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暨南大学学报（自然科学与医学版） 1998年第S1期19卷 87-88页

作者：钟瑜张春雪潘善培暨南大学生殖免疫研究中心

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建立人输卵管上皮细胞无血清培养

暨南大学学报（自然科学与医学版） 1998年第S1期19卷 31-35页

作者：钟瑜张春雪潘善培暨南大学生殖免疫研究中心广州510632

人输卵管上皮细胞（HOEC）可以体外较长时间无血清培养，DMEM／F12培养液的培养效果优于Ham’sF10，在加有多种因子和胎球蛋白的培养液中，HOEC可贴壁生长，生长能力达到合质量分数15％FCS的对照组的30％～40％，一般可传代2次，最长培... 详细信息

人输卵管上皮细胞（HOEC）可以体外较长时间无血清培养，DMEM／F12培养液的培养效果优于Ham’sF10，在加有多种因子和胎球蛋白的培养液中，HOEC可贴壁生长，生长能力达到合质量分数15％FCS的对照组的30％～40％，一般可传代2次，最长培养可维持38d，细胞形态与有血清培养差别不大，虽然无血清培养HOEC的生长速度、密度、传代成功率远不及有血清培养，但能抑制成纤维细胞生长，维持较纯的上皮细胞。

关键词：人输卵管上皮细胞无血清培养

Galectin-3在雌性小鼠生殖系统中的表达及脂多糖的影响

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中国病理生理杂志 2009年第7期25卷 1409-1414页

作者：禹艳红潘善培谢琪璇关艺青黄丹暨南大学生殖免疫研究所广东广州510632

目的:研究galectin-3在雌性小鼠生殖系统的表达情况,利用小鼠生殖道感染模型研究galectin-3在女性生殖道感染过程中的可能作用。方法:采用RT-PCR的方法初步鉴定小鼠生殖系统各组织中的galectin-3 mRNA的表达水平,通过阴道黏膜注射LPS不... 详细信息

目的:研究galectin-3在雌性小鼠生殖系统的表达情况,利用小鼠生殖道感染模型研究galectin-3在女性生殖道感染过程中的可能作用。方法:采用RT-PCR的方法初步鉴定小鼠生殖系统各组织中的galectin-3 mRNA的表达水平,通过阴道黏膜注射LPS不完全弗氏佐剂乳液建立小鼠的生殖道感染模型,免疫组化对ga-lectin-3蛋白在雌性小鼠生殖系统的表达进行定位分析。结果:在正常小鼠的子宫、阴道、输卵管及卵巢中都能够检测到galectin-3 mRNA的表达。Galectin-3蛋白主要表达在生殖道黏膜的上皮细胞表面和子宫腺。经LPS刺激后,galectin-3蛋白在阴道、子宫颈及子宫体的表达水平提高(P<0.05),尤其是刺激后24h子宫颈中galectin-3的表达量增加最多(P<0.01)。结论:LPS刺激能增加小鼠生殖道中galectin-3的表达,galectin-3在生殖道抗感染中可能发挥重要的作用。

关键词：半乳糖凝集素3 生殖道脂多糖类

去糖基猪卵透明带抗原DGZPB和DGZPC的分离纯化及免疫特性

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2000年第4期21卷 36-41页

作者：潘善培谢琪璇暨南大学生殖免疫研究中心广东广州510632

目的 :为发展避孕疫苗研究制备去糖基猪卵透明带抗原DGZPB和DGZPC并研究它们的免疫反应性。方法 :从阉割小母猪采集的猪卵巢分离猪卵透明带 ,经热溶解 ,SephacrylS - 4 0 0和HTP柱层析分离纯化抗原ZP3,经 β -半乳糖苷酶消化 ,用反相HPL... 详细信息

目的 :为发展避孕疫苗研究制备去糖基猪卵透明带抗原DGZPB和DGZPC并研究它们的免疫反应性。方法 :从阉割小母猪采集的猪卵巢分离猪卵透明带 ,经热溶解 ,SephacrylS - 4 0 0和HTP柱层析分离纯化抗原ZP3,经 β -半乳糖苷酶消化 ,用反相HPLC分离得部分去糖基的pZPB和pZPC ,再用TFMS处理 ,制备去糖基猪卵透明带抗原DGZPB和DGZPC。以MDP为佐剂 ,用DGZPB和DGZPC分别免疫家兔。用ELISA法测定抗血清与ZP3、DGZPB和DGZPC的反应。结果 :用反相HPLC分离 β -半乳糖苷酶处理的ZP3,得部分去糖基Mr 为 4 .6× 10 4 的pZPB和Mr 为 4 2× 10 4 的pZPC ,用TFMS对部分去糖基pZPB和pZPC作化学去糖基分别得Mr 为 3 7× 10 4 的DGZPB和Mr 为3 2× 10 4 的DGZPC。DGZPB和DGZPC免疫家兔均能诱发抗体反应 ,抗DGZPB抗血清和抗DGZPC抗血清能与ZP3反应。但两种抗血清不发生交叉反应。结论 :从猪卵巢可分离制备的去糖基卵透明带抗原DGZPB和DGZPC ,用于免疫诱发的两种抗血清均能与ZP3反应 ,但两种抗血清无交叉反应。

关键词：去糖基卵透明带抗原 DGZPB DGZPC 分离纯化猪

构建表达猪卵透明带抗原(pZP3α)的重组乳酸杆菌

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2009年第2期30卷 123-127页

作者：熊亚明潘善培陈敬黄丹关艺青暨南大学生命科学技术学院生殖免疫研究所广东广州510632

目的:构建表达猪卵透明带蛋白(pZP3α)的重组乳酸杆菌。方法:用PCR方法扩增得到短小乳酸杆菌染色体中的S-层蛋白的信号肽序列和猪卵透明带的pZP3α基因,并依次克隆到乳酸杆菌整合型表达质粒pIlac的lac启动子下游,得到质粒pIlac-pZP3α... 详细信息

目的:构建表达猪卵透明带蛋白(pZP3α)的重组乳酸杆菌。方法:用PCR方法扩增得到短小乳酸杆菌染色体中的S-层蛋白的信号肽序列和猪卵透明带的pZP3α基因,并依次克隆到乳酸杆菌整合型表达质粒pIlac的lac启动子下游,得到质粒pIlac-pZP3α。将质粒pIlac-pZP3α电穿孔转化干酪乳酸杆菌(*** CECT5276),挑选转化后的耐药菌落,在含5μg/mL红霉素的MRS培养基中培养,抽提其基因组DNA做模板,PCR鉴定验证pZP3α基因是否整合到乳酸杆菌的基因组中。筛选重组菌在无红霉素选择压力下传代培养直至发生第2次重组使红霉素抗性基因消失。结果:酶切与测序结果表明信号肽和pZP3α基因正确克隆到载体pIlac中;PCR鉴定证实pZP3α基因成功重组到乳酸杆菌的基因组中,培养50 d后重组乳酸杆菌抗性消失,用斑点免疫印迹化学发光法检测到经终质量分数为0.75%乳糖诱导后的上清中有pZP3α蛋白分泌。结论:成功构建表达pZP3α的重组乳酸杆菌,pZP3α在乳酸杆菌中得到了稳定的、分泌表达。

关键词：卵透明带抗原-3α(pZP3α) 乳酸杆菌免疫避孕同源重组疫苗

重组人巨细胞病毒嵌合肽基因在毕赤酵母中的克隆和表达

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中国生物工程杂志 2005年第3期25卷 29-34页

作者：谢琪璇余巍潘善培肖銮娟彭雅林张春雪暨南大学生殖免疫研究所广州510632

为了在毕赤酵母中表达带有组氨酸纯化标记的重组人巨细胞病毒嵌合肽 (rHCMVp) ,根据其基因序列 ,设计引物从pPIC9K rHCMVp上扩增得到目的基因片段 ,并导入毕赤酵母诱导型表达载体pPICZαA中。通过电击将线性化的重组质粒转化到毕赤酵母... 详细信息

为了在毕赤酵母中表达带有组氨酸纯化标记的重组人巨细胞病毒嵌合肽 (rHCMVp) ,根据其基因序列 ,设计引物从pPIC9K rHCMVp上扩增得到目的基因片段 ,并导入毕赤酵母诱导型表达载体pPICZαA中。通过电击将线性化的重组质粒转化到毕赤酵母X33细胞中 ,筛选获得表达量较高的重组菌株 ,研究了该菌株生长的培养条件 ,包括不同诱导时间、甲醇浓度、pH值对人巨细胞病毒嵌合肽表达的影响。 2L发酵罐进行了高密度发酵 ,经 1 %的甲醇、pH6 0的条件下诱导48h ,最终菌体密度OD60. 0 达到 1 80 ,每升发酵液中含目的蛋白 78. 7mg ,产量比摇瓶提高了 4 8倍。rHCMVp可通过高密度发酵大量获得。

关键词：人巨细胞病毒 HCMV 克隆和表达诱导型目的基因毕赤酵母重组质粒嵌合肽表达载体表达量

重组质粒pPIC9K-pZP3α-hCGβCTP^(109～145)的构建

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2002年第3期23卷 100-106页

作者：李伟涛潘善培谢琪旋肖銮娟芦春斌暨南大学生殖免疫研究中心广东广州510632

目的 :为发展多特异性避孕疫苗 ,制备重组抗原pZP3α -hCGβCTP10 9～ 14 5,用基因工程技术构建重组质粒pPIC9K -pZP3α -hCGβCTP10 9～ 14 5.方法 :根据pZP3α全长和hCGβCTP10 9～ 14 5编码的DNA列设计两对引物 ,通过部分重叠聚合酶... 详细信息

目的 :为发展多特异性避孕疫苗 ,制备重组抗原pZP3α -hCGβCTP10 9～ 14 5,用基因工程技术构建重组质粒pPIC9K -pZP3α -hCGβCTP10 9～ 14 5.方法 :根据pZP3α全长和hCGβCTP10 9～ 14 5编码的DNA列设计两对引物 ,通过部分重叠聚合酶链式反应 (overlappingPCR) ,扩增出pZP3α -hCGβ -CTP10 9～ 14 5DNA片断 ,克隆到载体质粒pPIC9K中 ,然后导入大肠杆菌DH5α ,用PCR和双酶切反应鉴定重组质粒 ,并用DNA测序仪对重组质粒测序 .结果 :3步PCR扩增出pZP3α -hCGβ -CTP10 9～ 14 5DNA片段 ,插入到载体质粒pPIC9K的克隆位点 ,获得重组pPIC9K -pZP3α -hCGβ -CTP10 9～ 14 5表达质粒 ,测序结果显示插入序列与设计预期完全一致 .结论 :重组质粒pPIC9K -pZP3α -hCGβ -CTP10 9～ 14 5构建成功 ,为表达重组抗原pZP3α -hCGβ -CTP10 9～ 14 5。

关键词：重组质粒 pPIC9K pZP3α hCGβ CTP^109-145 猪卵透明带人绒毛膜促性腺激素部分重叠聚合酶链式反应避孕疫苗重组抗原

利用H_2O_2提高GS115rhZP3培养中的溶氧和目的蛋白产量

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2004年第3期25卷 390-392页

作者：肖銮娟谢琪璇潘善培唐键暨南大学生殖免疫研究中心广东广州510632

目的:提高毕赤酵母摇瓶培养中的溶氧,从而提高目的蛋白的表达量.方法:在rhZP3工程菌培养过程分别加入不同浓度的H2O2,甲醇诱导培养后,取培养液上清进行SDS-PAGE电泳和Westernblot,并与不加H2O2的对照组比较,分析H2O2对重组人卵透明带ZP... 详细信息

目的:提高毕赤酵母摇瓶培养中的溶氧,从而提高目的蛋白的表达量.方法:在rhZP3工程菌培养过程分别加入不同浓度的H2O2,甲醇诱导培养后,取培养液上清进行SDS-PAGE电泳和Westernblot,并与不加H2O2的对照组比较,分析H2O2对重组人卵透明带ZP3蛋白(rhZP3)在毕赤酵母中表达量的影响.结果:H2O2可提高培养基的溶氧量.当H2O2浓度为5mmol/L时,目的蛋白的表达量最高.结论:在rhZP3毕赤酵母工程菌摇瓶培养中,加入H2O2可提高rhZP3的表达量.

关键词：过氧化氢毕赤酵母溶氧

鳙鱼[Aristichthys nobilis(Richardson)]卵透明带的生殖免疫学研究——Ⅰ.受精前后鳙鱼卵透明带超微结构的比较和鳙鱼热溶性卵透明带抗原的定位(SZP)

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暨南理医学报(理科专版) 1984年第1期 78-88页

作者：潘善培刘学高暨南大学生殖免疫研究室

本研究应用扫描电镜、透射电镜对受精前后鳙鱼卵透明带的超微结构进行了比较,并对鳙鱼热溶性卵透明带抗原在卵透明带上的定位进行了探讨。扫描电镜观察的结果显示鳙鱼卵透明带的表面为筛孔状的结构,整个卵透明带的表面布满直径约0.2μ... 详细信息

本研究应用扫描电镜、透射电镜对受精前后鳙鱼卵透明带的超微结构进行了比较,并对鳙鱼热溶性卵透明带抗原在卵透明带上的定位进行了探讨。扫描电镜观察的结果显示鳙鱼卵透明带的表面为筛孔状的结构,整个卵透明带的表面布满直径约0.2μ的微孔。微孔略呈棱格状排列,微孔间的距离约0.8—1。透射电镜观察的结果揭示鳙鱼卵透明带分为外、中、内三层。外层厚约0.3—0.5μ,由颗粒状物质组成。在外层透明带上可见有宽约0.2μ的小裂隙,它是用扫描电镜观察到卵透明带表面的微孔在切片上的表现,裂隙的下端有成团的粗颗粒状物质封闭。外层透明带的外表面有微绒毛样物质复盖。中层透明带较薄,仅约0.1—0.2μ,是由颗粒状物质疏松排列组成。内层透明带最厚,约5—6μ,是由纤细的纤维状物质和颗粒状物质交织而成。其结构呈羽毛状,靠外侧的排列较疏松、靠内侧的排列较致密。受精以后(16—细胞期),卵透明带的表面变相对大皱褶光滑面,筛孔状结构消失,仅留下小量微孔的痕迹。切片上可见透明带各层的厚度相应减薄。其总厚度约比受精前减少一半。外表面的微绒毛样物质消失。内层透明带的结构明显改变。羽毛状结构消失。代之是由粗纤维物质和粗颗粒物质疏松排列组成的结构,并且出现许多不规则的空腔。吸水对照的鳙鱼卵透明带也呈类似的结构改变。但其外层的厚度比受精卵透明带的更薄、内层透明带内侧部的空腔较少,内表面较完整。鳙鱼卵受精后其透明带超微结构的改变主要是由于鱼卵吸水膨胀、透明带物质溶解所致。用扫描电镜观察用抗鳙鱼SZP抗血清或抗鳙鱼SZP—Ⅰ抗血清处理的鳙鱼卵,可见卵透明带表面微孔间区域向外凸出,绒状结构的颗粒变粗大。透射电镜观察可见透明带的外层和内层均有电子致密斑的分布。用对照血清处理的鳙鱼卵的透明带无此现象。用扫描电镜和透射电镜观察加热提取SZP后的鳙鱼卵透明带可见卵透明带的表面结构变模湖,微孔变得不明显,外层透明带明显减薄,内层羽毛状结构消失,纤维状物质断裂溶解,并出现许多空腔。上述结果证明鳙鱼热溶性卵透明带抗原不仅分布在卵透明带的外层,而且还分布在卵透明带的内层。

关键词：卵透明带内层扫描电镜观察表面结构 SZP Richardson 超微结构鳙鱼定位

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附睾环节的节育研究现况

中华男科学杂志 2000年第4期6卷 262-265页

作者：陈晓丽朱伟杰潘善培暨南大学生殖免疫研究中心广东广州510632

附睾是男性生殖系统的一个重要器官 ,是精子成熟与贮存的场所。现公认最为理想的男用避孕环节是干扰精子成熟以及附睾机能。一些抗生育药物可直接作用于附睾 ,阻止精子正常发育 ;用附睾及精浆等分泌的某些具生物活性的蛋白去免疫动物 ,... 详细信息

附睾是男性生殖系统的一个重要器官 ,是精子成熟与贮存的场所。现公认最为理想的男用避孕环节是干扰精子成熟以及附睾机能。一些抗生育药物可直接作用于附睾 ,阻止精子正常发育 ;用附睾及精浆等分泌的某些具生物活性的蛋白去免疫动物 ,也能导致动物不育或生育能力下降。这些无疑为开发新型男性避孕、节育方法指明方向。

关键词：附睾精子抗生育节育