检索结果-南通市图书馆

羊布鲁菌外膜蛋白Bp-26基因的克隆及其原核表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

动物医学进展 2013年第9期34卷 15-17页

作者：史巧芸荣辉郭莳雨贾晓晓张珈宁朱华培杜丽成鹰焦寒伟王凤阳海南大学农学院海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海口市动物基因工程重点实验室海南海口570228

应用PCR扩增羊布鲁菌M5-90株基因组DNA,得到大小为753bp的Bp-26基因,将其克隆入pMD20-T载体上,测序正确后,构建重组质粒pET-28a-Bp-26,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导其表达,用Western blot鉴定蛋白。结果表明,成功构建了pET-2... 详细信息

应用PCR扩增羊布鲁菌M5-90株基因组DNA,得到大小为753bp的Bp-26基因,将其克隆入pMD20-T载体上,测序正确后,构建重组质粒pET-28a-Bp-26,转化到大肠埃希菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导其表达,用Western blot鉴定蛋白。结果表明,成功构建了pET-28a-Bp-26原核表达载体,并在E.coli BL21中表达Bp-26基因,为开展羊布鲁菌Bp-26目的蛋白的抗原性分析和功能研究奠定了基础。

关键词：羊布鲁菌 Bp-26基因克隆原核表达

基因Ⅳ型戊型肝炎病毒ORF3对靶细胞脂肪因子表达的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

动物医学进展 2013年第6期34卷 78-80页

作者：杜丽成鹰史巧芸焦寒伟荣辉张珈宁贾晓晓郭莳雨朱华培王凤阳海南大学农学院海南海口570228 海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海南海口570228 海口市动物基因工程重点实验室海南海口570228

为了探讨戊型肝炎病毒ORF3影响靶细胞脂肪因子表达的分子机制,应用蛋白芯片技术比较稳定表达EGFP-ORF3的HEK293细胞和稳定表达EGFP的HEK293细胞的脂肪因子表达谱,筛选获得显著上调/下调的脂肪因子。结果表明,在稳定表达EGFP-ORF3的HEK29... 详细信息

为了探讨戊型肝炎病毒ORF3影响靶细胞脂肪因子表达的分子机制,应用蛋白芯片技术比较稳定表达EGFP-ORF3的HEK293细胞和稳定表达EGFP的HEK293细胞的脂肪因子表达谱,筛选获得显著上调/下调的脂肪因子。结果表明,在稳定表达EGFP-ORF3的HEK293细胞,Fas和TIMP-2的表达水平升高,而ACE-2表达水平降低。研究结果为HEV ORF3对于靶细胞重要脂肪因子表达影响的分子机制研究提供了重要依据。

关键词：蛋白芯片戊型肝炎病毒靶细胞脂肪因子表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

布鲁氏菌外膜蛋白16基因的克隆及原核表达

中国畜牧兽医 2013年第9期40卷 51-54页

作者：贾晓晓焦寒伟郭莳雨史巧芸荣辉张珈宁朱华培杜丽成鹰王凤阳海南大学农学院海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海口市动物基因工程重点实验室海南海口570228

为了成功克隆外膜蛋白16(outer membrane proteins 16,Omp16)基因并对其进行原核表达,试验根据GenBank中羊布鲁氏菌M5-90株外膜蛋白Omp16基因序列(登录号:JF918760.1)设计1对引物,从布鲁氏菌基因组中扩增出大小约为507bp的目的基因片段... 详细信息

为了成功克隆外膜蛋白16(outer membrane proteins 16,Omp16)基因并对其进行原核表达,试验根据GenBank中羊布鲁氏菌M5-90株外膜蛋白Omp16基因序列(登录号:JF918760.1)设计1对引物,从布鲁氏菌基因组中扩增出大小约为507bp的目的基因片段,凝胶回收纯化目的片段,连接入pMD20-T质粒,转化E.coli DH5α并测序,测序正确后再亚克隆入pET-28a(+)表达载体,构建重组质粒pET-Omp16,转化入E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导其表达,最后用Western blotting分析方法鉴定诱导得到的蛋白。结果表明,成功构建了pET-Omp16原核表达载体,并在E.coli BL21中表达了Omp16基因,诱导得到的蛋白经鉴定与目的蛋白大小一致,证明成功表达了目的基因。

关键词：布鲁氏菌外膜蛋白16基因克隆原核表达

布鲁菌Omp31基因的克隆、表达及其蛋白的生物信息学分析

同方期刊数据库博看期刊评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

黑龙江畜牧兽医 2013年第9期 8-10页

作者：郭莳雨成鹰贾晓晓史巧芸荣辉张珈宁朱华培杜丽焦寒伟王凤阳海南大学农学院海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室/海口市动物基因工程重点实验室海口570228

为了进一步研究Omp31蛋白的功能,试验利用DNAMan软件设计上、下游引物,通过PCR技术从马耳他布鲁菌M5-90株中克隆获得Omp31基因,构建原核表达重组质粒pET28a-Omp31,并转化E.coli BL21(DE3)感受态;再以IPTG诱导重组蛋白表达,进行SDS-PAGE... 详细信息

为了进一步研究Omp31蛋白的功能,试验利用DNAMan软件设计上、下游引物,通过PCR技术从马耳他布鲁菌M5-90株中克隆获得Omp31基因,构建原核表达重组质粒pET28a-Omp31,并转化E.coli BL21(DE3)感受态;再以IPTG诱导重组蛋白表达,进行SDS-PAGE和Western-blot检测,并运用生物信息学软件对所获得的核苷酸序列进行分析。结果表明:成功克隆了马耳他布鲁菌外膜蛋白Omp31基因,并构建出重组质粒pET28a-Omp31;经IPTG诱导,得到与预期大小相符的目的蛋白;生物信息学分析发现,Omp31蛋白核苷酸序列包括1个723 bp的开放读码框,编码240个氨基酸;该蛋白二级结构中存在大量无规则卷曲和少量α螺旋。

关键词：布鲁菌Omp31 克隆原核表达生物信息学分析

中国荷斯坦奶牛MD-2基因在HEK293细胞中的表达及稳定细胞系的构建

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医科学 2019年第4期49卷 493-498页

作者：焦寒伟赵宇帅学宏伍莉陈吉轩王红均黄庆洲西南大学动物科学学院兽医科学工程研究中心重庆荣昌402460

将中国荷斯坦奶牛髓样分化蛋白-2 (myeloid differentiation protein-2,MD-2) cDNA全长克隆至pEGFP-N1真核表达载体,利用双酶切与测序进行鉴定。经脂质体2000,将pMD-2-EGFP重组质粒转染至HEK293细胞中,应用倒置荧光显微镜、流式细胞术和... 详细信息

将中国荷斯坦奶牛髓样分化蛋白-2 (myeloid differentiation protein-2,MD-2) cDNA全长克隆至pEGFP-N1真核表达载体,利用双酶切与测序进行鉴定。经脂质体2000,将pMD-2-EGFP重组质粒转染至HEK293细胞中,应用倒置荧光显微镜、流式细胞术和Western-blot分别检测融合蛋白的表达,利用极限稀释的方法获取单细胞,并利用G418抗性筛选,获取稳定细胞系。结果发现,目的基因含有一个483 bp的开放阅读框,编码160个氨基酸。双酶切鉴定和测序结果均表明,MD-2基因编码区正确插入pEGFP-N1真核表达载体,读码框架正确,MD-2-EGFP融合蛋白在HEK293细胞中,能够成功表达;极限稀释获取单细胞,用250?g/mL的G418筛选得到的细胞系,经流式细胞术和Western-blot检测,在pMD-2-EGFP稳定细胞系组,分子质量约为46 ku处,发现了特异性条带,而pEGFP-N1空载稳定细胞组,以及空白的HEK293细胞对照组,均未发现条带。综上所述,本研究成功构建了真核表达载体pMD-2-EGFP,并在HEK293细胞中能够成功表达;经极限稀释,并利用G418抗性筛选,成功获得了pMD-2-EGFP和pEGFP-N1稳定细胞系,这为进一步研究中国荷斯坦奶牛奶牛MD-2基因的生物学功能奠定基础。

关键词：中国荷斯坦奶牛髓样分化蛋白-2 EGFP 真核表达稳定细胞系

海南原鸡CD14 cDNA的克隆及其生物信息学分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国家禽 2013年第24期35卷 7-10页

作者：荣辉张珈宁杜丽成鹰郝永昌焦寒伟贾晓晓史巧芸吴科榜胡日查王凤阳海南大学农学院海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室(筹)海口市动物基因工程重点实验室海南海口570228

从海南原鸡外周血白细胞中提取总RNA,以总RNA为模板,利用RT-PCR技术,成功获得海南原鸡CD14全长cDNA,并对其进行较系统的生物信息学分析,内容包括序列特征分析、同源性分析、编码蛋白质理化性质及结构预测。结果表明:海南原鸡CD14的CDS... 详细信息

从海南原鸡外周血白细胞中提取总RNA,以总RNA为模板,利用RT-PCR技术,成功获得海南原鸡CD14全长cDNA,并对其进行较系统的生物信息学分析,内容包括序列特征分析、同源性分析、编码蛋白质理化性质及结构预测。结果表明:海南原鸡CD14的CDS序列长度为1398 bp,编码465个氨基酸,该基因编码的蛋白质相对分子质量约为4.971 ku,理论等电点为6.41。对编码蛋白的分子结构预测发现,该蛋白为跨膜蛋白,其二级结构中,α-螺旋占47.31%,β-折叠占6.88%,无规则卷曲占45.81%。比对分析表明,海南原鸡CD14基因的核酸序列与人、小鼠、牛、猕猴的同源性均在30%～38%之间。

关键词：原鸡 CD14 cDNA 克隆生物信息学分析

基因Ⅳ型戊型肝炎病毒 ORF3对 HEK293细胞 MAPKs磷酸化的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

动物医学进展 2014年第4期35卷 46-48页

作者：杜丽成鹰史巧芸焦寒伟荣辉张珈宁贾晓晓郭莳雨朱华培赵天靖徐开莲王凤阳海南大学农学院海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海口市动物基因工程重点实验室海南海口570228

为了分析戊型肝炎病毒ORF3蛋白对于靶细胞MAPK磷酸化的影响,应用人磷酸化MAPK抗体微阵列比较稳定表达EGFP-ORF3的HEK293细胞和稳定表达EGFP的HEK293细胞的磷酸化MAPK表达谱,筛选获得显著上调/下调的磷酸化MAPK。结果表明,在稳定表达EGFP... 详细信息

为了分析戊型肝炎病毒ORF3蛋白对于靶细胞MAPK磷酸化的影响,应用人磷酸化MAPK抗体微阵列比较稳定表达EGFP-ORF3的HEK293细胞和稳定表达EGFP的HEK293细胞的磷酸化MAPK表达谱,筛选获得显著上调/下调的磷酸化MAPK。结果表明,在稳定表达EGFP-ORF3的HEK293细胞,p-Akt2、p-Aktpan、p-ERK1、p-ERF2、p-RSK1的表达水平升高,而p-P38б表达水平降低。结果表明,ORF3蛋白影响了HEK293细胞的p-Akt2、p-Aktpan、p-ERK1、p-ERF2、p-RSK1、p-P38б等MAPKs的磷酸化水平,为HEV ORF3对于靶细胞磷酸化MAPK表达影响的分子机制研究提供了重要依据。

关键词：蛋白芯片戊型肝炎病毒靶细胞 MAPK磷酸化表达

H5N1型禽流感NS1基因在HEK293细胞中的表达及稳定细胞系的构建

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国兽医学报 2018年第11期38卷 2125-2130页

作者：王红均张其彬伍莉陈吉轩帅学宏丁孟建黄庆洲焦寒伟西南大学动物科学学院兽医科学工程研究中心

将H5N1型禽流感病毒NS1（non-structural protein 1）基因插入pEGFP-N1真核表达载体中,获得重组质粒pNS1-EGFP,经酶切鉴定并测序后,去内毒素提取pNS1-EGFP质粒,在脂质体转染试剂作用下将pNS1-EGFP质粒转染HEK293细胞,利用倒置荧光显微镜... 详细信息

将H5N1型禽流感病毒NS1（non-structural protein 1）基因插入pEGFP-N1真核表达载体中,获得重组质粒pNS1-EGFP,经酶切鉴定并测序后,去内毒素提取pNS1-EGFP质粒,在脂质体转染试剂作用下将pNS1-EGFP质粒转染HEK293细胞,利用倒置荧光显微镜、FCM和Western blot 3种方法检测NS1-EGFP融合蛋白的表达,利用极限稀释的方法获取单细胞,并利用G418抗性筛选获取稳定细胞系。结果显示,NS1基因正确插入pEGFP-N1真核表达载体,NS1-EGFP融合蛋白读码框架正确;3种检测方法表明,NS1-EGFP融合蛋白在HEK293细胞中能够表达;pEGFP-N1和NS1-EGFP稳定细胞系流式细胞仪检测,阳性率分别为95.74%和96.10%,Western blot检测结果发现,HEK293空白细胞和pEGFP-N1稳定细胞系未见任何条带,NS1-EGFP稳定细胞系在51 000处见特异性条带,综上说明稳定细胞系构建成功。本试验为进一步深入研究禽流感病毒NS1基因的生物学功能作铺垫。

关键词： H5N1型禽流感病毒非结构蛋白1 EGFP 融合蛋白真核表达稳定细胞系

从猪粪便中分离纯化毕氏肠微孢子虫的改良方法

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

西南大学学报（自然科学版） 2020年第12期42卷 67-72页

作者：莫碧莹焦寒伟徐金智罗碱倪文佳李田包佳玲周泽扬西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室重庆400715 西南大学微孢子虫感染与防控重庆市重点实验室重庆400715 西南大学动物科学学院/兽医科学工程研究中心重庆荣昌402460 重庆师范大学重庆401331

为了从粪便样品中获得纯度更高的毕氏肠微孢子虫(Enterocytozoon bieneusi,E.bieneusi).我们从患腹泻病症的猪粪便中,通过改良网孔过滤、Percoll等密度离心以及蔗糖梯度离心等步骤,将粪便中的杂质去除,获得纯度更高的毕氏肠微孢子虫.同... 详细信息

为了从粪便样品中获得纯度更高的毕氏肠微孢子虫(Enterocytozoon bieneusi,E.bieneusi).我们从患腹泻病症的猪粪便中,通过改良网孔过滤、Percoll等密度离心以及蔗糖梯度离心等步骤,将粪便中的杂质去除,获得纯度更高的毕氏肠微孢子虫.同时在纯化的必要环节进行PCR法辅以韦伯氏染色法对获得的样品进行鉴定,从而进一步提高纯化的目的性和准确性.此方法大大提高了所获得毕氏肠微孢子虫的纯度,最高能达到占样品总微生物的15%.比现有报道的9%提高了近1倍.毕氏微孢子虫感染人类和牲畜,严重威胁公共卫生健康.但由于其在体外纯化和繁殖困难,关于它致病机理的研究非常有限.通过此改良方法获得更加纯化的毕氏肠微孢子虫,为开展更多更深入的研究提供了坚实的基础.

关键词：毕氏肠微孢子虫粪便样品纯化 PCR 韦伯氏染色