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胶原诱导性关节炎大鼠血浆tRF和tiRNA的差异表达及功能分析

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中国免疫学杂志 2024年

作者：陈代奕文宇琪何彩林胡恩杨曌宇熊新贵杨波中南大学湘雅医院中西医结合科

目的：探究胶原诱导性关节炎（collagen-induced arthritis，CIA）大鼠血浆转运RNA衍生片段（tRNA-derived RNA fragment，tRF）和tiRNA的差异表达，并对其靶基因进行生物学功能及通路的富集分析，为类风湿性关节炎（rheumatoid arthri... 详细信息

目的：探究胶原诱导性关节炎（collagen-induced arthritis，CIA）大鼠血浆转运RNA衍生片段（tRNA-derived RNA fragment，tRF）和tiRNA的差异表达，并对其靶基因进行生物学功能及通路的富集分析，为类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis，RA）的诊断和治疗寻找新的靶点。方法：皮下注射Ⅱ型胶原建立RA大鼠模型，通过关节炎指数（arthritis index，AI）积分、H&E染色评价疾病模型；利用Illumina平台测序获取tRF和tiRNA表达谱，RT-qPCR用于tRF和tiRNA表达量的验证；结合miRanda和TargetScan数据库预测差异表达tRF和tiRNA的靶基因；基因本体（Gene Ontology，GO）和京都基因和基因组数据库（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG）富集分析对靶基因功能进行注释。结果：CIA模型大鼠血浆共有25个差异表达的tRF和tiRNA，其中23个上调，2个下调；筛选出6个CIA大鼠特异性表达tRF和tiRNA，分别是Other-36:73-tRNA-Arg-CCT-4、Other-57:70-tRNA-Glu-CTC-1-M3、tRF-1:32-Gly-CCC-1-M2、tRF-1:31-Gly-CCC-1-M2、tRF-1:32-Pro-AGG-1-M4和tRF-1:32-Glu-TTC-2-M2，其靶基因GO分析主要涉及细胞器相关条目，KEGG分析富集到多条与RA相关的经典信号通路。结论：差异表达的tRF和tiRNA的靶基因可能参与调控RA的重要病理生理过程及药物治疗的作用靶点。

关键词：类风湿关节炎胶原诱导性关节炎转运RNA衍生片段转运RNA半分子

胶原诱导性关节炎大鼠滑膜血管内皮生长因子与微血管密度

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中国组织工程研究 2014年第7期18卷 1051-1056页

作者：杨波梁清华吴丹熊新贵中南大学湘雅医院中西医结合研究所湖南省长沙市410008

背景:目前发现的促进血管增生活性最强的是血管内皮生长因子,其在类风湿关节炎滑膜细胞呈现强表达。目的:观察对胶原诱导性关节炎大鼠不同时间点滑膜血管内皮生长因子表达和微血管计数的变化,探讨血管内皮生长因子和微血管在类风湿关节... 详细信息

背景:目前发现的促进血管增生活性最强的是血管内皮生长因子,其在类风湿关节炎滑膜细胞呈现强表达。目的:观察对胶原诱导性关节炎大鼠不同时间点滑膜血管内皮生长因子表达和微血管计数的变化,探讨血管内皮生长因子和微血管在类风湿关节炎发病机制中的作用及其相关性。方法:采用Ⅱ型胶原与完全福氏佐剂诱导SD大鼠实验性关节炎模型,采用免疫组织化学方法观察实验性关节炎大鼠不同时间点滑膜组织血管内皮生长因子的表达水平和新生血管计数,并同时观察发病时间与关节炎指数积分、血管内皮生长因子及滑膜新生血管数之间的关系。用直线相关分析法分析血管内皮生长因子表达与滑膜新生血管数之间的关系,用等级相关分析法分析关节炎指数积分与血管内皮生长因子表达及滑膜新生血管数之间的关系。结果与结论:随着实验性关节炎发病时间的延长,滑膜新生血管逐渐增多,滑膜增厚,关节炎指数积分逐渐增加,血管内皮生长因子表达水平和微血管数也随之升高;其关节炎指数积分与血管内皮生长因子表达水平呈正相关关系(r=0.535、P<0.05),血管内皮生长因子表达水平与微血管计数呈显著正相关关系(r=0.860,P<0.01)。血管内皮生长因子参与了实验性关节炎大鼠滑膜血管翳的形成过程,血管内皮生长因子与微血管密度在类风湿关节炎的发病中具有重要意义。

关键词：组织构建血管内皮细胞类风湿关节炎血管内皮生长因子微血管密度滑膜大鼠国家自然科学基金

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建筑工程施工现场的安全监督管理要点

建筑 2020年第14期 79-80页

作者：熊新贵泰兴市新兴建筑工程有限公司

本文分析了现阶段施工现场安全监督管理中存在的问题,发现安全监督管理普遍缺乏,施工现场管理不足,安全生产保障设施不足;忽视了施工现场的安全,缺乏工程建设计划。针对这些问题,本文提出了相应的对策和建议,希望有助于中国建筑企业更... 详细信息

本文分析了现阶段施工现场安全监督管理中存在的问题,发现安全监督管理普遍缺乏,施工现场管理不足,安全生产保障设施不足;忽视了施工现场的安全,缺乏工程建设计划。针对这些问题,本文提出了相应的对策和建议,希望有助于中国建筑企业更好地安全有效管理。

关键词：建筑工程施工安全监督现场

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中医肝阳化风证本质蛋白质组学研究

中国中西医结合杂志 2011年第7期31卷 913-920页

作者：熊新贵陈疆梁清华范荣曾年菊区健刚萧梅芳张雨星中南大学湘雅医院中西医结合研究所长沙410008 中南大学湘雅医院远程医疗中心长沙410008

目的从蛋白质表达水平初步探讨中医肝阳化风证的本质内涵。方法严格按照中医辨证标准选择脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)肝阳化风证与阴虚风动证、脑梗死(cerebral infarction,CI)肝阳化风证与阴虚风动证、颈椎病(cervical spond... 详细信息

目的从蛋白质表达水平初步探讨中医肝阳化风证的本质内涵。方法严格按照中医辨证标准选择脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)肝阳化风证与阴虚风动证、脑梗死(cerebral infarction,CI)肝阳化风证与阴虚风动证、颈椎病(cervical spondylosis,CS)肝阳化风证与肝阳上亢证、帕金森病(Parkinson′s disease,PD)肝阳化风证与血虚生风证患者作对照研究,分离上述各证型组患者及健康人外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),提取总蛋白后进行双向凝胶电泳(2-DE),PDQuest软件进行分析,采用基质辅助激光解析电离质谱(MALDI-TOF-MS)测定肽质量指纹图,用Mascot查询系统查询SwissProt数据库,比较同病异证、异病同证及同类证患者PBMC差异表达与相同表达的蛋白。结果建立了上述各证型组与健康人PBMC总蛋白的2-DE图谱,通过比较分析并鉴定出同病异证中ICH肝阳化风证与阴虚风动证相同表达蛋白质点1个,差异表达蛋白质点22个;CI肝阳化风证与阴虚风动证相同表达蛋白质点6个,差异表达蛋白质点21个;CS肝阳化风证与肝阳上亢证相同表达蛋白质点3个,差异表达蛋白质点12个;PD肝阳化风证与血虚生风证无相同表达蛋白质点,差异表达蛋白质点12个。异病同证中相同表达蛋白质点13个。四病同类证有1个相同表达的蛋白质点为硫氧环蛋白依赖性过氧化物酶(Thioredoxin-dependent peroxide reductase,TPx)。结论同病异证有不同的本质内涵(有多个不同的蛋白表达),异病同证有共同的物质基础(有共同的蛋白表达),同类证有相同的物质基础(有相同的蛋白表达),提示中医学的证有物质基础,有本质可寻。

关键词：肝阳化风证证本质蛋白质组学同病异证异病同证

柔性纳米脂质体载体增强双氯芬酸钠的经皮渗透效果:与普通外用制剂比较的随机对照动物实验

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第18期11卷 3597-3600页

作者：范荣梁清华王娟唐涛熊新贵陈疆中南大学湘雅医院中西结合科湖南省长沙市410008

目的:通过与普通外用制剂对比,观察双氯芬酸钠柔性纳米脂质体对类风湿性关节炎大鼠的镇痛、抗炎效果,评估柔性纳米脂质体这种新型皮肤给药载体的促进药物局部吸收作用。方法:实验于2005-03/11在中南大学湘雅医院中西结合研究所完成。选... 详细信息

目的:通过与普通外用制剂对比,观察双氯芬酸钠柔性纳米脂质体对类风湿性关节炎大鼠的镇痛、抗炎效果,评估柔性纳米脂质体这种新型皮肤给药载体的促进药物局部吸收作用。方法:实验于2005-03/11在中南大学湘雅医院中西结合研究所完成。选择SD大鼠80只,按随机数字表法分成4组:正常对照组、扶他林组、5%双氯芬酸钠柔性纳米脂质体组、10%双氯芬酸钠柔性纳米脂质体组,每组20只。每组10只用于镇痛实验,10只用于抗炎实验。①镇痛实验:热板实验:每组大鼠双后足分别涂抹生理盐水、扶他林乳胶剂、5%双氯芬酸钠柔性纳米脂质体和10%双氯芬酸钠柔性纳米脂质体,每足0.5g,每隔6min涂药1次,连续5次。末次给药10min后将足洗净,在5,10,15,25min分别测定大鼠舔足次数。扭体实验:每组大鼠腹部分别涂抹生理盐水、扶他林乳胶剂、5%双氯芬酸钠柔性纳米脂质体和10%双氯芬酸钠柔性纳米脂质体,给药20min后,各组大鼠分别腹腔注射0.6%的醋酸溶液,0.01mL/g,分别在给药后1,2,4,6h观察并记录20min内大鼠的扭体次数,计算其扭体反应抑制率,扭体反应抑制率=[(正常对照组扭体次数-用药组扭体次数)/正常对照组扭体次数]×100%。甲醛舔足实验:每组大鼠右后足分别涂抹生理盐水、扶他林乳胶剂、5%双氯芬酸钠柔性纳米脂质体和10%双氯芬酸钠柔性纳米脂质体,每10min涂药1次。末次给药10min后分别于右后足皮下注射2.5%甲醛溶液30μL,分别记录每只大鼠10min内舔足的次数。②抗炎实验:扶他林组、5%双氯芬酸钠柔性纳米脂质体组、10%双氯芬酸钠柔性纳米脂质体组采用皮下注射牛Ⅱ型胶原和完全福氏佐剂制备类风湿性关节炎模型。正常对照组不予任何处理。每组大鼠右后足分别涂抹生理盐水、扶他林乳胶剂,5%双氯芬酸钠柔性纳米脂质体和10%双氯芬酸钠柔性纳米脂质体,约0.5～1.0g/次(视关节大小而定,即每次给药量按浓度折算为临床常用量100～150mg/d),3次/d。测量致炎后7,l4,21,28,35d右后足踝关节周长。结果:纳入大鼠80只,均进入结果分析。扶他林组、5%双氯芬酸钠柔性纳米脂质体组和10%双氯芬酸钠柔性纳米脂质体组镇痛、抗炎效果明显高于正常对照组,差异有显著性意义(P0.05)。结论:外用不同剂量双氯芬酸钠柔性纳米脂质体对类风湿性关节炎大鼠较普通外用制剂在镇痛、抗炎方面有更明显的疗效。

关键词：脂质体关节炎,类风湿性双氯芬酸钠生物材料

柔性纳米脂质体双氯芬酸钠外用透皮吸收的效果

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第22期11卷 4355-4358页

作者：范荣梁清华王娟唐涛熊新贵陈疆中南大学湘雅医院中西结合科湖南省长沙市410008

目的:观察双氯芬酸钠柔性纳米脂质体皮肤给药缓释系统体外透皮吸收情况。方法:验于2005-03/11在中南大学湘雅医院中西结合研究所完成。实验材料:双氯芬酸钠柔性纳米脂质体(中南大学化工研究所,将双氯芬酸钠制成纳米粒,并包封于卵磷脂及... 详细信息

目的:观察双氯芬酸钠柔性纳米脂质体皮肤给药缓释系统体外透皮吸收情况。方法:验于2005-03/11在中南大学湘雅医院中西结合研究所完成。实验材料:双氯芬酸钠柔性纳米脂质体(中南大学化工研究所,将双氯芬酸钠制成纳米粒,并包封于卵磷脂及其有生物膜特性和功能的脂质体中,其粒径为30～100nm),扶他林(双氯芬酸钠)。实验分组:15只健康的SD大鼠按随机数字表法分为3组:质量分数为0.01的扶他林组、质量分数为0.05的外用双氯芬酸钠柔性纳米脂质体组和质量分数为0.1的外用双氯芬酸钠柔性纳米脂质体组,每组5只。将鼠皮装于Franz扩散池,角质层面向供给室,真皮层面向接受池,分别将质量分数为0.05的外用双氯芬酸钠柔性纳米脂质体25mg、质量分数为0.1的外用双氯芬酸钠柔性纳米脂质体12.5mg和质量分数为0.01的扶他林125mg(含双氯芬酸钠均为1.25mg)均匀涂布于大鼠皮肤角质层表面,分别于2,4,6,8,10,12h于接受池取样5mL,用0.45μm微孔滤膜过滤。滤液用生理盐水稀释至10mL,于276nm处测定吸光度值,扣除生理盐水的吸光度值后代入标准曲线,计算累积透过量和12h累积透过率,对比3种制剂经大鼠皮肤的体外透皮吸收差异。结果:质量分数为0.05,0.1的外用双氯芬酸钠柔性纳米脂质体组累积透过量、12h累积透过率均高于质量分数为0.01的扶他林组[12h累积透过率分别为(70.76±0.23)%,(75.2±0.32)%,(33.51±0.29)%],差异有显著性意义(t=317.17,232.54,P0.05)。结论:双氯芬酸钠柔性纳米脂质体能有效渗透皮肤组织。

关键词：纳米脂质体双氯芬酸钠透皮吸收生物材料控制释放材料

痹肿消汤干预类风湿关节炎患者外周血单个核细胞蛋白质组学研究

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中国中西医结合杂志 2010年第11期30卷 1160-1164页

作者：蒋勇前梁清华熊新贵杨波萧梅芳区建刚曾年菊陈疆中南大学湘雅医院中西医结合研究所长沙410008 珠海市第二人民医院广东519020

目的观察痹肿消汤干预前后的早期活动性类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)蛋白质的双向凝胶电泳(2-DE)图谱,并分析其差异表达的蛋白质,寻找RA疾病相关蛋白,探讨痹... 详细信息

目的观察痹肿消汤干预前后的早期活动性类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)蛋白质的双向凝胶电泳(2-DE)图谱,并分析其差异表达的蛋白质,寻找RA疾病相关蛋白,探讨痹肿消汤治疗类风湿关节炎可能的作用机制。方法 18例早期活动性RA患者随机分为两组,治疗组9例口服痹肿消汤(白花蛇舌草25g肿节风30g丹参15g络石藤20g骨碎补15g薏苡仁30g等15味中药),对照组9例口服甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)和普威(nimesulide tablets),疗程均为3个月。9名健康成年人为正常对照组。健康成年人及RA患者治疗前后分别采血10mL,用淋巴细胞分离液分离单个核细胞,抽提外周血单个核细胞中的蛋白,采用固相pH梯度(IPG)2-DE分离正常人及RA患者PBMCs总蛋白质。凝胶经考染显色后,PDQuest图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行鉴定。同时运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法验证部分差异蛋白质。结果分别获得健康人、RA患者治疗前、后PBMCs总蛋白2-DE图谱,通过RA患者治疗前与健康人比较分析,差异表达蛋白质点数为23,选取18个点进行质谱鉴定,成功鉴定14个蛋白质,其中8个蛋白质点在RA中表达上调,6个表达下调。与对照组治疗后比较,治疗组治疗后有5个蛋白质表达差异更为明显。RT-PCR方法证实,ApoA-I在健康人、RA治疗组、对照组的表达水平与2-DE结果一致。结论 (1)RA患者PBMCs存在一些差异表达的蛋白质,这些差异蛋白质可能是RA发病的内在因素;(2)痹肿消汤可能通过对RA患者PBMCs中某些蛋白质表达的调控达到治疗目的。

关键词：类风湿关节炎痹肿消汤单个核细胞蛋白质组学双向电泳

痹肿消汤拆方对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜ERK1/2、ERK5表达及其转导通路的影响

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中华中医药杂志 2012年第3期27卷 716-720页

作者：徐则林熊新贵陈疆梁清华郭亚静肖玉美中南大学湘雅医院中西医结合研究所长沙410008 中南大学湘雅医院长沙410008

目的:检测痹肿消汤按湿、热、毒、瘀拆方对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、细胞外信号调节激酶5(ERK5)表达的影响,从湿、热、毒、瘀探讨类风湿性关节炎(RA)的作用机制。方法:采用皮下注射牛Ⅱ型胶原蛋白与完... 详细信息

目的:检测痹肿消汤按湿、热、毒、瘀拆方对胶原诱导性关节炎大鼠滑膜细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、细胞外信号调节激酶5(ERK5)表达的影响,从湿、热、毒、瘀探讨类风湿性关节炎(RA)的作用机制。方法:采用皮下注射牛Ⅱ型胶原蛋白与完全弗氏佐剂诱导SD大鼠胶原诱导性关节炎(CIA)模型,并设立正常组。采用免疫印迹法(Western blot)同步检测正常组、模型组、痹肿消汤组、清热解毒组(拆方Ⅰ组)、祛湿组(拆方Ⅱ组)、活血组(拆方Ⅲ组)大鼠在不同时间点滑膜ERK1/2、ERK5的磷酸化水平,运用灰度扫描软件对结果进行半定量分析。结果:造模14d后,模型组滑膜ERK1/2、ERK5表达高于正常组(P<0.05)。随着免疫时间延长,模型组ERK1/2、ERK5表达于21、28d呈递增趋势(P<0.05),28d达到最高。4用药组治疗后,ERK1/2、ERK5的磷酸化表达水平均低于同期模型组(P<0.05)。在21、28d水平,表达呈递减趋势(P<0.05)。痹肿消汤组的ERK1/2、ERK5各时间点的表达水平比拆方3组更低,拆方Ⅱ组的ERK1/2表达的下降幅度比拆方I组、拆方Ⅲ组更明显(P<0.05)。而拆方I组的ERK5表达的下降幅度比拆方Ⅱ组、拆方Ⅲ组更显著(P<0.05)。结论:拆方各组可有效地抑制ERK1/2、ERK5转导通路的活化,达到阻抑关节滑膜增殖、骨质侵蚀的作用。但清热解毒、祛湿通络、活血祛瘀各治法对上述通路调节作用优势有不同。

关键词：痹肿消汤拆方胶原诱导性关节炎细胞外信号调节激酶1/2 细胞外信号调节激酶5 免疫印迹法滑膜

外用甲氨蝶呤柔性纳米脂质体对类风湿性关节炎大鼠血清γ-干扰素和白细胞介素4的影响

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第1期11卷 95-98页

作者：王娟梁清华范荣唐涛熊新贵陈疆中南大学湘雅医院中西结合科湖南省长沙市410008

目的:观察经控制释放材料纳米柔性纳米脂质体制成的外用甲氨蝶呤对类风湿性关节炎大鼠血清γ-干扰素和白细胞介素4的影响。方法:实验于2005-03/11在中南大学湘雅医院中西结合研究所完成。80只健康的SD大鼠随机分为5组:正常组10只,其余7... 详细信息

目的:观察经控制释放材料纳米柔性纳米脂质体制成的外用甲氨蝶呤对类风湿性关节炎大鼠血清γ-干扰素和白细胞介素4的影响。方法:实验于2005-03/11在中南大学湘雅医院中西结合研究所完成。80只健康的SD大鼠随机分为5组:正常组10只,其余70只大鼠采用皮下注射牛Ⅱ型胶原和完全福氏佐剂制备类风湿性关节炎模型,再随机分为模型组10只,0.5%甲氨蝶呤组20只;0.25%甲氨蝶呤柔性纳米脂质体组20只,0.5%甲氨蝶呤柔性纳米脂质体组20只。正常对照组大鼠自由饮水,模型组每天灌服1.5mL蒸馏水,其余各组于初次免疫7d后给药,于大鼠右后足分别涂抹0.5%甲氨蝶呤外敷剂、0.25%和0.5%甲氨蝶呤柔性纳米脂质体,约2.0～4.0g/只(视关节大小而定),每周一次。采用关节炎指数积分法评定关节症状,关节指数积分越高,关节症状越严重。给药后第45天采用酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清γ-干扰素和白细胞介素4水平。结果:纳入大鼠80只,均进入结果分析。①各组大鼠关节炎指数积分给药前14d无明显区别,模型组随着时间延长,关节炎指数积分增加;0.5%甲氨蝶呤组、0.25%甲氨蝶呤柔性纳米脂质体组和0.5%甲氨蝶呤柔性纳米脂质体组于给药后25d达高峰,但仍低于模型组(分别为1.51±0.99,0.98±0.57,0.88±0.49,1.68±1.24,t=2.956,5.461,5.244,P0.05)。结论:外用甲氨蝶呤柔性纳米脂质体通过其智能控制释放效应,下调血清γ-干扰素及上调血清白细胞介素4水平的作用明显优于普通外用甲氨蝶呤。

关键词：关节炎,类风湿性甲氨蝶呤脂质体白细胞介素4 γ-干扰素大鼠