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作者：熊东炜沈阳农业大学

学位级别：硕士

目的:本试验以解淀粉芽孢杆菌B10为研究对象,对菌株中的黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)降解酶进行分离和鉴定;同时对降解酶的降解特性和催化反应关键位点进行探究。旨在分离得到能够高效降解AFB1的降解酶,同时为日后通过酶工程学改造... 详细信息

目的:本试验以解淀粉芽孢杆菌B10为研究对象,对菌株中的黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)降解酶进行分离和鉴定;同时对降解酶的降解特性和催化反应关键位点进行探究。旨在分离得到能够高效降解AFB1的降解酶,同时为日后通过酶工程学改造提高该酶稳定性和催化反应效率提供一定的理论依据,使其能够早日应用于动物生产实践之中。方法:本试验首先通过蛋白酶K处理,确定解淀粉芽孢杆菌B10培养上清中,具有AFB1降解活性的物质是否为某种蛋白。之后使用硫酸铵对培养上清中的蛋白进行梯度沉淀,经透析除盐后制备粗蛋白液。通过DEAE离子交换色谱对AFB1降解酶进行初步分离,再将最优降解组份通过凝胶过滤色谱进一步分离;最后经SDS-PAGE分离后,进行蛋白质质谱鉴定,以确定B10菌株中AFB1降解酶的氨基酸序列。使用AlphaFold2对该酶蛋白质结构进行建模,并与黄曲霉毒素进行分子对接研究,以分析该酶是否能催化黄曲霉毒素降解,并对与催化降解相关的氨基酸残基进行研究。从B10菌株中,尝试扩增降解酶基因,构建降解酶-pET-28a重组载体;经原核表达后,检测降解酶是否具有活性,并对其酶学特性进行研究。在不同培养时间、温度、pH值、金属离子和其他常见条件下,对降解酶的AFB1降解效率和降解活性进行研究。最后对降解酶的活性位点进行探究,并通过定点突变试验构建降解酶突变体,测定突变体的AFB1降解效率。结果:对培养上清通过蛋白酶K进行处理,首先确定了解淀粉芽孢杆菌B10中AFB1降解活性物质是某种酶。通过硫酸铵梯度沉淀培养上清中的蛋白,发现浓度为80%的硫酸铵粗提蛋白具有最佳的AFB1降解效率。粗提蛋白经DEAE离子交换色谱初步分离,和凝胶过滤色谱进一步分离,确定4-3组份降解活性最高,降解率为87.3%。最后经过SDS-PAGE分离、蛋白质质谱检测及分析匹配之后,初步判定B10菌株中具有AFB1降解活性的酶可能为漆酶。通过AlphaFold2对重组漆酶蛋白质结构进行预测,经拉氏图评估,97%的残基落在可允许的区间内,可用于分子对接研究。将6种黄曲霉毒素与B10漆酶预测模型进行分子对接,各黄曲霉毒素与B10漆酶均有较高的对接打分。B10漆酶Lys-153和Arg-268均与各黄曲霉毒素产生了氢键相互作用,这两个残基极有可能是结合毒素的关键氨基酸;此外,His-87均与各黄曲霉毒素产生了疏水性作用力。结果说明B10漆酶与黄曲霉毒素具有较强的结合能力,即有可能发挥AFB1降解特性。通过PCR扩增得到B10漆酶基因,并成功构建B10漆酶-pET-28a重组载体。B10漆酶与贝莱斯芽孢杆菌SRCM100072中漆酶结构域蛋白YImD同源性达99.64%。通过原核表达B10漆酶,经SDS-PAGE表现为明显且单一的条带,表观分子量约为35 kDa。通过对B10漆酶酶学特性研究发现,B10漆酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH为6.5;在pH 5.0-8.5和30-50℃条件下,B10漆酶稳定性较好。通过测定B10漆酶的AFB1降解效率发现,随着孵育时间增长,AFB1降解率逐渐升高,反应36 h时AFB1降解率可达79.3%。通过测定不同条件对降解效果的影响,发现B10漆酶在pH 6.5时AFB1降解率最高,可达84.2%。温度从20℃-40℃,随着温度升高降解率逐渐升高,40℃时AFB1降解率可达82.4%。Ca、Cu、Co、Fe、Mn、Zn会显著降低B10漆酶的AFB1的降解活性(p<0.001),Na,K略显著降低其降解率(p<0.05);Mg虽然能略微提升降解率,但是对AFB1的降解活性并无显著影响。EDTA(p<0.05)和SDS(p<0.001)会显著降低重组漆酶的AFB1降解活性。值得注意的是添加DMSO后,AFB1降解效率显著提升(p<0.05)。通过定点突变评估B10漆酶中H87、C132和H149残基的作用,发现单突变体H87(p<0.001)、C132(p<0.05)和H149(p<0.001)能够显著降低B10漆酶的AFB1降解活性;AFB1降解率分别下降至54.2%、60.8%和56.8%。双突变体H87/C132、H87/H149、C132/H149的AFB1降解活性发生进一步降低。而三突变体H87/C132/H149的AFB1降解活性几乎完全丧失。结论:确定解淀粉芽孢杆菌B10中降解黄曲霉毒素的活性物质,包含一种新型漆酶;该酶的最适反应温度为50℃,最适反应pH为6.5;在pH 5.0-8.5和30-50℃条件下,稳定性较好。B10漆酶在40℃,pH为6.5时表现出较高的AFB1降解活性,同时Mg和DMSO能够提高B10漆酶降解AFB1的效率;Lys-153、Arg-268、His-87、Cys-132和His-149残基在催化B10漆酶降解AFB1中发挥着重要的作用。

关键词：黄曲霉毒素漆酶降解分子对接定点突变

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玉米赤霉烯酮降解菌的筛选、培养条件优化及降解酶挖掘

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动物营养学报 2023年第11期35卷 7422-7432页

作者：文钧熊东炜龙淼沈阳农业大学动物科学与医学学院重要家畜疫病研究教育部重点实验室沈阳110161

玉米赤霉烯酮(ZEA)是一种由镰刀菌属真菌产生的次级代谢产物,严重影响动物和人类健康。饲料中ZEA的脱毒方法是目前的研究热点。本研究从25种菌株中筛选出能有效降解ZEA的菌株,对其培养条件进行优化,探究不同位置的活性物质对ZEA的降解效... 详细信息

玉米赤霉烯酮(ZEA)是一种由镰刀菌属真菌产生的次级代谢产物,严重影响动物和人类健康。饲料中ZEA的脱毒方法是目前的研究热点。本研究从25种菌株中筛选出能有效降解ZEA的菌株,对其培养条件进行优化,探究不同位置的活性物质对ZEA的降解效果,并应用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)方法对降解酶进行鉴定和分析。结果表明,试验筛选出一株可以高效降解ZEA的菌株,经鉴定为蔬菜芽孢杆菌(Bacillus oleronius)GX01,其在48 h时可降解85.39%的ZEA(5μg/mL),该菌对数生长期为3~12 h,最适培养基为LB肉汤,最适培养和降解温度和pH分别为37℃和9.0。该菌株会分泌降解ZEA的胞外酶,经过分析可能为水解酶、脱羧酶和硫酯酶。结果提示,本研究筛选出的菌株蔬菜芽孢杆菌GX01具有较高的降解ZEA的能力,该菌的胞外酶是降解ZEA的关键酶,这为后续纯化ZEA降解酶并应用于生产实践奠定了基础。

关键词：玉米赤霉烯酮蔬菜芽孢杆菌GX01 生物降解降解酶

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含多种碰撞约束振动系统的周期运动转迁特性

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吉林大学学报（工学版） 2024年第4期54卷 902-916页

作者：王世俊罗冠炜兰州交通大学机电工程学院兰州730070 兰州交通大学甘肃省轨道交通装备系统动力学与可靠性重点实验室兰州730070

研究了一类含刚性及弹性复合约束的两自由度受迫振动系统,基于双参数协同仿真的数值计算方法,在关键参数激振力频率和两质块间间隙值构成的参数平面上获得了系统周期运动的模式类型和存在区域;揭示了无冲击振动和相邻基本周期冲击振动... 详细信息

研究了一类含刚性及弹性复合约束的两自由度受迫振动系统,基于双参数协同仿真的数值计算方法,在关键参数激振力频率和两质块间间隙值构成的参数平面上获得了系统周期运动的模式类型和存在区域;揭示了无冲击振动和相邻基本周期冲击振动之间、相邻基本周期运动之间的转迁规律;分析了弹性约束刚度变化对系统周期运动模式类型和存在区域的影响。结果表明:无冲击振动和相邻基本周期运动之间、相邻基本周期运动之间都存在两类主要的转迁区域,包括舌状域和迟滞域;舌状域中包含具有规律性的亚谐运动,这些亚谐运动和相邻的基本周期运动在舌状域边界线附近构成迟滞域群;增大弹性约束处的刚度值,会使得双参数平面中低频率域的概周期运动、混沌运动存在域显著增大,并分割周期运动存在域。

关键词：机械设计复合约束碰撞振动协同仿真迟滞域群分岔

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国家图书馆藏《春秋释例》清抄本考论

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文献 2024年第4期 50-77页

作者：许俊炜北京大学中文系

国家图书馆藏《春秋释例》清抄本四册，第一、三、四册是孔继涵借翰林院纂修官杨昌霖初辑《永乐大典》成果抄录的副本，保留了杨昌霖初辑时的案语批注，孔继涵、广栻父子的初校批点以及孔广栻获得殿本《释例》后的补校考证；第二册抄录... 详细信息

国家图书馆藏《春秋释例》清抄本四册，第一、三、四册是孔继涵借翰林院纂修官杨昌霖初辑《永乐大典》成果抄录的副本，保留了杨昌霖初辑时的案语批注，孔继涵、广栻父子的初校批点以及孔广栻获得殿本《释例》后的补校考证；第二册抄录时间晚于前者，吸收了第三、四册的初校成果，调整了正文格式，据行款与内容推断，是孔继涵刊刻《微波榭丛书》本《春秋地名》《春秋长历》的底本。初辑录副本保留了《释例》的部分篇次，可推知《释例》篇序是按经文之传有相应发凡解礼之例的原则进行编排，从而发现馆臣妄改篇序之谬；存录了被馆臣误删的“弑戕例”篇题及经传，可据此揭橥《释例》归并《春秋经传集解》例目的编纂原则。全面考察从初辑本到四库本之间的处理细节，可知馆臣辑佚并非单纯地移录文献条目，而是用更为灵活的手段复原《释例》。

关键词：杜预《春秋释例》《永乐大典》孔继涵孔广栻

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合同类型复合的本质表现与规范适用

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法制与社会发展 2024年第2期30卷 206-224页

作者：崔雪炜南开大学法学院

合同类型复合的本质是数项对价不完整的典型主给付关系达致整体性均衡,规制难点是关于各类典型合同规定的适用冲突。传统类推适用方法忽略了缔约人对关于典型合同规定的规避适用意图,特别是将导致权利义务内容的错误。合同类型复合的解... 详细信息

合同类型复合的本质是数项对价不完整的典型主给付关系达致整体性均衡,规制难点是关于各类典型合同规定的适用冲突。传统类推适用方法忽略了缔约人对关于典型合同规定的规避适用意图,特别是将导致权利义务内容的错误。合同类型复合的解释应遵循整体评价方法,整体对价关系中各项典型主给付关系所处地位与分量配置反映了构成类型复合合同的各类典型合同间的功能牵制,应依据功能牵制的结构特性确定参照适用方法。对主次牵连结构,重点是排除适用关于从属性合同类型规定中的效力及责任规定;对包含的结合结构,应明确关于手段性合同类型规定的补充适用地位;对重叠利用结构,应优先采取合同分割说,无法分割的,应适用关于与给付主要目的对应的典型合同的规定,并视情况要求缔约人补足未为之给付或返还已为之给付;对并向聚合结构,应以给付集合体为单位完成合同定性及法律适用;对等值对立结构,应确立双方的抽象给付目的并围绕其对待给付地位确定参照适用方法。

关键词：合同类型复合整体评价方法对价关系结构特性参照适用

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基于混合整数规划的配电网检修多目标优化决策及其灵敏度分析

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电网技术 2024年

作者：夏添沈欣炜尚宇炜中国电力科学研究院有限公司清华大学深圳国际研究生院

合理的检修计划编排可以提升配网经济性和可靠性，配电网数字化提供的准确故障率信息有助于检修决策。本文针对配网馈线长周期检修计划编排问题，把故障风险分为三类，并采取对应运维动作，构建了多目标混合整数线性模型，实现了配网精... 详细信息

合理的检修计划编排可以提升配网经济性和可靠性，配电网数字化提供的准确故障率信息有助于检修决策。本文针对配网馈线长周期检修计划编排问题，把故障风险分为三类，并采取对应运维动作，构建了多目标混合整数线性模型，实现了配网精益化的检修编排。优化求解后的运维成本和可靠性指标均有提升。基于所提模型，改变故障率曲线参数验证模型对信息准确性的灵敏度。结果表明，故障率偏差影响运维决策，进而导致配网各项指标变化最高可达30%。为保证配电系统的可靠性和经济性，应快速推进配网数字化建设，及时更新故障率数据，并重点关注对系统可靠性影响更大的故障类型。

关键词：配电网检修决策优化配网数字化故障率可靠性

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不同种植密度与灌溉定额对盐地碱蓬生长及吸盐量的影响

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草地学报 2024年第3期32卷 958-967页

作者：喜炜马莉新疆农业职业技术学院农业工程分院新疆昌吉831100

为了探究不同灌溉定额与种植密度对盐地碱蓬(Suaeda salsa)生长及吸盐量的影响,采用双因素试验设计[灌溉定额分别为2500 m^(3)·hm^(-2)(W1)、3500 m^(3)·hm^(-2)(W2)和4500 m^(3)·hm^(-2)(W3),盐地碱蓬种植密度分别为20株·m^(-2)(D1)、60株·m^(-2)(D2)、120株·m^(-2)(D3)]比较分析盐地碱蓬株高、茎粗、蓬径等生长指标和吸盐量对不同处理的响应。结果表明:灌溉水量和种植密度对盐地碱蓬生长、生物量、吸盐量和水分利用效率均有显著影响,两者交互效应极其显著;灌溉水量提高对盐地碱蓬株高、茎粗、蓬径具有促进作用,种植密度增加则对盐地碱蓬生长具有抑制作用,两者协调整体效益提高;W2D2的盐地碱蓬生物量最高,达到了24.02 t·hm^(-2),较W1D2和W3D2处理分别提高了33.84%和11.16%;W2D2吸盐量较W1D2和W3D2分别提高了16.48%和29.32%;W1D2处理的水分利用效率最高,较W2D2和W3D2处理分别提高了4.60%和49.50%。基于空间分析法的多目标优化,确定干旱区盐地碱蓬适宜灌溉定额为3227.77~3484.69 m^(3)·hm^(-2),适宜种植密度为50.34~83.27株·m^(-2)。

关键词：盐地碱蓬滴灌盐碱地灌溉定额种植密度

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《国际歌》的诞生及其早期传布

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音乐研究 2024年第3期 69-78页

作者：宋逸炜南京大学历史学院暨学衡研究院

法国诗人欧仁·鲍狄埃在亲历19世纪革命运动,特别是1870年普法战争和1871年巴黎公社等历史事件的基础上,创作出《国际歌》的诗稿,寄托了对国际工人协会的殷切期望。1888年,经工人作曲家皮埃尔·狄盖特谱曲,《国际歌》开始在法国工人党... 详细信息

法国诗人欧仁·鲍狄埃在亲历19世纪革命运动,特别是1870年普法战争和1871年巴黎公社等历史事件的基础上,创作出《国际歌》的诗稿,寄托了对国际工人协会的殷切期望。1888年,经工人作曲家皮埃尔·狄盖特谱曲,《国际歌》开始在法国工人党组织的区域性活动中传唱。通过1896和1899年的两次政治集会,《国际歌》逐步由法国北方推广至全法及欧洲的社会主义运动中。“十月革命”胜利后,《国际歌》一度被用作俄国国歌,后出现在共产国际的正式场合。皮埃尔·狄盖特捍卫著作权的斗争,反映了《国际歌》在全世界无产阶级革命中的重要意义。

关键词：《国际歌》欧仁·鲍狄埃皮埃尔·狄盖特法国

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作为亚圣的颜子与克己复礼——以海昏侯墓衣镜颜子传记为中心

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江西社会科学 2024年第1期44卷 44-55页

作者：张昭炜中国社会科学院世界宗教研究所北京100732

海昏侯墓出土的衣镜显示颜子居孔门弟子之首,衣镜的颜子传记可与《论语》《史记》相印证。颜子传记分为五部分,分别是生平、孔颜的克己复礼为仁、博文约礼、用行舍藏、孔子评颜子。克己复礼在颜子之学中居首,是颜子之学的主旨。通过《... 详细信息

海昏侯墓出土的衣镜显示颜子居孔门弟子之首,衣镜的颜子传记可与《论语》《史记》相印证。颜子传记分为五部分,分别是生平、孔颜的克己复礼为仁、博文约礼、用行舍藏、孔子评颜子。克己复礼在颜子之学中居首,是颜子之学的主旨。通过《论语》内证:克己复礼与“克、伐、怨、欲不行焉”分别表现“克”之能义与约束义,与孔子回答仲弓问仁的“己所不欲,勿施于人”形成乾坤互通;外证于《左传》的“克己复礼,仁也”。内圣与外王一致,儒者的内圣根本确立后,陋巷与天下只是内圣转化外王的不同场域而已,颜子与禹稷同功。颜子内圣之学是宋明理学的重要思想资源,奠定了宋明理学治欲修身的基本结构。

关键词：海昏侯墓衣镜克己复礼孔子与颜子缄默维度治疗欲望

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破产债权交易的理论构造及规制路径

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齐鲁学刊 2024年第1期 97-110页

作者：蔡嘉炜中国政法大学法与经济学研究院北京100088

破产债权交易市场的培育属于破产制度市场化改革的关键组成部分,渐成规模的破产债权交易市场,将对我国企业重整程序开展产生愈益显著的影响。域外经验表明,破产债权交易市场的高效运转,将助力于强化破产债权的流动性,降低企业融资成本,... 详细信息

破产债权交易市场的培育属于破产制度市场化改革的关键组成部分,渐成规模的破产债权交易市场,将对我国企业重整程序开展产生愈益显著的影响。域外经验表明,破产债权交易市场的高效运转,将助力于强化破产债权的流动性,降低企业融资成本,推动重整程序的成功开展。不过,破产债权交易的开展同样也会给部分重整程序的有序进行带来挑战,如侵害少数债权人权益,阻碍重整计划获得批准等。是故,从制度建构的角度出发,一方面,未来我国应积极着手建立完善的破产债权交易市场基础设施,并鼓励交易行为开展;另一方面,还需重点围绕交易信息披露、恶意表决行为限制以及受让债权瑕疵承继等问题,探索有针对性的规制方案并建立起配套的体系性规则。

关键词：破产债权交易信息披露善意表决瑕疵债权重整投资重整新融资

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