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小鼠缺血性脑卒中后病灶部位CD45^(+)CD11b^(-)免疫细胞种类以及基因表达谱分析

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临床和实验医学杂志 2022年第14期21卷 1457-1461页

作者：朱彦兵王欢潘雨花蕾赵羽商张成杰王崧张拥波首都医科大学附属北京友谊医院北京市临床医学研究所北京100050 首都医科大学附属北京友谊医院神经内科北京100050

目的探讨小鼠缺血性脑卒中发生后不同时间点病灶部位CD45^(+)CD11b^(-)免疫细胞浸润情况以及基因表达的动态变化。方法将60只6~8周龄成年雄性C57鼠采用随机数字表法分为6组:假手术组(Sham组)和缺血性脑卒中后第1天(D1L组)、第3天组(D3L... 详细信息

目的探讨小鼠缺血性脑卒中发生后不同时间点病灶部位CD45^(+)CD11b^(-)免疫细胞浸润情况以及基因表达的动态变化。方法将60只6~8周龄成年雄性C57鼠采用随机数字表法分为6组:假手术组(Sham组)和缺血性脑卒中后第1天(D1L组)、第3天组(D3L组)、第7天组(D7L组)、第14天组(D14L组)和第21天组(D21L组)。Sham组小鼠给予缺血性脑卒中处理但不进行大脑中动脉结扎,缺血性脑卒中各组小鼠给予缺血性脑卒中手术处理。按上述时间点取病灶组织消化后,流式细胞术分选CD45^(+)CD11b^(-)免疫细胞,然后应用RNA-seq技术,对小鼠不同时间点分选的CD45^(+)CD11b^(-)免疫细胞进行基因表达谱测序、生物信息学分析以及细胞种类验证。结果在缺血性脑卒中发生后,γδT淋巴细胞和天然杀伤性T淋巴细胞的数目逐渐上升,在D3达到高峰,然后逐渐下降趋于稳定;CD4 T淋巴细胞和CD8 T淋巴细胞数目逐渐上升,在D14达到高峰;调节性T淋巴细胞数目在D14出现明显的上升。结论缺血性脑卒中发生后不同时间点,不同种类的CD45^(+)CD11b^(-)免疫细胞从外周循环系统浸润到病灶组织,早期主要以发挥先天免疫功能的CD45^(+)CD11b^(-)免疫细胞为主,中晚期主要以发挥适应性免疫的CD4 T淋巴细胞和CD8 T淋巴细胞为主。本研究首次运用转录组测序技术和流式细胞术系统阐述了缺血性脑卒中后不同时间点病灶部位CD45^(+)CD11b^(-)免疫细胞的浸润情况以及基因表达特点,为研究缺血性卒中发生、发展的分子机制提供基础。

关键词：小鼠缺血性脑卒中流式细胞术 CD45^(+)CD11b^(-)免疫细胞基因表达谱

抑制磷脂酶D1活性可促进缺血性脑卒中模型小鼠神经功能恢复

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实验动物与比较医学 2022年第4期42卷 322-332页

作者：朱彦兵白帆陶少鑫潘雨花蕾王欢赵羽商王崧于艳北京市临床医学研究所首都医科大学附属北京友谊医院北京100050 首都医科大学附属北京友谊医院神经内科北京100050 中国康复研究中心中国康复科学所北京100068 神经损伤与康复北京市重点实验室北京100068

目的探讨小鼠缺血性脑卒中发生后不同时期病灶脑组织自噬的动态变化,以及抑制磷脂酶D(phospholipase D,PLD)1活性与自噬及神经功能的关系。方法先用21只8周龄成年雄性C57BL/6小鼠构建缺血性脑卒中模型,随机分为假手术组和缺血性脑卒中后... 详细信息

目的探讨小鼠缺血性脑卒中发生后不同时期病灶脑组织自噬的动态变化,以及抑制磷脂酶D(phospholipase D,PLD)1活性与自噬及神经功能的关系。方法先用21只8周龄成年雄性C57BL/6小鼠构建缺血性脑卒中模型,随机分为假手术组和缺血性脑卒中后4 h、6 h、8 h、12 h、24 h、72 h组,每组各3只,采用蛋白质印迹法和免疫荧光染色法检测小鼠病灶脑组织中自噬相关蛋白LC3的表达及分布情况。另将36只8周龄成年雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、缺血性脑卒中后腹腔注射PBS组和4个浓度(0.3、0.9、1.8和3.6 mg/kg)的PLD活性抑制剂FIPI组,每组各6只;缺血性脑卒中发生后的第1、第3和第7天,分别通过贴纸去除实验、触须诱发前肢放置实验和TTC染色法评估抑制剂最佳浓度及其对神经功能和脑梗死面积的影响。再将9只8周龄成年雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、缺血性脑卒中后立即腹腔注射PBS和0.9 mg/kg FIPI组,每组3只,通过蛋白质印迹法检测FIPI对自噬相关蛋白表达的影响。最后将36只8周龄成年雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组、缺血性脑卒中后立即腹腔注射PBS组以及不同时间窗(术后立即和术后4 h、8 h、12 h)腹腔注射0.9 mg/kg FIPI组,每组各6只,通过行为学实验和TTC染色法评估缺血性脑卒中小鼠的神经功能和脑梗死面积。结果小鼠缺血性脑卒中发生后,病灶组织中LC3-Ⅱ相对表达水平开始升高,24 h达到峰值(P<0.05),然后逐渐下降。与PBS组相比,给予0.9 mg/kg的PLD1活性抑制剂FIPI组能明显抑制小鼠缺血性脑卒中后病灶组织中LC3-Ⅱ相对表达水平(P<0.05),缩小梗死面积(P<0.05),促进损伤后神经功能的恢复(P<0.05)。与PBS组相比,除了缺血性脑卒中后立即给予FIPI组外,缺血性脑卒中后4 h、8 h和12 h腹腔给予FIPI也都可以明显缩小梗死面积(P<0.05),使小鼠神经功能得到明显恢复(P<0.05)。结论缺血性脑卒中发生后24 h病灶组织自噬最为明显,降低PLD1活性可以明显抑制自噬,从而促进缺血性脑卒中后神经功能的恢复。同时,除了缺血性脑卒中后立即给予FIPI外,延迟4~12 h给予FIPI也可以缩小梗死面积,促进神经功能的恢复,这拓宽了缺血性脑卒中的治疗窗口期,可能为临床治疗脑卒中提供新的策略。

关键词：缺血性脑卒中自噬磷脂酶D1 神经功能 C57BL/6小鼠

双阴性T细胞通过抑制外周和局部炎症反应治疗小鼠缺血性脑卒中的机制研究

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双阴性T细胞通过抑制外周和局部炎症反应治疗小鼠缺血性脑卒中的...

小鼠缺血性脑卒中后磷脂酶D1在自噬和神经损伤中的作用

第十四届全国免疫学学术大会

作者：田丹潘雨花蕾赵羽商王欢田月孙广永王崧施文李铭扬黄诗扬朱彦兵张栋首都医科大学附属北京友谊医院

缺血性脑卒中后,继发的炎症反应加重了病灶区的组织损伤、阻碍了神经细胞功能的恢复。因此,有效控制继发炎症反应对改善缺血性脑卒中的损伤和预后至关重要。双阴性T(DNT)细胞是一类新型免疫抑制性细胞,我们前期研究发现DNT细胞在自身免... 详细信息

缺血性脑卒中后,继发的炎症反应加重了病灶区的组织损伤、阻碍了神经细胞功能的恢复。因此,有效控制继发炎症反应对改善缺血性脑卒中的损伤和预后至关重要。双阴性T(DNT)细胞是一类新型免疫抑制性细胞,我们前期研究发现DNT细胞在自身免疫性疾病和过敏性疾病中发挥了重要的免疫调节作用。在本研究中,我们通过尾静脉过继转移小鼠CD4 T细胞转化的DNT细胞至缺血性脑卒中小鼠。DNT细胞治疗后小鼠早期卒中梗死灶面积显著缩小,中长期小鼠行为学恢复明显改善。本研究发现:1)DNT细胞治疗后24小时内调节了外周巨噬细胞向TREM2+抑炎巨噬细胞分化,抑制了脑卒中早期的外周炎症反应。2)转录组测序表明DNT细胞高表达Ccr5和Ccl5基因,治疗后小鼠脑卒中病灶促炎细胞因子表达水平明显降低。应用Ccr5-/-DNT细胞治疗证明DNT细胞通过CCR5迁移进入脑病灶组织并抑制了病灶局部炎症反应。3)此外,DNT细胞通过分泌CCL5促进调节性T细胞迁入病灶并分泌TGFβ,进一步放大了DNT细胞的免疫抑制效能。本研究揭示了DNT细胞在小鼠缺血性脑卒中早期炎症发生至远期恢复中发挥的免疫抑制机制,为将DNT细胞疗法应用到缺血性脑卒中治疗奠定基础。

关键词：缺血性脑卒中双阴性T细胞巨噬细胞调节性T细胞

来源： cnki会议评论

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临床和实验医学杂志 2019年第8期18卷 790-794页

作者：陶少鑫朱彦兵于山平魏玲张拥波李继梅王崧赵羽商屈梦瑶潘雨花蕾魏峥首都医科大学附属北京友谊医院科研实验中心北京100050 首都医科大学附属北京友谊医院神经内科北京100050 美国Emory大学医学院麻醉学系亚特兰大佐治亚州30322

目的探讨在小鼠缺血性脑卒中模型中,磷脂酶D1(PLD1)在自噬和神经损伤中的作用。方法将6只6~8周龄成年雄性C57鼠采用随机数字表法分为两组,sham组和stroke组,每组各3只。sham组小鼠给予缺血性脑卒中处理但不进行大脑中动脉结扎,stroke组... 详细信息

目的探讨在小鼠缺血性脑卒中模型中,磷脂酶D1(PLD1)在自噬和神经损伤中的作用。方法将6只6~8周龄成年雄性C57鼠采用随机数字表法分为两组,sham组和stroke组,每组各3只。sham组小鼠给予缺血性脑卒中处理但不进行大脑中动脉结扎,stroke组小鼠给予缺血性脑卒中处理。观察两组小鼠脑神经元内PLD1的变化。然后构建条件性基因敲除小鼠,将小鼠采用随机数字表法分为3组:sham PLD1^(fl/fl)组12只,缺血性脑卒中后PLD1^(fl/fl)组(stroke PLD1^(fl/fl)组) 12只,缺血性脑卒中后PLD1-KO组(stroke PLD1-KO组) 12只,然后利用免疫荧光染色、Western blotting、TTC染色法观察sham PLD1^(fl/fl)组小鼠,缺血性脑卒中后PLD1^(fl/fl)小鼠和缺血性脑卒中后PLD1-KO小鼠神经元自噬(LC3-Ⅱ)的情况及自噬对梗死面积的影响,明确PLD1的作用机制。结果在缺血性脑卒中后24 h,缺血半暗带的神经元中,stroke组较sham组PLD1表达明显增多。在条件性敲除小鼠中,stroke PLD1^(fl/fl)组较sham PLD1^(fl/fl)组自噬重要标志物LC3-Ⅱ明显升高(P <0. 05),而条件性敲除神经元内PLD1后,stroke PLD1-KO组较stroke PLD1^(fl/fl)组LC3-Ⅱ明显降低(P <0. 05),同时,梗死面积也明显缩小(P <0. 000 1)。结论缺血性脑卒中后神经元内PLD1表达升高,LC3-Ⅱ增多,抑制PLD1引起的过度自噬可以有效改善缺血性脑卒中后的神经损伤。

关键词：小鼠缺血性脑卒中 PLD1 自噬神经元

真空处理和花蕾时期对百日草花序浸染法的影响

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湖北农业科学 2024年第10期63卷 81-84,90页

作者：潘雨荷邢加成叶要妹丁永亮朱欣悦严玉阳刘玉洁华中农业大学园艺林学学院/湖北省林业信息工程技术研究中心/园艺植物国家教育部重点实验室武汉430070

在百日草(Zinnia elegans)S5头状花序形态和子房细胞学观察的基础上,通过不同配比农杆菌重悬液、真空处理方法和头状花序发育时期对非组培的花序浸染法进行百日草转化技术适用性探索。结果表明,S5花序发育的外部形态和细胞学观察发现小... 详细信息

在百日草(Zinnia elegans)S5头状花序形态和子房细胞学观察的基础上,通过不同配比农杆菌重悬液、真空处理方法和头状花序发育时期对非组培的花序浸染法进行百日草转化技术适用性探索。结果表明,S5花序发育的外部形态和细胞学观察发现小花蕾7及以后发育时期的心皮处于开放状态。农杆菌重悬液为1/2 MS+0.03%Silwet L-77+10%蔗糖+0.01 mg/L 6-BA(OD600 nm=0.4)处理蕾3头状花序得到0.35%的转化率。真空断续处理有利于转化率的提高,较好的处理组合是真空断续2 min+30 s处理蕾5至蕾7头状花序,收获其中的小花蕾7至蕾9的转化率可达3.23%~5.00%。

关键词：百日草(Zinnia elegans) 花序浸染遗传转化真空处理花蕾时期

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