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表达猪细小病毒VP2蛋白的重组猪伪狂犬病毒在小鼠体内的免疫反应

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病毒学报 2016年第2期32卷 195-202页

作者：付朋飞潘鑫龙乔涵杨兴武朱前磊郭晓庆张宇陈红英河南农业大学牧医工程学院郑州450002 大北农动物医学研究中心北京100195 河南省动物疫病预防控制中心郑州450008 郑州市猪重大疫病防控重点实验室郑州450002

为了研制出能够同时预防猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)和猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)的二联活疫苗,本研究将PPV VP2基因克隆到伪狂犬病毒通用转移质粒pG中,构建重组伪狂犬转移质粒pGVP2。利用脂质体转染法将重组质粒pG... 详细信息

为了研制出能够同时预防猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)和猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)的二联活疫苗,本研究将PPV VP2基因克隆到伪狂犬病毒通用转移质粒pG中,构建重组伪狂犬转移质粒pGVP2。利用脂质体转染法将重组质粒pGVP2和PRV HB98弱毒株DNA共转染至猪睾丸(ST)细胞,使其在ST细胞内发生同源重组,经5次绿色荧光空斑纯化重组病毒rPRV-VP2。分别用重组病毒rPRV-VP2、亲本PRV HB98弱毒株、商品化PPV灭活苗和DMEM细胞培养液免疫6周龄雌性昆明小鼠,2周后进行二免。一免后第7周用PRV强毒NY株对小鼠进行攻毒。结果获得表达VP2基因的重组病毒rPRV-VP2,经ELISA试验、血清中和试验(SN)、血凝抑制试验(HI)和流式细胞检测发现,重组病毒rPRV-VP2株可有效刺激小鼠机体产生抗PPV和PRV抗体,同时具有增强小鼠机体细胞免疫反应的能力,且对PRV强毒攻击具有保护作用。结果表明,重组病毒rPRV-VP2可作为同时预防PPV和PRV感染的重组疫苗候选株。

关键词：猪细小病毒猪伪狂犬病毒 VP2蛋白重组病毒免疫效力

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FDM的出丝模型完善和补偿方法优化研究

精密制造与自动化 2015年第1期 31-34页

作者：潘鑫龙陈元枝邓艳桂林电子科技大学电子工程与自动化学院桂林541004 桂林半岛电子科技有限公司桂林541001

在实际研究熔融挤出成型(FDM)工艺挤出材料截面形状的基础上,针对已经存在的挤出数学模型提出挤出分区概念,并根据分区确定了新的挤出数学模型。通过分析数学模型和可行的补偿方法提出了可行的分区补偿方法。随后依据分区挤出模型和补... 详细信息

在实际研究熔融挤出成型(FDM)工艺挤出材料截面形状的基础上,针对已经存在的挤出数学模型提出挤出分区概念,并根据分区确定了新的挤出数学模型。通过分析数学模型和可行的补偿方法提出了可行的分区补偿方法。随后依据分区挤出模型和补偿方法设定合适的参数,在自主研制的Pi Bot 3D打印设备上验证测试模型和补偿方法。实验结果证明该模型能够较准确的描述FDM打印的实际过程,并通过分区补偿方法提高FDM工艺的成型精度。

关键词：线宽熔融挤出成型(FDM) 挤出分区分区补偿

共表达PCV2 ORF2和猪IL-18基因的重组猪伪狂犬病毒对小鼠的免疫原性

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微生物学报 2016年第1期56卷 120-129页

作者：郭晓庆朱前磊潘鑫龙杨兴武乔涵王淑娟陈红英河南农业大学郑州市猪重大疫病防控重点实验室河南郑州450002 河南省动物疫病预防控制中心河南郑州450008

【目的】研制猪伪狂犬病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的二联活疫苗,并用猪IL-18作为免疫佐剂。【方法】将猪IL-18基因插入到质粒p GO中,获得的重组转移质粒p GO18与猪PRV弱毒HB98株DNA共转染ST细胞,并进行空斑筛选和纯化;RT-PCR和Weste... 详细信息

【目的】研制猪伪狂犬病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的二联活疫苗,并用猪IL-18作为免疫佐剂。【方法】将猪IL-18基因插入到质粒p GO中,获得的重组转移质粒p GO18与猪PRV弱毒HB98株DNA共转染ST细胞,并进行空斑筛选和纯化;RT-PCR和Western blot分别从转录和蛋白水平鉴定其表达情况。将重组病毒PGO18和PGO、PRV弱毒株HB98、PCV2灭活商品苗和1640细胞培养基分别免疫6周龄雌性昆明小鼠,4周后二次免疫,二免后4周用PCV2 DF强毒和PRV Min/A强毒接种小鼠。通过ELISA、血清中和试验和流式细胞术及攻毒保护试验评价重组病毒的免疫原性。【结果】获得了重组病毒PGO18,并且可在ST细胞内表达;PGO18可诱导小鼠机体产生PCV2的ELISA和PRV的中和抗体水平,刺激CD3+、CD4+、CD8+T细胞亚群的增殖,且能有效抵抗PCV2和PRV强毒攻击。【结论】IL-18基因可增强重组病毒的免疫效果,使重组病毒具有良好的免疫原性,有望成为防治PCV2和PRV的候选疫苗株。

关键词： PCV2 ORF2 IL-18 重组伪狂犬病毒免疫效力

鉴别猪伪狂犬病病毒强毒与疫苗毒双重PCR检测方法的建立

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华北农学报 2014年第2期29卷 94-97页

作者：顾阳高晓云程琨潘鑫龙崔保安陈红英河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002 河南农业大学生命科学学院河南郑州450002

根据猪伪狂犬病病毒(PRV)gE、gH基因序列,设计合成了2对特异性引物,分别建立gE和gH基因的单项PCR扩增方法。通过对PCR扩增条件的优化,建立了鉴别PRV强毒和疫苗毒的双重PCR检测方法,即利用一次PCR反应,从强毒株基因组中可同时扩增出2条... 详细信息

根据猪伪狂犬病病毒(PRV)gE、gH基因序列,设计合成了2对特异性引物,分别建立gE和gH基因的单项PCR扩增方法。通过对PCR扩增条件的优化,建立了鉴别PRV强毒和疫苗毒的双重PCR检测方法,即利用一次PCR反应,从强毒株基因组中可同时扩增出2条大小分别为429 bp(gE基因)、355 bp(gH基因)的特异性片段,从弱毒株DNA中仅扩增出1条大小为355 bp的片段,而猪圆环病毒2型和猪细小病毒DNA扩增结果均为阴性。敏感性试验表明,所建立的双重PCR检测方法最低有效检测量为1×102TCID50/0.1 mL。该方法适合对PRV强毒和疫苗毒的快速鉴别诊断。

关键词：伪狂犬病毒双重PCR 检测强毒株疫苗株

猪伪狂犬病病毒河南分离株gE全基因的克隆与序列分析

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华北农学报 2015年第1期30卷 137-141页

作者：高晓云顾阳潘鑫龙郭小参崔保安陈红英河南农业大学畜牧兽医工程学院河南郑州450002 普莱克生物工程股份有限公司河南洛阳471000

为了确定河南部分地区按照正常免疫程序接种猪伪狂犬病病毒（ PRV）基因缺失苗的猪场是否发生了PRV野毒感染，了解新流行株的主要毒力基因gE是否发生变异，利用PCR方法，对南阳、周口、巩义、济源、漯河、原阳等地采集的疑似PRV感染的... 详细信息

为了确定河南部分地区按照正常免疫程序接种猪伪狂犬病病毒（ PRV）基因缺失苗的猪场是否发生了PRV野毒感染，了解新流行株的主要毒力基因gE是否发生变异，利用PCR方法，对南阳、周口、巩义、济源、漯河、原阳等地采集的疑似PRV感染的病料进行检测。对PCR检测为阳性的病料接种猪睾丸细胞，传至6代，分离出9株PRV，克隆其gE全基因并进行序列分析。结果表明，9株PRV均能扩增出1862 bp的gE基因，且彼此之间同源性为99．9％～100％，与其他PRV毒株同源性为97．5％～99．6％。9株分离株处于一大分支上，且均含有2个氨基酸插入，在448位和510位均发生氨基酸置换。结果表明，分离株均为PRV野毒株，且gE基因有不同程度的变化，与河南省伪狂犬病的重新流行有密切联系。

关键词：猪伪狂犬病毒 gE基因克隆序列分析

重组猪细小病毒VP2基因的猪伪狂犬病毒rPRV-VP2株的构建及纯化

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中国兽医学报 2016年第9期36卷 1476-1483页

作者：付朋飞乔涵杨兴武张宇王林青郭晓庆潘鑫龙陈红英河南农业大学郑州市猪重大疾病防控重点实验室河南郑州450002 郑州师范学院河南郑州450044

参考GenBank中登录的猪细小病毒(PPV)(M38367.1)基因序列,设计1对可以扩增出约1.6kb PPV VP2基因片段的特异性引物,上、下游引物的5′端均引入BamHⅠ酶切位点,PCR扩增得到VP2目的片段后,连接到pMD18-T载体中得到重组质粒pMD-VP2。取本... 详细信息

参考GenBank中登录的猪细小病毒(PPV)(M38367.1)基因序列,设计1对可以扩增出约1.6kb PPV VP2基因片段的特异性引物,上、下游引物的5′端均引入BamHⅠ酶切位点,PCR扩增得到VP2目的片段后,连接到pMD18-T载体中得到重组质粒pMD-VP2。取本实验室构建的含绿色荧光蛋白标记基因的伪狂犬病毒(PRV)通用转移质粒pG和构建好的pMD-VP2质粒,用BamHⅠ对质粒pG和pMD-VP2进行酶切,然后用CIAP对酶切产物进行去磷酸化处理,纯化回收后将VP2基因插入pG质粒中获得重组伪狂犬病毒转移质粒pGVP2。用脂质体转染法将PRV HB-98株全基因组与质粒pGVP2共转染ST细胞,得到携带有PPV VP2外源抗原基因和绿色荧光蛋白标记基因的重组伪狂犬病毒rPRV-VP2株。结合VP2基因PCR扩增和绿色荧光观察,经5轮病毒空斑纯化得到了纯化的重组病毒rPRV-VP2株。

关键词： PRV 猪细小病毒 VP2基因重组

猪博卡病毒3/4/5型PCR检测方法的建立及应用

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中国兽医学报 2016年第6期36卷 908-911页

作者：付朋飞杨兴武乔涵潘鑫龙郭晓庆张宇郭珍珍陈红英河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002

通过分析GenBank上登录的猪博卡病毒3/4/5型(PBoV3/4/5型)基因序列,发现这些基因序列中存在一段高度同源性保守序列,针对该序列设计并合成1对引物,成功建立了可同时扩增出PBoV 3/4/5型的PCR检测方法。对2013年8月至2014年5月河南省50份... 详细信息

通过分析GenBank上登录的猪博卡病毒3/4/5型(PBoV3/4/5型)基因序列,发现这些基因序列中存在一段高度同源性保守序列,针对该序列设计并合成1对引物,成功建立了可同时扩增出PBoV 3/4/5型的PCR检测方法。对2013年8月至2014年5月河南省50份临床腹泻仔猪小肠样品进行检测,结果 21份为PBoV阳性,阳性率为42%,表明PBoV在河南省猪群中存在一定流行。本试验建立的PCR方法对PBoV3/4/5的检测具有简便、快速、灵敏度高和特异性强的特点,为PBoV 3/4/5型的快速检测提供了有效的技术支持。

关键词：猪博卡病毒 PBoV3/4/5型 PCR

工业固废CO_(2)矿化协同减污降碳关键技术进展

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洁净煤技术 2024年第7期30卷 1-12页

作者：李磊潘鑫刘鲁豫中国科学院山西煤炭化学研究所煤炭高效低碳利用全国重点实验室山西太原030001 中国科学院大学北京101408

针对工业过程CO_(2)和固废排放的问题,减污降碳刻不容缓。CO_(2)矿化技术在封存CO_(2)的同时固废得到资源化利用,受到广泛关注。论述了不同工业固废作为CO_(2)矿化原料的利用情况,对比分析了不同矿化工艺优缺点及CO_(2)矿化机理,总结了... 详细信息

针对工业过程CO_(2)和固废排放的问题,减污降碳刻不容缓。CO_(2)矿化技术在封存CO_(2)的同时固废得到资源化利用,受到广泛关注。论述了不同工业固废作为CO_(2)矿化原料的利用情况,对比分析了不同矿化工艺优缺点及CO_(2)矿化机理,总结了不同CO_(2)矿化工艺研究现状和工业化应用情况。研究发现,目前针对固废CO_(2)矿化缺乏机制性解释,无法有效控制金属离子的浸取过程和矿化过程中气液固传质的效率,同时矿化形成的碳酸盐产品存在粒径大、易团聚、功能单一等问题。未来需进一步研究浸渍过程中表面溶剂扩散等控制浸取速率和程度的机制;深入研究碳酸盐成核结晶动力学机制及碳酸盐晶体形貌、粒度调控方法;构建煤基固废浸取、矿化溶质气-液-固传输模型,进行工艺参数优化和过程强化并确定放大规律;进一步加强CO_(2)矿化利用技术全生命周期和经济评价;最后,需加大CO_(2)矿化利用技术的中试、示范技术集成和成套工艺建设,为规模化减污降碳技术的工业化发展奠定技术支撑。

关键词： CO_(2)捕集工业固废 CO_(2)矿化吸收-矿化一体化减污降碳

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奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及药敏试验

安徽农学通报 2013年第18期19卷 119-120页

作者：范成英潘鑫龙郭晓庆陈红英四川省绵阳农业学校四川绵阳625000 河南农业大学牧医工程学院河南郑州450002

自郑州某奶牛场采集9份乳房炎乳样进行细菌分离鉴定,并进行药敏试验。结果表明,分离出11株细菌,以葡萄球菌、链球菌为主要致病菌,对磺胺甲恶唑/甲氧苄啶、环丙沙星、氧氟沙星、阿米卡星敏感,而对青霉素G、链霉素、克林霉素具有较高耐药性。

关键词：奶牛乳房炎病原菌药敏试验