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外侧双层盘状半月板伴半月板囊性分离1例报告及文献复习

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实用骨科杂志 2023年第6期29卷 565-566页

作者：刘洋王文熊喜峰梁绍华贵州医科大学贵州贵阳550025 广州市红十字会医院骨科广东广州510220

半月板解剖变异很少见,现有报道多发生在外侧半月板[1]。作为半月板的特殊变异类型,双层半月板则是更加罕见,大部分患者无特征性临床症状,仅在运动损伤后行辅助检查时发现,因此双层半月板的相关报道很少[2-13]。2021年12于6日广州市红... 详细信息

半月板解剖变异很少见,现有报道多发生在外侧半月板[1]。作为半月板的特殊变异类型,双层半月板则是更加罕见,大部分患者无特征性临床症状,仅在运动损伤后行辅助检查时发现,因此双层半月板的相关报道很少[2-13]。2021年12于6日广州市红十字会医院收治1例罕见的外侧双层盘状半月板伴半月板囊性分离患者,现报告如下。

关键词：盘状半月板无特征性解剖变异外侧半月板运动损伤变异类型临床症状囊性

小鼠肝纤维化病理微环境诱导的β-catenin激活及其细胞定位与分化

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小鼠肝纤维化病理微环境诱导的β-catenin激活及其细胞定位与分化

作者：熊喜峰广州医学院

学位级别：硕士

背景与目的研究证明各种原因所致的细胞死亡将引发组织细胞的再生与修复，此过程有赖于细胞与其微环境间的信息交流。当病理性的组织损伤与细胞丢失反复发生，组织持续性再生修复的结果则可能产生异常的组织结构如肝硬化、腺上皮增生... 详细信息

背景与目的研究证明各种原因所致的细胞死亡将引发组织细胞的再生与修复，此过程有赖于细胞与其微环境间的信息交流。当病理性的组织损伤与细胞丢失反复发生，组织持续性再生修复的结果则可能产生异常的组织结构如肝硬化、腺上皮增生、异常化生等，原有的正常细胞分化微环境受破坏，从而干扰增殖中的细胞进一步分化成熟或导致异常增殖。我国是肝病高发地区，各种致病因素(病毒、酒精、寄生虫、化学损伤等)的长期存在、反复的炎症活动等引起的慢性肝损伤，最终的发展结局为肝硬化及肝癌，其中必经的病理过程是肝纤维化，因此，肝纤维化微环境下细胞的增殖、分化及其分子调控是理解肝癌发生机制的关键。已有的研究认为肝纤维化是受损肝细胞的凋亡及肝星形细胞(Hepatic StellateCell, HSC)活化两方面相互作用的结果，活化的HSC表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及各种细胞外信号转导通路蛋白，并产生大量以胶原为主的细胞外基质成分和细胞因子，导致肝组织微环境及结构的变化。有多种信号通路与肝纤维化进程有关，其中包括调控细胞增殖及分化的Wnt/β-catenin通路，但其关键效应分子β-catenin在肝纤维化过程中的细胞定位及作用不明了，本研究应用传统的CCl肝损伤模型及组织学、分子生物学手段动态观察肝纤维化过程中β-catenin的表达特征及定位，以明确肝纤维化过程中β-catenin信号通路活化的细胞类别，探讨其在肝组织结构及细胞微环境病理变化过程中的作用。方法 1.动物模型制备：健康雄性昆明小鼠(n=45)随机分为对照组(n=15)与实验组(n=30)。实验组又随机分为损伤1wk组、损伤4wk组、损伤8wk组，实验各组小鼠首次皮下注射CCl原液(6mL/kg体质量)，以后隔3天再次皮下注射50%CCl-粟米油混悬液(6mL/kg体质量)，每周两次;对照组只给予皮下注射同等剂量的粟米油，每周两次。 2.实验标本的处理：分别于实验1wk、4wk、8wk末取各组小鼠中叶肝组织，部分置液氮内快速冷冻后提取RNA和蛋白，另一部分置于40g/L中性甲醛固定,常规方法石蜡包埋，制备包含各组小鼠肝脏组织的阵列切片备用。 3.实验方法：用常规组织学H&E染色及Masson染色方法，光学显微镜下观察比较肝组织结构病理变化;应用免疫组化、RT-PCR和Western Bloting方法检测肝组织内Desmin、a-SMA、β-catenin的表达的情况并进行统计学分析;应用β-catenin及CK19免疫荧光双标记方法确定β-catenin阳性表达细胞类别，探讨其意义。结果 1. H&E染色：对照组肝小叶结构正常，肝细胞无变性坏死;实验组肝脏损伤程度随给药时间的增加而加重，其中1wk组肝组织内可见炎性细胞浸润及少量的细胞坏死;4wk肝组织内有大量的空泡样变，肝小叶间纤维增生较明显，小叶周围汇管区可见增生的细胞团;8wk组肝小叶结构破坏，有大量的纤维间隔包绕肝组织形成假小叶，可见较多的新生胆管。 2. Massson染色：对照组肝组织汇管区和血管壁可见少量绿色胶原纤维;实验组肝组织内胶原纤维逐渐增多，8wk组肝组织内胶原纤维显著增生形成间隔,有假小叶形成。 3. Desmin表达：免疫组化结果显示，对照组肝内有少量散在的Desmin阳性表达细胞，位于肝血窦周围。实验组随肝损伤时间增加Desmin阳性细胞数增加，各时间点肝组织内Desmin阳性细胞均多于对照组，其中损伤4wk组Desmin阳性程度最高;RT-PCR结果显示，对照组及实验组各时间点均有Desmin mRNA表达，其中损伤各组Desmin表达与对照组相比差异有显著性意义(P﹤0.001)，损伤1wk、4wk及8wk各时间点相比差异有显著性意义(P﹤0.001)。 4. α-SMA表达：免疫组化结果显示，在对照组中α-SMA仅在血管壁有少量阳性细胞表达，在实验组中，α-SMA阳性表达细胞分布于肝细胞及肝血窦周围，随损伤时间延长α-SMA阳性细胞逐步增多，损伤4wk时达峰值。RT-PCR结果显示，对照组及实验组各时间点均有α-SMA表达，与对照组相比具有显著性意义(1wk vs对照组P﹤0.05、4wk、8wk vs对照组P﹤0.001)，1wk、4wk及8wk各时间点相比差异有显著性意义(P﹤0.001)，其中4wk组表达量明显高于其它两个时间组。 5. β-catenin表达： RT-PCR结果显示，对照组及实验组各时间点均有β-catenin表达，其中损伤1wk时β-catenin表达与对照组相比无明显差别(P>0.05)，损伤4wk及8wk时β-catenin的表达明显下降，与对照组相比差异均有显著性意义(P﹤0.01)，损伤组之间两两比较结果显示各组差异有显著性意义(P﹤0.01)，以4wk组表达最低。Western Blotting检测结果显示各组均有β-catenin蛋白表达，其中损伤

关键词： β-catenin 胆管上皮样细胞 CK19 肝纤维化 CCl4

慢病毒介导的RNA干扰HMGA2基因表达对HL-60细胞增殖及细胞周期素B2、A2表达的影响

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中华血液学杂志 2012年第6期33卷 448-452页

作者：刘文丹谭丽熊喜峰梁叶萍谭获广州医学院第一附属医院海印院区肿瘤血液中心 510230 广东省泌尿外科重点实验室广州医学院组织学与胚胎学教研室

目的探讨慢病毒介导的RNA干扰沉默高迁移率族蛋白A2（HMGA2）基因表达对人急性白血病细胞系HL-60细胞增殖及细胞周期素（cyclin）B2、cyclinA2表达的影响。方法制备表达HMGA2基因短发夹RNA（shRNA）的重组慢病毒载体，转染HL-60细胞。... 详细信息

目的探讨慢病毒介导的RNA干扰沉默高迁移率族蛋白A2（HMGA2）基因表达对人急性白血病细胞系HL-60细胞增殖及细胞周期素（cyclin）B2、cyclinA2表达的影响。方法制备表达HMGA2基因短发夹RNA（shRNA）的重组慢病毒载体，转染HL-60细胞。通过半定量RT—PCR和West—elTlblot检测特异性shRNA转染后HL-60细胞HMGA2基因表达；CCK-8法检测细胞增殖抑制率；软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖能力；流式细胞术（FCM）检测细胞周期；RT—PCR及Westernblot检测cyclinB2、cyclinA2mRNA和蛋白表达水平。结果RT—PCR和测序证实，成功构建了表达HMGA2shRNA的重组慢病毒载体；RT—PCR和Westernblot证实经嘌呤霉素筛选出的阳性克隆转染的HL-60细胞HMGA2mRNA和蛋白表达水平与空载体组相比明显受抑，抑制率分别达（80．66±7．98）％和（76．35±12．72）％；CCK-8比色结果显示，HMGA2表达受到稳定干扰的HL-60细胞增殖活力明显受到抑制，细胞增殖曲线低平，缺乏指数增殖特征。FCM检测显示，与对照组相比，转染特异性shRNA的HL-60细胞出现了明显的G2／M期阻滞，G2／M期细胞分别为（13．90±4．07）％和（30．00±5．78）％（P〈0．05）。HMGA2特异性shRNA转染的HL-60细胞cyclinB2mRNA和蛋白表达与未转染细胞相比，抑制率分别为（67．55±7．69）％和（51．77±4．81）％（P〈0．01）。而cyclinA2的表达无明显改变。结论HMGA2基因沉默可下调cyclinB2表达，从而使细胞出现明显的增殖抑制和G2／M期阻滞。

关键词：基因,HMGA2 RNA干扰细胞增殖细胞系,HL-60

EZH2与β-catenin在骨肉瘤中的研究进展

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中国矫形外科杂志 2015年第5期23卷 434-437页

作者：熊喜峰刘志河暨南大学医学院附属广州市红十字会医院、广州市创伤外科研究所广东省广州市510220

果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)是多梳抑制复合物(polycomb repressor complex 2,PRC2)的催化核心蛋白,能够催化组蛋白3的27位赖氨酸的三甲基化(H3K27me3),然后沉默与细胞分化、抑制增殖相关基因的... 详细信息

果蝇Zeste基因增强子人类同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)是多梳抑制复合物(polycomb repressor complex 2,PRC2)的催化核心蛋白,能够催化组蛋白3的27位赖氨酸的三甲基化(H3K27me3),然后沉默与细胞分化、抑制增殖相关基因的表达,导致肿瘤的发生。β-连环蛋白(β-catenin)作为经典Wnt/β-catenin信号通路上关键的效应分子,在细胞的生长及分化中发挥着重要作用,影响着肿瘤的形成。骨肉瘤是青少年常见的原发性恶性骨肿瘤,以往的研究证实EZH2和β-catenin都参与其中,但是二者在它的发生发展中是否存在关联,尚无研究报道。本文就EZH2及β-catenin在骨肉瘤中的研究进展作一综述。

关键词：骨肉瘤 EZH2 β-catenin

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应用声触诊量化技术诊断小鼠肝纤维化

世界华人消化杂志 2014年第7期22卷 963-968页

作者：熊喜峰刘志河刘文丹马宁芳沈雁暨南大学医学院附属广州市红十字会医院广东省广州市510220 广州市创伤外科研究所广东省广州市510220 广州医科大学附属第四医院肿瘤血液内科广东省广州市511440 广州医科大学基础学院组织学与胚胎学教研室广东省广州市510182

目的:声触诊量化技术(virtual touch tissues quantifleation,VTQ)在小鼠肝纤维化诊断中的实验研究.方法:40只小鼠随机分成对照组、CCl4 1 wk组、CCl4 4 wk组和CCl4 8 wk组.于造模时间点测定VTQ测量值(Vs值);检测门冬氨酸氨基转移酶(asp... 详细信息

目的:声触诊量化技术(virtual touch tissues quantifleation,VTQ)在小鼠肝纤维化诊断中的实验研究.方法:40只小鼠随机分成对照组、CCl4 1 wk组、CCl4 4 wk组和CCl4 8 wk组.于造模时间点测定VTQ测量值(Vs值);检测门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、Ⅳ型胶原(Ⅳcollagen,Ⅳ-C)、透明质酸(hyaluronic acid,HA)和层黏连蛋白(laminin,LN)的变化;制作肝组织石蜡切片,观察病理学变化.结果:HE染色显示对照组肝小叶结构正常;1wk时可见肝细胞少量坏死,炎症细胞少量浸润;4 wk时肝细胞气球样变明显,可见不同程度碎屑坏死;8 wk时正常肝小叶结构消失,大量炎症细胞浸润.Masson染色显示对照组仅在中央静脉壁上少量绿色胶原纤维;1 wk时中央静脉及汇管区可见绿色胶原纤维;4 wk时胶原纤维间隔较明显;8 wk时大量增生的胶原纤维包绕、分割成大小不等的假小叶.血清学AST、AST、Ⅳ-C、LN及HA检测比较:1 wk组与对照组无差别(P>0.05),4 wk组、8wk组与对照组差别具有显著性意义(P0.05);4、8 wk组与对照组差别具有显著性意义(P<0.001).结论:与组织病理学及血清学检测一样,声触诊量化技术也可作为一种新手段在诊断肝纤维化动态变化中提供一定的参考价值.

关键词：声触诊组织量化技术肝纤维化四氯化碳小鼠

大鼠脂肪来源干细胞对紫外线造成的软骨细胞DNA损伤的修复作用研究

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中国修复重建外科杂志 2017年第5期31卷 600-606页

作者：张金丽刘志河汤文彬熊喜峰张志曹雯娟李孝建广州市红十字会医院暨南大学医学院附属广州红十字会医院创伤外科研究所广州510220 广州市红十字会医院暨南大学医学院附属广州红十字会医院烧伤整形科广州510220

目的探讨大鼠脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)对紫外线照射造成的软骨细胞DNA损伤的修复作用。方法取3~4周龄SD大鼠(体质量100~120 g)腹股沟脂肪,利用Ⅰ型胶原酶消化法体外分离培养ADSCs并传代;取第3代细胞采用流式... 详细信息

目的探讨大鼠脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)对紫外线照射造成的软骨细胞DNA损伤的修复作用。方法取3~4周龄SD大鼠(体质量100~120 g)腹股沟脂肪,利用Ⅰ型胶原酶消化法体外分离培养ADSCs并传代;取第3代细胞采用流式细胞仪检测其表面相关标记,行成骨及成脂诱导鉴定其多向分化潜能。另取SD大鼠关节软骨,利用酶消化法分离培养软骨细胞并传代,并行甲苯胺蓝染色鉴定。取第3代软骨细胞,采用40 J/m^2剂量紫外线照射;照射后细胞分别以正常培养基培养(照射组)、以含ADSCs培养上清的培养基培养(ADSCs上清组)或与ADSCs共培养(ADSCs组)24h。以不进行紫外线照射的正常第3代软骨细胞作为对照(对照组)。采用MTS法检测细胞增殖情况,免疫荧光染色、Western blot法检测软骨细胞DNA损伤标志蛋白磷酸化组蛋白2A变异体(phosphorylatedhistone family 2A variant,γH2AX)的表达情况。结果经流式细胞仪检测及成骨、成脂诱导鉴定,所培养细胞为ADSCs。对照组、照射组及ADSCs上清组吸光度(A)值分别为2.20±0.10、1.34±0.04、1.57±0.06,照射组及ADSCs上清组显著低于对照组,照射组显著低于ADSCs上清组,比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论大鼠ADSCs有助于恢复紫外线照射后的软骨细胞的增殖,降低DNA损伤标志蛋白γH2AX的表达,对紫外线照射所致软骨细胞损伤具有修复作用。

关键词：脂肪来源干细胞软骨细胞辐射修复大鼠

穗花杉双黄酮抑制人脐静脉内皮细胞血管形成的实验研究

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中山大学学报（自然科学版） 2016年第6期55卷 148-152页

作者：张金丽曹文娟熊喜峰戴丽冰刘志河广州市红十字会医院∥暨南大学医学院附属广州红十字会医院创伤外科研究所广东广州510220

为探讨穗花杉双黄酮(Amentoflame,AF)对人脐静脉内皮细胞ECV304血管形成及机制的影响,从而为穗花杉双黄酮治疗肿瘤及其他血管增生性疾病提供理论基础,采用MTS检测AF对ECV304血管内皮细胞增殖的作用,细胞划痕实验观察AF对ECV304细胞迁移... 详细信息

为探讨穗花杉双黄酮(Amentoflame,AF)对人脐静脉内皮细胞ECV304血管形成及机制的影响,从而为穗花杉双黄酮治疗肿瘤及其他血管增生性疾病提供理论基础,采用MTS检测AF对ECV304血管内皮细胞增殖的作用,细胞划痕实验观察AF对ECV304细胞迁移的影响,体外血管形成实验观察AF对ECV304血管形成的影响,Western blot检测AF对ECV304细胞血管形成相关信号通路及蛋白如磷酸化AKT(p-AKT)、金属基质蛋白酶9(Matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、促血管生成素2(angiopoietin 2,Ang 2)表达影响。结果表明AF能够抑制ECV304细胞的增殖作用,并呈梯度依赖性;AF具有抑制ECV304细胞迁移的作用,并且能够抑制ECV304体外血管样结构的形成;Western blot结果显示100μmol/L的AF能够降低ECV304细胞p-AKT、MMP-9、Ang-2的蛋白表达。

关键词：血管生成内皮细胞穗花杉双黄酮

不同性别小鼠化学性肝损伤后的肝再生能力比较

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中国组织工程研究 2012年第31期16卷 5804-5809页

作者：刘玉荣熊喜峰徐丽萍冯世军孙文翰广州医学院组胚教研室广东省广州市510182

背景:肝脏再生能力受多重因素的影响,而性别是否是再生修复过程的一个重要因素尚无定论。目的:比较不同性别小鼠化学性肝损伤后肝脏再生能力是否有差异。方法:采用四氯化碳小鼠皮下注射方法建立急性化学性肝损伤模型。120只昆明小鼠随... 详细信息

背景:肝脏再生能力受多重因素的影响,而性别是否是再生修复过程的一个重要因素尚无定论。目的:比较不同性别小鼠化学性肝损伤后肝脏再生能力是否有差异。方法:采用四氯化碳小鼠皮下注射方法建立急性化学性肝损伤模型。120只昆明小鼠随机均分为糖原染色组和5-溴脱氧尿嘧啶核苷组,各组再按照性别均分为雌雄两组,于造模后第1,3,5,7,10天完整取下小鼠肝脏并称质量,取材前称量小鼠体质量。结果与结论:造模后第7天雌性鼠恢复原肝质量/体质量比,而雄性鼠则表现为下降趋势,不同性别小鼠肝质量/体质量比在各时间点差异无显著性意义(P>0.05);四氯化碳诱导的急性肝损伤主要部位为肝小叶周围的门管区及界板区,损伤部位肝细胞出现脂肪变,少数肝组织出现点状坏死;损伤后1,5,7d雌性小鼠糖原染色明显强于雄性组(P0.05)。说明肝损伤后雌性鼠的再生修复比雄性鼠强,于第7天完成修复。不同性别的昆明小鼠对四氯化碳诱导的急性肝损伤后恢复期中肝脏再生能力具有差异性。

关键词：性别差异四氯化碳肝损伤肝再生糖原染色检测小鼠

前列腺素E1上调血管性痴呆大鼠海马组织VEGF、BDNF的表达

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中国神经精神疾病杂志 2015年第8期41卷 471-476页

作者：刘博会张素平凌莉熊喜峰王慕真何锐邓婉青暨南大学附属第四医院广州市红十字会医院神经内科广州510220 广州市红十字会医院创伤外科研究所

目的探讨前列腺素E1(prostaglandin E1,PGE1)对双侧颈总动脉永久性结扎(bilateral common carotid artery occlusion,BCCAO)大鼠学习记忆功能及海马VEGF、BDNF表达的影响。方法 48只大鼠随机分为PGE1治疗组(PGE1,10μg·kg-1·d-1,iv)、PGE1+VEGFR拮抗剂组(PGE1,10μg·kg-1·d-1,iv;SU5416,25 mg·kg-1·d-1,ip)、溶剂对照组、假手术组,每组12只。术后15 d进行认知功能障碍筛选实验,24 d给予相应药物连续注射7d,药物处理后2 d予Morris水迷宫实验评估大鼠学习记忆功能后处死,蛋白印迹法观察大鼠海马组织VEGF、BDNF的表达。结果与溶剂对照组及PGE1+VEGFR拮抗剂组比,PGE1治疗组平均潜伏期降低(P0.05),但BDNF表达量增多(0.481±0.049 vs.0.373±0.034,P<0.05)。结论 PGE1可上调血管性痴呆大鼠海马组织VEGF、BDNF的表达并可改善血管性痴呆大鼠学习记忆功能,而VEGFR拮抗剂则可部分拮抗PGE1的这一作用。

关键词：前列腺素E1 血管性痴呆大鼠 VEGF BDNF