节炎中磷酸化p38及JNK的高表达。

关键词：痹肿消汤胶原诱导性关节炎滑膜丝裂原活化蛋白激酶 p38 JNK 组织构建

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脑出血与脑缺血动物模型脾淋巴细胞的蛋白质组学研究

脑出血与脑缺血动物模型脾淋巴细胞的蛋白质组学研究

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第九届中国中西医结合实验医学学术研讨会

作者：梁清华熊新贵陈疆曾年菊区健刚范荣中南大学湘雅医院中西结合研究所中南大学湘雅医院远程医疗中心

目的:建立脑出血与脑缺血模型脾淋巴细胞双向凝胶电泳图谱,并识别鉴定其差异表达蛋白质,以探讨细胞免疫功能与脑血管病之间的关系。方法:将SD大鼠随机分为正常组、脑出血模型组(采用VⅡ型胶原酶诱导脑出血)和脑缺血模型组(采用线栓法造... 详细信息

目的:建立脑出血与脑缺血模型脾淋巴细胞双向凝胶电泳图谱,并识别鉴定其差异表达蛋白质,以探讨细胞免疫功能与脑血管病之间的关系。方法:将SD大鼠随机分为正常组、脑出血模型组(采用VⅡ型胶原酶诱导脑出血)和脑缺血模型组(采用线栓法造成大脑中动脉阻塞模型),分离大鼠脾淋巴细胞,提取蛋白质后进行双向凝胶电泳,PDQUEST软件分析,目标蛋白质点用基质辅助激光解析电离质谱(MALDI-TOF-MS)测定肽质量指纹图进行鉴定。结果:胶质细胞成熟因子γ等9个蛋白在脑出血和脑缺血模型组表达上调,膜联蛋白3在脑出血和脑缺血模型组表达下调。结论:建立了分辨率高重复性较好的脑出血及脑梗塞模型脾淋巴细胞双向凝胶电泳图谱,并识别鉴定出了一些与脑血管病脑损伤相关的差异表达的蛋白质,为深入研究脑血管病细胞免疫功能改变与脑血管病之间的关系奠定了基础。

关键词：蛋白质组学动物模型脑出血脑缺血脾淋巴细胞

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痹肿消汤对胶原性关节炎大鼠滑膜双向电泳蛋白质表达的影响

痹肿消汤对胶原性关节炎大鼠滑膜双向电泳蛋白质表达的影响

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全国中西医结合强直性脊柱炎专题研讨会

作者：杨波梁清华谢薇蔡颖陈疆熊新贵关勇军左晓霞中南大学湘雅医院中西医结合研究所中南大学湘雅医学院远程医疗中心中南大学湘雅医学院肿瘤研究所中南大学湘雅医院风湿科

目的分析痹肿消汤(Bizhongxiao decoction,BZXD)对胶原性关节炎大鼠滑膜双向电泳蛋白质表达谱的影响,为阐明痹肿消汤治疗类风湿性关节炎(rheumajtoid arthritis,RA)作用机制提供新线索。方法 70只 SD 大鼠随机分为正常对照组(正常组)、...

目的分析痹肿消汤(Bizhongxiao decoction,BZXD)对胶原性关节炎大鼠滑膜双向电泳蛋白质表达谱的影响,为阐明痹肿消汤治疗类风湿性关节炎(rheumajtoid arthritis,RA)作用机制提供新线索。方法 70只 SD 大鼠随机分为正常对照组(正常组)、模型对照组(模型组)、痹肿消汤治疗组(BZXD 组),采用皮下注射牛Ⅱ型胶原与完全福氏佐剂制成实验性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)模型。应用双向凝胶电泳技术(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分别分离正常组、模型组、BZXD 组大鼠关节滑膜的总蛋白后,胶体考马斯亮蓝染色,扫描2-DE 胶获取电子图像,Pdquest 图像分析软件比较分析此3组双向凝胶电泳图谱并识别差异表达的蛋白质。结果成功复制了 CIA 大鼠模型;建立了正常组、模型组和 BZXD 组大鼠滑膜的2-DE 图谱,其平均蛋白质点数分别为947±39,994±41,1031±52,其匹配率为92％,91％,94．2％;模型组的3块胶在蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在等电聚焦(isoelectric focusing,IEF)方向的偏差是 (0．896±0．217)mm,在十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodiumdo-decylsufate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)方向的偏差为(1．102±0．104)mm。比较分析模型组和 BZXD 组大鼠滑膜的2-DE 图谱,发现此2组间有328个差异点,BZXD 组有174蛋白质点表达上调,147个蛋白质点表达下调,7个蛋白质点只在模型组表达。模型组与正常组之间有193个差异点,123个在模型组表达上调,70个表达下调。结论建立了 CIA 大鼠关节滑膜的双向凝胶电泳图谱,识别了328个差异表达的蛋白质,对这些差异蛋白质的鉴定将为痹肿消汤治疗 RA 的作用机制提供新的实验依据。

关键词：

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木犀草素对T细胞IL-2 mRNA、INFγmRNA表达的影响

木犀草素对T细胞IL-2 mRNA、INFγmRNA表达的影响

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第九届中国中西医结合实验医学学术研讨会

作者：梁清华吴汉军曾光游万辉熊新贵唐涛中南大学湘雅医院中西医结合研究所

目的:研究木犀草素(luteolin)对佛波醇酯(Phorbol ester,PMA)+离子霉素(Ion)体外诱导的小鼠T细胞活化和增殖的影响。方法:以佛波醇酯+离子霉素刺激小鼠脾淋巴细胞来源的T细胞,以不同终浓度的木犀草素与T细胞共培养,用MTT法测定细胞增殖... 详细信息

目的:研究木犀草素(luteolin)对佛波醇酯(Phorbol ester,PMA)+离子霉素(Ion)体外诱导的小鼠T细胞活化和增殖的影响。方法:以佛波醇酯+离子霉素刺激小鼠脾淋巴细胞来源的T细胞,以不同终浓度的木犀草素与T细胞共培养,用MTT法测定细胞增殖;采用反转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)法检测药物对PMA刺激作用下的T细胞中Th1/Th2细胞因子IL-2mRNA与INFγmRNA表达的影响。结果:PMA+Ion刺激48h后,小鼠T淋巴细胞增殖显著高于对照组(P<0.01);PMA+Ion刺激48h后,小鼠T淋巴细胞增殖显著高于对照组(P<0.01);浓度为30μM/L、20μM/L、10μM的木犀草素能明显抑制PMA+Ion诱导的T细胞的增殖;30μM、20μM的木犀草素能显著下调IL-2mRNA、INF-γmRNA的表达,提示木犀草素可通过抑制IL-2mRNA与INF-γmRNA的表达,从而下调T细胞的生物活性;10μM的木犀草素能显著下调IL-2mRNA的表达,而对于INF-γmRNA的表达的下调没有统计学意义。结论:木犀草素抑制小鼠T细胞的增殖和活化,可能与抑制IL-2mRNA、INFγmRNA的表达有关,提示木犀草素具有机体免疫调节作用。

关键词：木犀草素 T细胞 IL-2 mRNA INFγmRNA 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)

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