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伪狂犬病毒胸苷激酶基因变异引起的病毒致弱作用

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科学通报 2001年第16期46卷 1364-1367页

作者：潘兹书张楚瑜丁建华闵平武汉大学病毒学研究所武汉430072

为揭示PRV tk基因结构与毒力的相互关系, tk基因结构变异对病毒生物学特性的影响和探讨病毒的致弱机理, 以伪狂犬病毒湖北株(PRV HB)为材料, 用BUdR诱变选择, 分离出BUdR抗性的PRV TK-突变株. 在对野毒株和TK-突变株tk基因克隆和测序的... 详细信息

为揭示PRV tk基因结构与毒力的相互关系, tk基因结构变异对病毒生物学特性的影响和探讨病毒的致弱机理, 以伪狂犬病毒湖北株(PRV HB)为材料, 用BUdR诱变选择, 分离出BUdR抗性的PRV TK-突变株. 在对野毒株和TK-突变株tk基因克隆和测序的基础上, 分析比较了两种毒株tk基因的一级结构. 测定的PRV HB野毒株tk基因片段长1587 bp, GC含量为72.7%. 包含一个1098 bp的ORF. 编码366个氨基酸残基组成的蛋白. ORF内有2个137 bp核苷酸的重复序列, 两者以一个A连接. 测定的TK-突变株tk基因片段长1458 bp, 野毒株中137 bp重复序列之一和连接A被自然删除, 另有一个8核苷酸(GCGCGCCC)重复片段的插入, 其他所有核苷酸与野毒株一致. 在TK-突变株中因核苷酸片段的缺失和插入, tk基因发生移框突变, 导致转译提前终止, 不能产生有功能的TK蛋白. 氨基酸序列分析显示, PRV HB TK具有疱疹病毒TK共有的保守功能区并多出一个保守的DRH功能位点. 实验还证实, TK-突变株具有生物学遗传稳定性, 与野毒株比较, 其毒力显著降低. 用TK-突变株接种小鼠, 能诱导小鼠产生针对PRV强毒株致死攻击的有效保护.

关键词：伪狂犬病毒胸苷激酶核苷酸序列 TK^-突变株基因变异病毒致弱作用猪传染病

伪狂犬病病毒糖蛋白G基因的结构分析及其原核表达

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中国病毒学 2002年第2期17卷 166-171页

作者：闵平张楚瑜潘兹书武汉大学病毒学研究所武汉430072

利用PCR技术扩增了伪狂犬病毒湖北株 (PRVHB)糖蛋白G(gG)基因 ,进行了序列测定和分析。结果显示扩增和测序片段长 180 4bp ,G +C含量 6 8.78%。gG基因ORF长 15 0 0bp ,编码 5 0 0个氨基酸组成的多肽。与PRVRice株 gG基因比较 ,两者核苷... 详细信息

利用PCR技术扩增了伪狂犬病毒湖北株 (PRVHB)糖蛋白G(gG)基因 ,进行了序列测定和分析。结果显示扩增和测序片段长 180 4bp ,G +C含量 6 8.78%。gG基因ORF长 15 0 0bp ,编码 5 0 0个氨基酸组成的多肽。与PRVRice株 gG基因比较 ,两者核苷酸及推导的氨基酸序列同源性分别为 98%、84.1%。 32 0～ 380位之间的氨基酸序列存在较大差异。根据序列分析结果 ,选取 gG基因长短不同的两个片段分别克隆到原核表达载体 pET2 8a(+)进行表达。经SDS PAGE和Dot ELISA分析证实 ,表达出分子量大小分别约为 5 5kD和 6 3kD的特异性gG多肽 ,这为深入阐明PRV gG基因结构与功能及研制 gG

关键词：伪狂犬病病毒糖蛋白G 原核表达核苷酸序列氨基酸序列基因表达基因结构

基于纳米磁珠和量子点的核酸传感器检测猪瘟病毒

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武汉大学学报（理学版） 2019年第4期65卷 411-416页

作者：赵妍吴梦凡雷蕾潘兹书武汉大学生命科学学院

通过比对猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)基因组核苷酸序列,筛选出CSFV的保守靶序列。设计针对该靶序列的分子探针,通过生物素与链霉亲和素的相互作用,将捕获探针偶联到纳米磁珠,将检测探针偶联到荧光量子点,建立了基于纳... 详细信息

通过比对猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)基因组核苷酸序列,筛选出CSFV的保守靶序列。设计针对该靶序列的分子探针,通过生物素与链霉亲和素的相互作用,将捕获探针偶联到纳米磁珠,将检测探针偶联到荧光量子点,建立了基于纳米磁珠分离富集靶标和量子点探针捕获特性的生物传感器检测CSFV核酸的方法。该方法对标准品的检出限为104copies/μL,对临床样本的检出限为106copies/μL,且与其他猪病病毒无交叉反应,具有良好的特异性。该生物传感器对25份临床样本的检测结果与荧光定量PCR方法检测结果相符。

关键词：猪瘟病毒量子点纳米磁珠核酸传感器

Scaffold蛋白介导细胞信号转导专一性的定量分析

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生物物理学报 2006年第4期22卷 283-289页

作者：邹秀芬许志强潘兹书武汉大学数学与统计学院武汉430072 武汉大学生命科学学院武汉430072

细胞使用相对有限的蛋白质组分传递大量的信号,因此不同的信号通常由相同的蛋白质组分传递。这些蛋白质组分是如何选择性地参与不同的信号通路,“高保真”地传递不同的刺激,从而产生特定的细胞应答,是目前细胞生物学领域中的研究热点和... 详细信息

细胞使用相对有限的蛋白质组分传递大量的信号,因此不同的信号通常由相同的蛋白质组分传递。这些蛋白质组分是如何选择性地参与不同的信号通路,“高保真”地传递不同的刺激,从而产生特定的细胞应答,是目前细胞生物学领域中的研究热点和难点之一。鉴于Scaffold蛋白在确保信号转导专一性和保真性中的关键作用,作者基于酵母***的生物学实验数据,建立了由Scaffold介导的丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivatedproteinkinase,MAPK)级联信号转导网络的数学模型。并对已报道的工作进行扩展,给出了多条信号级联网络的“专一性(specificity)”和“保真性(fidelity)”的精确数学定义,计算了MAPK信号网络的专一性和保真性的解析解。用这些解定量分析细胞信号转导的专一性和保真性与信号通路各种动力学参数(输入信号的强度和时间、反应率、磷酸化和去磷酸化系数、降解系数等)之间的关系,从理论上阐述Scaffold蛋白通过隔离(sequestration)和选择性激活(selectiveactivation)等机制增强信号转导网络的专一性和保真性。从而有助于加深对细胞信号转导及其调控过程的系统理解,为揭示某些因细胞信号转导异常所致疾病的发生机理,寻找治疗药物提供新的思路。

关键词：信号转导数学模型专一性保真性 Scaffold蛋白

H5N1亚型禽流感病毒核蛋白NP的原核表达及抗体制备

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中国人兽共患病学报 2008年第3期24卷 202-204,209页

作者：罗孟成陶攀肖庚富潘兹书武汉大学生命科学学院病毒学国家重点实验室武汉430072

目的制备H5N1亚型禽流感病毒NP重组蛋白和抗体,为研制含NP组分的人禽流感亚单位疫苗和建立评价方法提供检测抗原和抗体。方法以H5N1亚型禽流感病毒A/chicken/Hubei/489/2004(H5N1)NP基因cDNA克隆质粒pMD-NP为模板,PCR扩增获得NP基因抗... 详细信息

目的制备H5N1亚型禽流感病毒NP重组蛋白和抗体,为研制含NP组分的人禽流感亚单位疫苗和建立评价方法提供检测抗原和抗体。方法以H5N1亚型禽流感病毒A/chicken/Hubei/489/2004(H5N1)NP基因cDNA克隆质粒pMD-NP为模板,PCR扩增获得NP基因抗原区片段,克隆到原核表达载体pET-28a,构建重组质粒pET-ΔNP,转化大肠杆菌BL21-CondonPlus(DE3)-RIL,IPTG诱导重组蛋白表达。采用Ni亲和层析方法纯化NP重组蛋白,免疫家兔,收集免疫血清,ELISA测定抗体效价;间接免疫荧光检测所制备抗体与真核细胞表达NP蛋白的反应性。结果与结论成功的制备了高效价兔抗NP抗体,抗体效价在105以上,该抗体能与原核和真核系统中表达的NP蛋白特异性反应,为研制以NP蛋白为抗原组分的人禽流感亚单位疫苗和建立评价方法奠定了基础。

关键词： H5N1A型流感病毒核蛋白NP 原核表达多克隆抗体

猪瘟病毒NS3蛋白的原核表达纯化和抗体制备

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武汉大学学报（理学版） 2008年第6期54卷 703-706页

作者：方改霞温国元罗雪莲凌大伟潘兹书武汉大学生命科学学院/病毒学国家重点实验室湖北武汉430072

以猪瘟病毒(CSFV)石门株全长cDNA克隆pT7SM为模板,PCR扩增CSFVns3基因N末端截短的cDNA片段.PCR产物经限制性内切酶BglⅡ和SalⅠ双酶切消化后,克隆到经BamHⅠ和SalⅠ双酶切消化的pET-28a表达载体,构建重组质粒pET-ΔNS3,转化***21-codonP... 详细信息

以猪瘟病毒(CSFV)石门株全长cDNA克隆pT7SM为模板,PCR扩增CSFVns3基因N末端截短的cDNA片段.PCR产物经限制性内切酶BglⅡ和SalⅠ双酶切消化后,克隆到经BamHⅠ和SalⅠ双酶切消化的pET-28a表达载体,构建重组质粒pET-ΔNS3,转化***21-codonPlus(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达.采用SDS-PAGE分离纯化非结构蛋白3(NS3)重组蛋白,免疫家兔,制备多克隆抗体.ELISA法及间接免疫荧光检测结果显示,该多克隆抗体效价在1×105以上,能分别与在大肠杆菌中表达的NS3重组蛋白或CSFV感染细胞中表达的NS3天然蛋白发生特异性结合反应.制备的NS3重组蛋白可用作建立NS3抗体ELISA检测方法的包被抗原;NS3抗体可用于检测CSFV病毒感染和NS3功能研究中的蛋白质鉴定.

关键词：猪瘟病毒非结构蛋白3(NS3) 多克隆抗体

百日咳杆菌LPF和FHA的纯化及其特性的研究

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信阳师范学院学报（自然科学版） 1993年第4期6卷 440-446页

作者：潘兹书何长民信阳师院生物系 464000 卫生部兰州生物制品研究所

采用羟基磷灰石、HP—Sepharose 4B和Sephadex G—200色层分析方法,精制出了单一的白细胞增多促进因子(LPF)和丝状血凝素(FHA)组分.经SDS—PAGE证明,精制LPF呈现四条带,其分子量分别为30,000、27,000、23,000和14,000;精制FHA呈现三条带... 详细信息

采用羟基磷灰石、HP—Sepharose 4B和Sephadex G—200色层分析方法,精制出了单一的白细胞增多促进因子(LPF)和丝状血凝素(FHA)组分.经SDS—PAGE证明,精制LPF呈现四条带,其分子量分别为30,000、27,000、23,000和14,000;精制FHA呈现三条带,其分子量分别为185,000、130,000、105,***检测证明,精制LPF为620EU/mL,精制FHA为402EU/mL;小鼠LP和HS活性测定结果证明,0.136μg的精制LPF可引起白细胞的明显增高,0.015μg可引起HS活性,0.29μg可引起组胺致敏小鼠50%的死亡;CHO细胞簇聚活性检测结果显示,3.3pg的精制LPF可引起CHO细胞明显的簇聚反应;免疫双扩散试验结果显示,精制LPF和FHA分别与其相应的抗LPF和抗FHA血清形成特异性的沉淀线;电镜结果显示,精制LPF呈直径约6nm的球形颗粒;精制FHA呈2×40—100nm的丝状结构.

关键词：白细胞增多百日咳杆菌纯化

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猪瘟病毒Core蛋白核仁定位序列鉴定

微生物与感染 2019年第5期14卷 277-281页

作者：吴锐潘兹书贵州省人民医院生殖中心贵阳550002 武汉大学生命科学学院/病毒学国家重点实验室武汉430072

黄病毒科病毒核衣壳蛋白的核仁定位在病毒颗粒包装与病毒复制中发挥重要作用。为鉴定黄病毒科的猪瘟病毒Core蛋白核仁定位序列,本研究构建了将Core蛋白、截短突变体和氨基酸位点突变体分别与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluoresc... 详细信息

黄病毒科病毒核衣壳蛋白的核仁定位在病毒颗粒包装与病毒复制中发挥重要作用。为鉴定黄病毒科的猪瘟病毒Core蛋白核仁定位序列,本研究构建了将Core蛋白、截短突变体和氨基酸位点突变体分别与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)融合的真核表达质粒,转染至PK15细胞后进行表达和定位分析,结果显示Core蛋白核仁定位序列为PESRKKL,其关键氨基酸为R76K77,对理解猪瘟病毒Core蛋白结构与功能和为后续研究Core蛋白在病毒复制及颗粒包装中的作用有重要意义。

关键词：猪瘟病毒 Core蛋白核仁定位

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评价肺炎支原体疫苗效力的仓鼠攻击试验

微生物学免疫学进展 1989年第4期17卷 47-50页

作者： BARILE M F 潘兹书

在1964-1976年间,许多实验室研制了一系列的福尔马林灭活的肺炎支原体疫苗并进行了效力试验。有些疫苗是在众多的部队新兵中进行了现场试验,有些则给少数志愿受试者接种,然后用强毒株进行攻击试验。利用接种过疫苗者中支原体肺炎自然发... 详细信息

在1964-1976年间,许多实验室研制了一系列的福尔马林灭活的肺炎支原体疫苗并进行了效力试验。有些疫苗是在众多的部队新兵中进行了现场试验,有些则给少数志愿受试者接种,然后用强毒株进行攻击试验。利用接种过疫苗者中支原体肺炎自然发病率的降低和感染过支原体人群中病情的减轻来进行评价,结果表明,这些疫苗的保护效力是很低的。当将疫苗加入明矾佐剂增强其抗原性或简单地增加疫苗剂量时。

关键词：肺炎支原体疫苗效力试验