检索结果-南通市图书馆

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

葡萄风信子DFR基因克隆及表达分析

葡萄风信子DFR基因克隆及表达分析

作者：焦淑珍西北农林科技大学

学位级别：硕士

葡萄风信子是一种从欧洲引进的多年生草本球根花卉，花色主要以不同程度的蓝色为主，也有少数白色品种，是研究单子叶植物蓝色形成机理的理想材料。目前关于葡萄风信子的研究主要集中于种球繁殖、遗传转化、花期调控、解剖结构分析等方... 详细信息

葡萄风信子是一种从欧洲引进的多年生草本球根花卉，花色主要以不同程度的蓝色为主，也有少数白色品种，是研究单子叶植物蓝色形成机理的理想材料。目前关于葡萄风信子的研究主要集中于种球繁殖、遗传转化、花期调控、解剖结构分析等方面，对于花青素代谢分子基础的研究还未见报道。课题组前期试验表明，葡萄风信子花瓣蓝白差异主要是基于其花瓣表皮细胞亚层（栅栏组织）花青素的存在与否。花青素是影响葡萄风信子蓝色形成的重要物质，与植物生长过程及人类/动物饮食密切相关。有关花青素生物合成途径的研究已较为成熟。二氢黄酮醇4-还原酶（dihydroflavonol4-reductase, DFR）是植物花青素合成中的重要酶。本研究以具有蓝色葡萄风信子亚美尼亚（Muscariarmeniacum）和白色葡萄风信子白魔术（Muscari botryoides cv. White Magic）为研究材料，通过转录组测序结果，结合代谢谱综合分析，从中分离并克隆葡萄风信子DFR基因;对DFR基因进行比对，进化分析以及亚细胞定位等基本特征分析;同时利用Real-timePCR分析结构基因的表达变化，并对花、根、茎、叶等组织中的花青素含量做了定性定量的分析，主要结果如下： 1.从葡萄风信子花瓣中克隆到了三条具有开放阅读框的DFR基因，分别命名为MaDFR1、MaDFR2a、MaDFR2b。序列分析表明，MaDFR1包括一个长度为984bp的开放读码框（ORF），编码327个氨基酸;MaDFR2a和MaDFR2b全长1392bp，包含一个长度为76bp的5’非翻译区和215bp的3’非翻译区，均包括一个1101bp的完整开放阅读框（Open Reading Frame, ORF），编码366个氨基酸;比较发现MaDFR2a与MaDFR2b的氨基酸残基同源性为98%，但是与MaDFR1的同源性只有41%;MaDFR2a与MaDFR2b与其他植物的DFR蛋白同源性较高。 2.生物信息学分析表明，三个DFR蛋白可能为亲水性蛋白，均具有两个跨膜区，无信号肽，具有丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸磷酸化位点;α-螺旋和无规则卷曲是三个DFR蛋白的主要二级结构元件;MaDFR1、MaDFR2a和MaDFR2b编码的蛋白三级结构非常相似，且具有典型的手型结构，中间形成一个裂沟。NADP（H）的结合位点位于靠近N-端的裂沟表面;利用NCBI的BlastP预测发现，MaDFR1、MaDFR2a和MaDFR2b编码的氨基酸序列具有典型的DFR蛋白功能结构域，均属NADB-Rossmann超家族。 3.构建了pBI221-MaDFR1-GFP、pBI221-MaDFR2a-GFP、pBI221-MaDFR2b-GFP亚细胞定位的表达载体，利用基因枪将其转化洋葱表皮细胞后在激光共聚焦显微镜下观察，三个DFR融合蛋白均定位于整个细胞中。 4.研究了白色葡萄风信子和蓝色葡萄风信子中DFR基因的表达模式。采用实时定量PCR技术，分析了DFR基因在5个时期的花瓣和根、茎、叶中的表达情况。结果表明，MaDFR1、MaDFR2a和MaDFR2b在葡萄风信子花组织中表达较高，根，茎，叶中微量表达;MaDFR1在白色葡萄风信子中高表达，随着花发育，在完全着色未开放的花蕾中表达最高，此后开始降低。然而在蓝色葡萄风信子中除了在完全开放的花瓣中表达量高于白色葡萄风信子，其它时期都明显较低;MaDFR2a和MaDFR2b在白色品种和蓝色品种中表达量尽管有差异，但整体趋势一致。 5.利用高效液相色谱测定葡萄风信子花青素的含量。结果显示，蓝色的葡萄风信子中，着色的花瓣中花青素含量较高，未着色的花蕾以及根、茎、叶中几乎检测不到花青素。

关键词：葡萄风信子花色 DFR 克隆表达分析

秦艽配方颗粒制备过程中标准汤剂与其不同方法干燥品质量相关性分析

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中国实验方剂学杂志 2019年第24期25卷 118-123页

作者：郭超焦淑珍徐超郝彩琴冷晓红宁夏职业技术学院银川750001 宁夏大学农学院银川750021

目的:建立秦艽标准汤剂及其不同方法干燥品的HPLC指纹图谱,对其质量相关性进行分析评价。方法:采用HPLC,Inert Sustain C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-磷酸为流动相进行梯度洗脱,检测波长240 nm,流速0.8 m L·min^-1,柱温40℃... 详细信息

目的:建立秦艽标准汤剂及其不同方法干燥品的HPLC指纹图谱,对其质量相关性进行分析评价。方法:采用HPLC,Inert Sustain C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-磷酸为流动相进行梯度洗脱,检测波长240 nm,流速0.8 m L·min^-1,柱温40℃。以对照指纹图谱及标准汤剂指纹图谱对秦艽标准汤剂不同方法干燥品从化学成分一致性、共有化学成分含量一致性以及主要化学成分含量和转移率等方面进行质量相关性分析。结果:建立秦艽标准汤剂对照指纹图谱,根据峰匹配数据确定15批秦艽标准汤剂指纹图谱中10个共有峰,从10个共有峰中指认出马钱苷酸,6’-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷,獐牙菜苦苷,龙胆苦苷,獐牙菜苷5个化学成分。质量相关性分析结果表明,3种不同干燥方法制得干燥品水溶液与秦艽标准汤剂在化学成分种类及数量上一致性良好。但在共有化学成分含量及主要化学成分转移率方面,减压干燥所得干燥品与标准汤剂的质量低于喷雾干燥与冷冻干燥所得干燥品。结论:建立了秦艽标准汤剂-不同方法干燥品HPLC指纹图谱,通过化学成分、共有化学成分含量、主要化学成分含量及转移率3方面的质量相关性分析,全面反映了二者质量相关性情况。建议在秦艽配方颗粒制备的关键干燥工艺中采用喷雾干燥或冷冻干燥工艺,该研究为秦艽配方颗粒的制备工艺及质量控制提供了参考依据。

关键词：秦艽配方颗粒标准汤剂减压干燥喷雾干燥冷冻干燥

同方期刊数据库

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

园艺植物热激转录因子研究进展

果树学报 2020年第3期37卷 419-430页

作者：焦淑珍姚文孔张宁波徐伟荣宁夏大学农学院银川750021 宁夏大学葡萄酒学院银川750021 葡萄与葡萄酒教育部工程研究中心·宁夏葡萄与葡萄酒研究院·宁夏葡萄与葡萄酒工程技术研究中心银川750021 宁夏优势特色作物现代分子育种重点实验室银川750021

当植物遭受环境胁迫时,热激转录因子(Heat stress transcription factors,Hsfs)作为重要的调节因子,广泛参与多种生物和非生物胁迫响应,在植物耐高温胁迫和其他生命活动发挥重要作用。相比于动物,植物中的Hsfs家族成员数量众多、功能多... 详细信息

当植物遭受环境胁迫时,热激转录因子(Heat stress transcription factors,Hsfs)作为重要的调节因子,广泛参与多种生物和非生物胁迫响应,在植物耐高温胁迫和其他生命活动发挥重要作用。相比于动物,植物中的Hsfs家族成员数量众多、功能多样、调控机制更加复杂。目前植物Hsfs的研究主要集中于模式植物和部分大田作物,且研究对象多数为A族成员,有关园艺植物中热激转录因子的研究起步较晚。笔者详细介绍了植物热激转录因子的家族成员和蛋白结构,重点阐述了模式植物和园艺植物中Hsfs在应答温度(高温、低温),干旱以及高盐等胁迫中的研究进展,并探讨和展望了植物热激转录因子未来可能的研究热点,以期为进一步阐明园艺植物热激转录因子的功能和分子机制提供依据和参考。

关键词：园艺植物热激转录因子非生物胁迫功能

葡萄风信子二氢黄酮醇4-还原酶基因(DFR)的克隆与表达分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

农业生物技术学报 2014年第5期22卷 529-540页

作者：焦淑珍刘雅莉娄倩姜玲旱区作物逆境生物学国家重点实验室(西北农林科技大学)/农业部西北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室西北农林科技大学林学院西北农林科技大学园艺学院

葡萄风信子(Muscari armeniacum)是一类重要的球根花卉,其花色呈现特殊的蓝色。花青素是影响葡萄风信子蓝色形成的重要物质,与植物生长过程及人类/动物饮食密切相关。有关花青素生物合成途径的研究已较为成熟,但由于葡萄风信子基因资源... 详细信息

葡萄风信子(Muscari armeniacum)是一类重要的球根花卉,其花色呈现特殊的蓝色。花青素是影响葡萄风信子蓝色形成的重要物质,与植物生长过程及人类/动物饮食密切相关。有关花青素生物合成途径的研究已较为成熟,但由于葡萄风信子基因资源缺乏,其花色形成的机理目前尚不清楚。二氢黄酮醇4-还原酶(dihydroflavonol 4-reductase,DFR)是植物花青素合成中的重要酶。本研究采用RACE技术从葡萄风信子花瓣中克隆到两条DFR基因(MaDFR2a和MaDFR2b),GenBank登录号分别为KJ619963和KJ619964。序列分析表明,MaDFR2a和MaDFR2b全长1 392 bp,包含一个长度为76 bp的5’非翻译区和215 bp的3’非翻译区,均包括一个1 101 bp的完整开放阅读框(open reading frame,ORF),编码366个氨基酸,氨基酸相似性为98%,与其他植物的DFR蛋白同源性较高。聚类分析表明,葡萄风信子DFR最先与单子叶植物聚为一类。生物信息学分析表明,两个DFR蛋白可能为亲水性蛋白,均具有两个跨膜区,无信号肽。亚细胞定位分析显示,两个DFR基因均定位于整个细胞中。α-螺旋和无规则卷曲是两个DFR蛋白的主要二级结构元件。MaDFR2a和MaDFR2b编码的蛋白三级结构非常相似,中间形成一个裂沟,可以进行催化反应。花青素含量测定显示,着色的花器官中花青素含量较高,根、茎、叶以及未着色的花蕾中几乎检测不到花青素。荧光定量PCR分析发现,MaDFR2a和MaDFR2b在葡萄风信子花组织中表达较高,根、茎和叶中微量表达;MaDFR2a和MaDFR2b均在未着色的花蕾时期开始表达,随着花色加深,在完全着色的花中表达最高,此后逐渐降低,但MaDFR2b在未着色的花蕾期和完全着色的花中表达相对较高。研究结果表明,DFR可能是影响蓝色葡萄风信子形成的重要基因。

关键词：花色葡萄风信子 DFR 克隆表达分析

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

会阴侧切术几点改进——附50例临床分析

锦州医科大学学报 1987年第1期 50-51页

作者：焦淑珍锦州医学附属医院院妇产科

会阴切开缝合术,是产科常用的手术之一。主要目的在于防止会阴造成分娩阻滞以及自然分娩或手术产时所引起的严重会阴裂伤。分为侧斜切开和正中切开两种。一般多

关键词：会阴侧切开术胎盘娩出处女膜阴道正常分娩皮肤粘膜肛查阴道粘膜临床分析

葡萄E3泛素酶HOS1基因克隆、表达及抗血清制备

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

园艺学报 2021年第6期48卷 1173-1182页

作者：俞沁含焦淑珍吴楠张宁波徐伟荣宁夏大学农学院银川750021 宁夏大学食品与葡萄酒学院银川750021

HOS1(High expression of osmotically responsive genes 1)编码1个具有E3泛素连接酶活性的蛋白,是模式植物拟南芥冷反应信号转导途径的关键负调控因子,但其在多年生葡萄属植物中参与低温胁迫应答的分子机制尚不明确。以欧洲酿酒葡萄品... 详细信息

HOS1(High expression of osmotically responsive genes 1)编码1个具有E3泛素连接酶活性的蛋白,是模式植物拟南芥冷反应信号转导途径的关键负调控因子,但其在多年生葡萄属植物中参与低温胁迫应答的分子机制尚不明确。以欧洲酿酒葡萄品种‘霞多丽’的叶片为供试材料,克隆了VvHOS1基因,其全长2931bp,编码976个氨基酸,在第74~106个氨基酸处存在RING类型的锌指结构域(zf-C3H43)。系统发育分析表明,葡萄属植物的HOS1蛋白与番茄、烟草、茶树的亲缘关系最近。将VvHOS1抗原表位丰富肽段(1~320 aa)构建至原核表达载体pET28a-SUMO的BamHⅠ与HindⅢ位点,转化大肠杆菌。经IPTG诱导发现,pET28a-VvHOS11-320在大肠杆菌Rosetta(DE3)中高表达,融合蛋白主要以包涵体形式存在。将纯化后的重组蛋白作为抗原免疫大耳白兔,获得anti-VvHOS1多克隆抗体,ELISA检测效价为1︰51200,具有较强的Western特异性。该抗血清能够特异性检测‘霞多丽’葡萄叶片中的VvHOS1蛋白。(4℃)低温胁迫6、36与48 h时VvHOS1上调表达显著。

关键词：葡萄 HOS1 原核表达多克隆抗体低温胁迫表达模式分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

宫颈注射安定促进宫口扩张的临床观察

锦州医学院学报 1985年第4期 31-32页

作者：滕振杰焦淑珍锦州医学院附属医院妇产科

临床上由于各种原因,常致产程延缓或停滞,处理的关键是促进宫口扩张和胎先露下降。1985年3～6月,我们随机选取20例产程延缓或停滞的产妇,使用安定宫颈注射,收到了良好的效果。

关键词：安定子宫产妇产程安定药女生殖器宫口扩张宫颈注射

葡萄风信子MaMYB1基因的克隆及表达分析

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

西北农林科技大学学报（自然科学版） 2014年第11期42卷 156-162页

作者：姜玲刘雅莉娄倩焦淑珍权永辉西北农林科技大学旱区作物逆境生物学国家重点实验室陕西杨凌712100 西北农林科技大学林学院陕西杨凌712100 西北农林科技大学园艺学院陕西杨凌712100

【目的】克隆葡萄风信子MYB转录因子基因(MaMYB1),并对其进行生物信息学和表达模式的分析。【方法】以开蓝色花的葡萄风信子品种"亚美尼亚"为材料,利用RACE技术得到其MaMYB1基因cDNA全长,对其进行生物信息学分析,利用酵母单杂交方法检... 详细信息

【目的】克隆葡萄风信子MYB转录因子基因(MaMYB1),并对其进行生物信息学和表达模式的分析。【方法】以开蓝色花的葡萄风信子品种"亚美尼亚"为材料,利用RACE技术得到其MaMYB1基因cDNA全长,对其进行生物信息学分析,利用酵母单杂交方法检测其转录激活活性,并用实时定量PCR方法分析该基因在根、茎、叶及不同发育时期花中的表达特性。【结果】通过RACE-PCR,克隆得到953bp的MaMYB1基因,其开放阅读框长750bp,编码249个氨基酸,推测的蛋白分子质量约为27.7ku,理论等电点为9.3。MaMYB1基因编码的蛋白序列中具有2个典型的MYB结构域R2和R3,且在R3结构域下游含有与BHLH蛋白结合的[D/E]Lx2[R/K]x3Lx6Lx3R结构域。MaMYB1与玉米ZmP1及拟南芥MYB12的关系较近。酵母单杂交检测表明:MaMYB1具有转录激活活性。实时定量PCR分析结果表明:MaMYB1在不同组织中均有表达,以在花中表达量较高,且在花不同发育时期表达量差异显著。【结论】从葡萄风信子中克隆到1个新的MYB基因MaMYB1;推测该基因可能参与了葡萄风信子花发育过程的调控。

关键词：葡萄风信子 MYB转录因子基因克隆表达分析

基于数据挖掘的葡萄籽中原花青素提取工艺研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

轻工科技 2019年第10期35卷 1-2,27页

作者：郭超徐超焦淑珍宁夏职业技术学院宁夏银川750011 宁夏中药材开发与利用工程技术研究中心宁夏银川750011 宁夏大学农学院宁夏银川750021

目的:基于数据挖掘分析对葡萄籽中原花青素提取工艺优化。方法:以数据挖掘分析为基础,建立基础工艺参数同时确定所需优化工艺参数,并利用正交试验对参数进行优化。结果:最优工艺参数为葡萄籽粉碎度为60目,石油醚脱脂,以乙醇为提取溶剂,1... 详细信息

目的:基于数据挖掘分析对葡萄籽中原花青素提取工艺优化。方法:以数据挖掘分析为基础,建立基础工艺参数同时确定所需优化工艺参数,并利用正交试验对参数进行优化。结果:最优工艺参数为葡萄籽粉碎度为60目,石油醚脱脂,以乙醇为提取溶剂,1∶7料液比加入50%浓度乙醇,60℃超声波提取30min,共提取3次。结论:该研究方法可用于具有一定研究基础的工艺再改进、再优化。

关键词：数据挖掘葡萄籽原花青素提取工艺研究