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人反义血管内皮生长因子基因载体构建及对肾细胞癌血管内皮生长因子表达的影响

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中国组织工程研究与临床康复 2008年第2期12卷 262-265页

作者：潘周辉杨太森郑州大学第三附属医院泌尿外科河南省郑州市450052 郑州大学第一附属医院泌尿外科河南省郑州市450052

目的:构建反义血管内皮生长因子基因表达载体,观察其对肾癌细胞血管内皮生长因子表达的影响。方法:实验于2006-07/2007-03在郑州大学第三附属医院实验中心完成。①实验材料:质粒pcDNA3.1(-),宿主菌DH5α,肾癌细胞株786-0。②实验过程:... 详细信息

目的:构建反义血管内皮生长因子基因表达载体,观察其对肾癌细胞血管内皮生长因子表达的影响。方法:实验于2006-07/2007-03在郑州大学第三附属医院实验中心完成。①实验材料:质粒pcDNA3.1(-),宿主菌DH5α,肾癌细胞株786-0。②实验过程:克隆人血管内皮生长因子基因,将反义血管内皮生长因子基因定向克隆于质粒pcDNA3.1(-)表达载体,酶切鉴定;转染人肾癌细胞,并分别命名为反义血管内皮生长因子组和空载体组,未转染细胞命名为对照组;G418筛选阳性克隆。③实验评估:反转录-聚合酶链反应方法检测血管内皮生长因子mRNA的表达,免疫组织化学法检测血管内皮生长因子基因的蛋白表达,流式细胞术检测细胞周期,四甲基偶氮唑盐法检测细胞生长情况。结果:①成功构建反义血管内皮生长因子基因表达载体。②反义血管内皮生长因子组血管内皮生长因子mRNA的表达受到抑制,明显低于空载体组和对照组血管内皮生长因子mRNA的表达(P<0.01),空载体组血管内皮生长因子mRNA的表达没有受到影响。③反义血管内皮生长因子组的血管内皮生长因子蛋白表达明显降低,明显低于空载体组和对照组(P<0.01),空载体组和对照组血管内皮生长因子蛋白的表达差异无显著性。④反义血管内皮生长因子组细胞生长减慢,G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少,反义血管内皮生长因子组细胞生长明显减慢。结论:成功构建血管内皮生长因子的pcDNA3.1(-)反义基因表达载体,人反义血管内皮生长因子基因可明显降低肾癌细胞血管内皮生长因子基因在转录和翻译水平的表达,抑制肾癌细胞生长,为肾癌基因治疗提供一定的实验依据。

关键词：血管内皮生长因子类肾肿瘤基因表达

63例成人无精子症AZFc缺失患者的临床特点及其与性激素水平相关性分析

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中华内分泌代谢杂志 2021年第1期37卷 52-55页

作者：潘周辉周秀丽卢慧杰郑州大学第三附属医院泌尿男科 450052

目的探讨无精子症无精子因子C区域(Azoospermia factor C region,AZFc)缺失患者的临床特点及其与性激素的相关性。方法回顾性分析63例无精子症并AZFc缺失患者的临床资料,包括年龄、身高、体重、体重指数(BMI)、睾丸体积和性激素。结果... 详细信息

目的探讨无精子症无精子因子C区域(Azoospermia factor C region,AZFc)缺失患者的临床特点及其与性激素的相关性。方法回顾性分析63例无精子症并AZFc缺失患者的临床资料,包括年龄、身高、体重、体重指数(BMI)、睾丸体积和性激素。结果无精子症AZFc缺失组患者身高、体重、睾丸体积与精液正常组差异有统计学意义(P0.05)。结论无精子症AZFc缺失患者更容易出现体重超标现象,容易更早期出现雄激素水平的下降,生活方式的调整和补充睾酮可能对该类患者的长期生活质量有益。

关键词：无精子症无精子因子C区域微缺失性激素临床特点

RNA干扰缺氧诱导因子2对肾癌786-0细胞的影响

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中国病理生理杂志 2008年第3期24卷 509-513页

作者：潘周辉陈昭典郑州大学第三附属医院泌尿外科河南郑州450052 浙江大学附属第一医院泌尿外科浙江杭州310003

目的:研究RNA干扰缺氧诱导因子2(HIF-2)对肾癌786-0细胞的影响。方法:合成HIF-2RNAi片段,将RNAi片段定向克隆于RNAi表达载体,测序鉴定;转染人肾癌786-0细胞,RT-PCR、Western印迹法检测HIF-2 RNAi表达载体对HIF-2基因表达的影响,MTT法检... 详细信息

目的:研究RNA干扰缺氧诱导因子2(HIF-2)对肾癌786-0细胞的影响。方法:合成HIF-2RNAi片段,将RNAi片段定向克隆于RNAi表达载体,测序鉴定;转染人肾癌786-0细胞,RT-PCR、Western印迹法检测HIF-2 RNAi表达载体对HIF-2基因表达的影响,MTT法检测转染HIF-2 RNAi表达载体对细胞生长作用,裸鼠种植肿瘤观察RNA干扰组对肿瘤生长的影响。结果:RNA干扰组HIF-2mRNA的表达受到抑制,明显低于空载体组和对照组HIF-2mRNA的表达(P<0.01),空载体组HIF-2mRNA的表达没有受到影响;RNA干扰组的HIF-2蛋白表达明显降低,明显低于空载体组和对照组(P<0.01),空载体组和对照组HIF-2蛋白的表达无显著差异;RNA干扰组细胞生长减慢,RNA干扰组肿瘤体积和瘤重均小于空白组(P<0.01)。结论:RNA干扰HIF-2可以抑制肾癌786-0细胞HIF-2的表达和抑制细胞生长,减慢裸鼠肿瘤的生长;为肾癌的生物治疗提供一定的实验基础。

关键词：缺氧诱导因子2 肾肿瘤 RNA干扰

人反义血管内皮生长因子基因表达对肾癌细胞的影响

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中华泌尿外科杂志 2003年第8期24卷 514-516页

作者：宋东奎潘周辉杨太森郑州大学第一附属医院泌尿外科 450052

目的　探讨人反义血管内皮生长因子 (VEGF)基因对肾癌细胞VEGF表达及生长的影响。　方法　采用RT PCR方法将VEGF基因克隆于 pcDNA3.1反义真核表达载体 ,构建VEGF的pcDNA3.1反义真核表达载体 ,酶切鉴定。转染人肾癌 780 0细胞 ,G4 18筛... 详细信息

目的　探讨人反义血管内皮生长因子 (VEGF)基因对肾癌细胞VEGF表达及生长的影响。　方法　采用RT PCR方法将VEGF基因克隆于 pcDNA3.1反义真核表达载体 ,构建VEGF的pcDNA3.1反义真核表达载体 ,酶切鉴定。转染人肾癌 780 0细胞 ,G4 18筛选阳性克隆。免疫组化法检测VEGF表达 ,MTT法测生长曲线。　结果　pcDNA3.1 (antisense)VEGF组VEGF蛋白表达阳性细胞率 (10 .3% )明显低于 780 0 PC组 (92 .8% )和 780 0组 (96 .6 % ) ,P <0 .0 1;VEGF反义真核表达载体抑制肾癌 780 0细胞生长 ,在培养的第 4、5、6天 ,抑制率分别为 2 6 .38%、4 1.78%和 37.6 4 %。　结论　VEGF的 pcDNA3.1反义真核表达载体可明显降低肾癌细胞VEGF的表达 ,明显减慢肾癌细胞生长。

关键词：肾癌人反义血管内皮生长因子基因表达 RT-PCR法

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肾母细胞瘤组织WT1、P53基因缺失检测

郑州大学学报（医学版） 2002年第3期37卷 305-308页

作者：宋东奎王瑞潘周辉步星耀郑州大学第一附属医院泌尿外科郑州450052 河南省人民医院外科郑州450003

目的:对肾母细胞瘤组织WT1、P53基因缺失情况进行检测。方法:30例散发性肾母细胞瘤组织,其中上皮优势型6例,母细胞优势型14例,间质优势型10例,采用Southern印迹分子杂交技术检测肾母细胞瘤组织WT1、P53基因缺失,并分析其与组织类型的关... 详细信息

目的:对肾母细胞瘤组织WT1、P53基因缺失情况进行检测。方法:30例散发性肾母细胞瘤组织,其中上皮优势型6例,母细胞优势型14例,间质优势型10例,采用Southern印迹分子杂交技术检测肾母细胞瘤组织WT1、P53基因缺失,并分析其与组织类型的关系。结果:2例WT1基因的缺失为间质优势型肾母细胞瘤,1例P53等位基因缺失为间变型肾母细胞瘤。结论:WT1基因缺失可能与间质优势型肾母细胞瘤的发生有关,P53基因缺失可能与间变型肾母细胞瘤的发生有关。

关键词：肾母细胞瘤 WT1基因 P53基因基因缺失

RNA干扰对前列腺癌PC-3细胞血管内皮生长因子表达的研究

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中华男科学杂志 2006年第12期12卷 1095-1098页

作者：潘周辉陈昭典郑州大学第三附属医院泌尿外科河南郑州450052 浙江大学附属第一医院泌尿外科浙江杭州310003

目的:构建前列腺癌血管内皮生长因子(VEGF)RNA干扰(RNAi)真核表达载体,并研究RNAi对前列腺癌VEGF表达的影响。方法:合成VEGFRNAi片段,将RNAi片段定向克隆于RNAi表达载体,测序鉴定;RNAi表达载体转染人前列腺癌PC-3细胞,Western印迹法检测... 详细信息

目的:构建前列腺癌血管内皮生长因子(VEGF)RNA干扰(RNAi)真核表达载体,并研究RNAi对前列腺癌VEGF表达的影响。方法:合成VEGFRNAi片段,将RNAi片段定向克隆于RNAi表达载体,测序鉴定;RNAi表达载体转染人前列腺癌PC-3细胞,Western印迹法检测VEGFRNAi表达载体对VEGF蛋白表达的影响,MTT法检测转染VEGFRNAi表达载体对细胞生长的抑制作用。结果:成功构建VEGFRNAi真核表达载体;VEGFRNAi组VEGF蛋白的表达明显降低,显著低于空载体组和未转染的对照组;前列腺癌PC-3细胞24、48、72h的生长抑制率分别为23.5%、33.5%、40.8%。结论:VEGFRNAi可以抑制前列腺癌PC-3细胞蛋白的表达和抑制细胞生长,为前列腺癌的生物治疗提供一定的实验基础。

关键词：血管内皮生长因子前列腺癌PC-3细胞 RNA干扰

肾癌缺氧诱导因子2小干扰RNA表达载体的构建及筛选

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郑州大学学报（医学版） 2008年第5期43卷 947-950页

作者：潘周辉陈昭典郑州大学第三附属医院泌尿外科郑州450052 浙江大学附属第一医院泌尿外科杭州310003

目的:构建肾癌缺氧诱导因子2(HIF-2)小干扰RNA真核表达载体,并研究其对肾癌786-0细胞中HIF-2蛋白表达的影响。方法:根据GenBank数据库提供的HIF-2基因核苷酸序列,选择设计双链小干扰RNA,合成HIF-2RNAi片段No1、No2、No3和对照片段,将RNA... 详细信息

目的:构建肾癌缺氧诱导因子2(HIF-2)小干扰RNA真核表达载体,并研究其对肾癌786-0细胞中HIF-2蛋白表达的影响。方法:根据GenBank数据库提供的HIF-2基因核苷酸序列,选择设计双链小干扰RNA,合成HIF-2RNAi片段No1、No2、No3和对照片段,将RNAi片段定向克隆于pSilencer2.1-U6neo真核表达载体,转化感受态菌,挑取阳性载体克隆,DNA测序进行鉴定;培养人肾癌786-0细胞,在脂质体的介导下分别将No1、No2、No3和对照片段重组载体转染入人肾癌786-0细胞,并设未转染组,WesternBlot法检测各载体对肾癌786-0细胞中HIF-2蛋白表达的影响。结果:构建的HIF-2RNAi真核表达载体经DNA测序证实与设计完全一致,转染肾癌786-0细胞24h后,No1组、No2组和No3组HIF-2蛋白表达水平降低(分别为0.05±0.00、0.11±0.01、0.15±0.01),与未转染组(0.22±0.02)和对照组(0.21±0.01)相比,差异有统计学意义(F=83.85,P0.05)。结论:成功构建人肾癌HIF-2RNAi真核细胞表达载体,并可有效干扰肾癌786-0细胞中HIF-2蛋白的表达。

关键词：缺氧诱导因子2 肾癌 RNA干扰

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缺氧诱导因子-1与前列腺癌研究进展

中华男科学杂志 2007年第4期13卷 356-359页

作者：潘周辉陈昭典郑州大学第三附属医院泌尿外科河南郑州450052 浙江大学附属第一医院泌尿外科浙江杭州310003

缺氧诱导因子-1(HIF-1)与前列腺癌存在密切的关系。研究表明HIF-1在前列腺癌中不但与血管生成因子、增殖与存活因子、葡萄糖转运以及糖分解酶等有关,而且与p53、p21、信号转导通路等有关。通过对HIF-1的深入研究将对前列腺癌的诊断与治... 详细信息

缺氧诱导因子-1(HIF-1)与前列腺癌存在密切的关系。研究表明HIF-1在前列腺癌中不但与血管生成因子、增殖与存活因子、葡萄糖转运以及糖分解酶等有关,而且与p53、p21、信号转导通路等有关。通过对HIF-1的深入研究将对前列腺癌的诊断与治疗提供新的思路。现对HIF-1的结构、功能及与前列腺癌关系进行综述。

关键词：前列腺癌缺氧诱导因子-1

RNA干扰对前列腺癌PC-3细胞血管内皮生长因子表达的研究

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RNA干扰对前列腺癌PC-3细胞血管内皮生长因子表达的研究