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Cigarette Smoke Extract Inhibits the Proliferation of Alveolar Epithelial Cells and Augments the Expression of P21^(WAF1)

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Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences) 2008年第1期28卷 6-10页

作者：焦宗宪敖启林葛晓娜熊密 Institute of Pathology Tongji Hospital Department of Pathology Tongji Medical College Huazhong University of Science and Technology Key laboratory of Respiratory Diseases Ministry of Health

Cigarette smoking is intimately related with the development of chronic obstructive pulmonary diseases, and alveolar epithelium is a major target for the exposure of cigarette smoke extract. In order to investigate the effect of cigarette smoke extract on the proliferation of alveolar epithelial cell type Ⅱ and its relationship with P21^WAF1, the alveolar epithelial type Ⅱ cell line （A549） cells were chosen as surrogate cells to represent alveolar epithelial type Ⅱ cells. MTT assay was used to detect cell viability after interfered with different concentrations of cigarette smoke extract. It was observed cigarette smoke extract inhibited the growth of A549 cells in a dose- and time-dependent manner. The morphological changes, involving the condensation and margination of nuclear chromatin, even karyorrhexis, were observed by both Hoechst staining and electronic microscopy. Flow cytometry analysis demonstrated the increased cell percentages in G1 and subG1 phases after the cells were incubated with cigarette smoke extract. The expression of p21^WAF1 protein and mRNA was also significantly increased as detected by the methods of Western blot or reverse transcription-polymerase chain reaction respectively. In conclusion, cigarette smoke extract inhibits the proliferation of alveolar epithelial cell type Ⅱ and blocks them in G1/S phase. The intracelhilar accumulation of P21^WAF1 may be one of the mechanisms which contribute to cigarette smoke extract-induced inhibition of cell proliferation.

关键词： cigarette smoke extract alveolar epithelial cell cell proliferation P21^WAF1

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香烟烟雾提取物抑制肺泡上皮细胞的增殖并诱导其凋亡(英文)

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生理学报 2006年第3期58卷 244-254页

作者：焦宗宪敖启林熊密华中科技大学同济医学院病理学系武汉430030

香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)中含有丰富的氧化剂和自由基,由它所引起的氧化应激可导致肺泡壁的损伤进而发展为肺气肿。近年来,围绕CSE损伤肺泡壁作用机制的研究较为活跃,但其结果却一直存在着分歧。本实验的目的是观察... 详细信息

香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)中含有丰富的氧化剂和自由基,由它所引起的氧化应激可导致肺泡壁的损伤进而发展为肺气肿。近年来,围绕CSE损伤肺泡壁作用机制的研究较为活跃,但其结果却一直存在着分歧。本实验的目的是观察CSE对肺泡Ⅱ型上皮细胞的损伤作用并探讨与其相关的分子机制。MTT比色法的结果显示,CSE以时间和剂量依赖性的方式降低细胞的增殖活力,流式细胞术的分析结果表明细胞增殖周期被阻滞在G_1/S期。Hoechst 33258染色以及透射电镜观察从形态上确认CSE诱导细胞凋亡的发生,DNA梯的出现和Annexin V-FITC/碘化丙啶双染色的结果从分子水平得到进一步的证实。同时,运用流式细胞术检测到CSE诱导的凋亡伴随着Fas受体的高表达和caspase-3的显著活化。另外,使用H_2DCFDA染色,经激光共聚焦显微镜术测得细胞内氧自由基在细胞受到CSE刺激以后大量快速积累。结果表明CSE能够抑制肺泡Ⅱ型上皮细胞来源的A549细胞的生长和增殖,并诱导细胞凋亡,由Fas受体所介导的死亡受体途径参与此凋亡过程,而CSE所引起的氧化应激则可能是阻止肺泡上皮细胞生长增殖并诱导其凋亡的始动因素。

关键词：香烟烟雾肺泡上皮细胞凋亡 Fas受体

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香烟烟雾提取物对肺泡上皮细胞增殖及P21^(WAF1)表达的影响

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中国组织化学与细胞化学杂志 2006年第2期15卷 182-189页

作者：焦宗宪葛晓娜熊密华中科技大学同济医学院病理学系武汉430030

目的探讨香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)对人类肺泡Ⅱ型上皮细胞来源的A549细胞增殖的影响及其与P21WAF1表达的关系。方法噻唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度CSE(5%,10%和20%)作用于细胞24,48和72h后对细胞增殖活力的影响;Hoe... 详细信息

目的探讨香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)对人类肺泡Ⅱ型上皮细胞来源的A549细胞增殖的影响及其与P21WAF1表达的关系。方法噻唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度CSE(5%,10%和20%)作用于细胞24,48和72h后对细胞增殖活力的影响;Hoechst33258染色和电镜观察细胞的形态变化;流式细胞术检测细胞周期动力学变化;运用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术和免疫印迹法检测不同浓度CSE作用48h后P21WAF1在mRNA和蛋白质水平的变化。结果CSE对A549细胞增殖的抑制呈时间和剂量依赖性。Hoechst33258染色和电镜观察结果为核染色质的浓缩和边集,甚至于核碎裂。细胞周期动力学表现为CSE作用48h时随着药物浓度的增高G1期和亚G1期的细胞呈递增趋势,10%CSE作用不同时间后,随着作用时间的延长处于G1期和亚G1期的细胞亦呈递增趋势;且随着CSE浓度的增高P21WAF1在mRNA和蛋白质水平表达水平呈递增趋势。与对照组比较差异有显著性。结论CSE能够引起肺泡Ⅱ型上皮细胞的生长抑制并使细胞周期阻滞在G1期,P21WAF1在细胞内的高表达可能是CSE导致肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖抑制的机制之一。

关键词：香烟烟雾提取物肺泡上皮细胞细胞增殖 P21^WAF1

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N-乙酰半胱氨酸减轻香烟烟雾提取物所致的A549细胞损伤

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基础医学与临床 2014年第1期34卷 72-77页

作者：张强弩焦宗宪常嘉琛兰州大学基础医学院病理学研究所甘肃兰州730000

目的研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对香烟烟雾提取物(CSE)暴露后的A549细胞的影响。方法 MTT法测定不同处理后A549细胞的存活率;用PI单染和AnnexinV-FITC/PI双染检测细胞的周期变化和凋亡变化;用荧光探针H2DCFDA检测细胞内活性氧簇(ROS)变化... 详细信息

目的研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对香烟烟雾提取物(CSE)暴露后的A549细胞的影响。方法 MTT法测定不同处理后A549细胞的存活率;用PI单染和AnnexinV-FITC/PI双染检测细胞的周期变化和凋亡变化;用荧光探针H2DCFDA检测细胞内活性氧簇(ROS)变化;用实时荧光定量PCR和Western blot技术检测胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)的表达变化。结果 CSE致A549细胞存活的A值为0.55±0.04,显著低于对照组的0.78±0.03(P<0.05),NAC处理使A值显著上升至0.67±0.04(P<0.05),并消除了G1期阻滞,降低细胞凋亡率等。IGFBP-3的表达在CSE刺激后,有所升高,在接受NAC保护后,其表达水平有所降低(P<0.05)。结论 NAC可以抑制香烟烟雾提取物造成的A549细胞损伤,IGFBP-3可能在香烟烟雾提取导致细胞损伤的机制中发挥作用。

关键词： IGFBP-3 香烟烟雾提取物肺泡上皮细胞 N-乙酰半胱氨酸

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转化生长因子β_1和碱性成纤维细胞生长因子在肾小球纤维化病变中的表达

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广州医学院学报 2001年第1期29卷 17-21,25页

作者：焦宗宪广州医学院病理学教研室广州510182

目的 :探讨转化生长因子 β1(TransformingGrowthFactorbeta1,TGF β1)和碱性成纤维细胞生长因子(basicFibroblastGrowthFactor,bFGF)在肾小球纤维化疾病中的表达部位及其作用。方法 :运用Masson′s三色染色法将 5 2例肾脏疾病标本按纤... 详细信息

目的 :探讨转化生长因子 β1(TransformingGrowthFactorbeta1,TGF β1)和碱性成纤维细胞生长因子(basicFibroblastGrowthFactor,bFGF)在肾小球纤维化疾病中的表达部位及其作用。方法 :运用Masson′s三色染色法将 5 2例肾脏疾病标本按纤维化程度的不同分组 ,应用免疫组化法检测两种生长因子在各组中的表达情况。结果 :肾小球发生纤维化的过程中 ,TGF β1和bFGF在系膜细胞、肾小囊壁层上皮细胞、肾小管上皮细胞等内出现了增强表达且随着纤维化程度的加重 ,两者的表达水平也是逐渐增高的。结论 :TGF β1和bFGF参与了肾小球纤维化的过程且其表达水平与肾小球纤维化严重程度呈正比。

关键词：转化生化因子β1 碱性成纤维细胞生长因子肾小球纤维化

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维甲酸拮抗丙烯醛损伤肺泡Ⅱ型上皮细胞的作用

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中国组织工程研究 2012年第50期16卷 9437-9442页

作者：程航远张强弩朱艳芳王晨昱王勇刘沨焦宗宪兰州大学基础医学院病理学研究所甘肃省兰州市730000

背景:肺泡Ⅱ型上皮细胞是肺泡上皮组织的干细胞,它的损伤和多种肺部疾病密切相关。有研究显示维甲酸不仅能促进发育期大鼠肺泡的形成,还能促进肺损伤后的修复,但也有研究表明维甲酸在肺气肿模型的治疗中无明显作用。目的:探索维甲酸能... 详细信息

背景:肺泡Ⅱ型上皮细胞是肺泡上皮组织的干细胞,它的损伤和多种肺部疾病密切相关。有研究显示维甲酸不仅能促进发育期大鼠肺泡的形成,还能促进肺损伤后的修复,但也有研究表明维甲酸在肺气肿模型的治疗中无明显作用。目的:探索维甲酸能否拮抗丙烯醛对原代培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的损伤作用。方法:综合Dobbs等的细胞分离方法并加以改良,从普通雄性SD大鼠肺组织中成功分离出较高纯度的肺泡Ⅱ型上皮细胞,并行原代培养。应用MTT法检测丙烯醛对肺泡Ⅱ型上皮细胞活性的影响,流式细胞术检测在丙烯醛及维甲酸作用下肺泡Ⅱ型上皮细胞的细胞周期变化。结果与结论:MTT检测结果显示丙烯醛作用下大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞生长明显受抑,而且肺泡Ⅱ型上皮细胞活性与药物浓度成剂量效应关系。流式细胞仪检测结果显示丙烯醛作用下G1期细胞增加,维甲酸对丙烯醛的拮抗作用不明显。提示丙烯醛对原代培养的肺泡Ⅱ型上皮细胞具有明显的损伤作用,但维甲酸对丙烯醛的拮抗作用不明显,其作用机制还需进一步深入研究。

关键词：原代培养肺泡Ⅱ型上皮细胞分离纯化丙烯醛维甲酸肺损伤流式细胞术细胞活性细胞周期

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脑钠肽在房颤患者中的临床意义

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中国实用医药 2015年第3期10卷 105-106页

作者：黄秀丽焦宗宪兰州大学基础医学院 730000

目的评估脑钠肽(BNP)在持续性心房颤动(房颤)患者中的意义。方法持续性心房颤动患者469例作为心房颤动组,同期来本院健康体检者200例作为对照组,采静脉血样,同时对心房颤动患者进行分组心房颤动心功能正常组(302例)与心房颤动心衰组(167... 详细信息

目的评估脑钠肽(BNP)在持续性心房颤动(房颤)患者中的意义。方法持续性心房颤动患者469例作为心房颤动组,同期来本院健康体检者200例作为对照组,采静脉血样,同时对心房颤动患者进行分组心房颤动心功能正常组(302例)与心房颤动心衰组(167例),测定BNP分别与正常对照组进行比较。结果心房颤动组无论是心功能正常还是心力衰竭,BNP水平均高于对照组,多元线型回归分析,BNP与左心房内径(LAD)高度相关,呈正相关,心房颤动心力衰竭组BNP与左室射血分数(LVEF)明显相关,呈负相关。结论心房颤动患者BNP明显升高,与左心房内径及LVEF密切相关,BNP可作为心房颤动患者病情预测的指标之一。

关键词：脑钠肽心房颤动左室射血分数左心房内径

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香烟烟雾引起的氧化应激在肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤中的作用

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医学综述 2011年第17期17卷 2568-2571页

作者：张强弩焦宗宪兰州大学基础医学院病理学研究所兰州730000

香烟烟雾中含有自由基等大量的强氧化剂,因而可以导致氧化应激。氧化应激可对肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)造成损伤,但是其对AECⅡ造成损伤的机制至今还未完全清楚,近期这个领域研究的热点集中在三个方面:氧化应激诱导的AECⅡ凋亡、氧化应... 详细信息

香烟烟雾中含有自由基等大量的强氧化剂,因而可以导致氧化应激。氧化应激可对肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)造成损伤,但是其对AECⅡ造成损伤的机制至今还未完全清楚,近期这个领域研究的热点集中在三个方面:氧化应激诱导的AECⅡ凋亡、氧化应激与炎性反应的相互作用对AECⅡ的损伤以及氧化应激对AECⅡ结构和功能的直接损伤。AECⅡ损伤与肺部损伤有密切关系,对其损伤机制的研究,有助于呼吸道疾病的诊断和治疗。

关键词：香烟烟雾氧化应激肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡炎性反应

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慢性砷中毒对小鼠循环系统体循环的作用机制研究

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中国地方病防治 2018年第3期33卷 277-278页

作者：黄秀丽焦宗宪赵新张掖市甘州区人民医院甘肃734000 张掖市人民医院兰州大学基础医学院

一般来说,砷中毒会致使神经衰弱、皮肤损害、以及神经炎,严重者会导致感觉系统损伤、四肢麻木、皮肤癌、肝炎、再生造血机制损伤。本文以小鼠为实验对象,对慢性砷中毒对小鼠体循环心肌细胞、心脏射血能以及体细胞结构改变和作用机制进... 详细信息

一般来说,砷中毒会致使神经衰弱、皮肤损害、以及神经炎,严重者会导致感觉系统损伤、四肢麻木、皮肤癌、肝炎、再生造血机制损伤。本文以小鼠为实验对象,对慢性砷中毒对小鼠体循环心肌细胞、心脏射血能以及体细胞结构改变和作用机制进行研究,具体实验方法及结论下文阐述。

关键词：慢性砷中毒体循环循环系统小鼠细胞结构改变系统损伤神经衰弱皮肤损害

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肺泡巨噬细胞及其相关细胞因子与慢性阻塞性肺疾病相互关系研究进展

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国际呼吸杂志 2012年第21期32卷 1641-1645页

作者：常嘉琛焦宗宪兰州大学基础医学院病理学研究所 730000

慢性阻塞性肺疾病（COPD）的特点是肺脏在内、外界环境中各种有害因子的刺激下表现出的异常炎症反应，吸烟是COPD的主要危险因素。巨噬细胞在COPD炎症反应和慢性支气管炎的发病中起着关键作用，在气道、肺实质、支气管肺泡灌洗液以及痰... 详细信息

慢性阻塞性肺疾病（COPD）的特点是肺脏在内、外界环境中各种有害因子的刺激下表现出的异常炎症反应，吸烟是COPD的主要危险因素。巨噬细胞在COPD炎症反应和慢性支气管炎的发病中起着关键作用，在气道、肺实质、支气管肺泡灌洗液以及痰液中数量明显增多，此外，在气道中巨噬细胞数量与COPD严重程度存在一定的相关性。在COPD疾病进展中，巨噬细胞产生并释放炎症介质，细胞因子如IL-8、IL-6、TNF-α以及MMP-9、MMP-12等促进炎症的发生、发展最终破坏肺组织引起不可逆性气流受限。

关键词：慢性阻塞性肺疾病香烟烟雾巨噬细胞炎症

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