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深圳市2014年登革热流行病学和病原学特征研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2016年第5期36卷 367-373页

作者：阳帆王敬忠吴春利黄达娜李玥满云翔李瑞敏唐屹君张仁利深圳市疾病预防控制中心微生物检验科 518055

目的研究深圳市2014年登革热疫情的流行病学特征，分析流行毒株的分子进化特征，为今后登革热的防控提供科学指导。方法采用描述性流行病学方法分析2014年深圳市登革热疫情，分别采用胶体金免疫层析法和荧光PCR检测疑似登革热患者血清... 详细信息

目的研究深圳市2014年登革热疫情的流行病学特征，分析流行毒株的分子进化特征，为今后登革热的防控提供科学指导。方法采用描述性流行病学方法分析2014年深圳市登革热疫情，分别采用胶体金免疫层析法和荧光PCR检测疑似登革热患者血清中的特异性IgM、IgG抗体和病毒核酸，并用C6/36细胞对急性期血清进行病毒分离，采用荧光PCR方法对其进行型别鉴定。同时扩增病毒E基因后进行序列测定，并与不同国家和地区的登革热毒株进行同源性比较和进化树分析。结果2014年深圳市累计报告登革热病例454例，以本地病例为主（占76.21%），输入病例以东南亚国家及周边城市为主（占23.79%）。发病高峰为9—11月（占97.14%）。发病人群以20～50岁青壮年人群为主，占病例总数的76.73%，男女比为1.43∶1。对332份病毒核酸阳性标本进行分型检测，共检出270例，型别以1型登革病毒（DENV-1）为主（占87.41%），其次为DENV-2（占8.89%）。进化分析发现深圳地区流行的DENV-1分布在两个分支上，其一为基因Ⅰ亚型，与深圳市2010年首次本地暴发疫情流行株同源性较高；其二为基因Ⅴ亚型，为深圳市首次报道。DENV-2核苷酸序列的差异相对较小，均为基因Ⅳ亚型。结论2014年深圳市报告登革热病例达到历年高峰，其流行具有输入病例与本地传播并存特点，主要是DENV-1流行，同时今年新出现DENV-2型病例明显增多，推测主要流行株由东南亚国家及周边城市输入，是否具有地方性登革热流行趋势还需进一步研究。

关键词：登革病毒流行特征 E基因进化分析

硒代蛋氨酸对小鼠巨噬细胞增殖及硒蛋白K的影响

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中国热带医学 2014年第11期14卷 1295-1298页

作者：满云翔李瑞敏傅玉才张仁利汕头大学医学院广东汕头515041 深圳市疾病预防控制中心广东深圳518055

目的探究硒代蛋氨酸(Selenomethionine,Se-Met)对小鼠巨噬细胞的增殖及巨噬细胞中硒蛋白K(Selenopro-tein K,Sel K)的影响,并观察Sel K在小鼠巨噬细胞中的定位。方法加硒代蛋氨酸(Se-Met)培养巨噬细胞,用CCK-8法检测巨噬细胞的增殖活力... 详细信息

目的探究硒代蛋氨酸(Selenomethionine,Se-Met)对小鼠巨噬细胞的增殖及巨噬细胞中硒蛋白K(Selenopro-tein K,Sel K)的影响,并观察Sel K在小鼠巨噬细胞中的定位。方法加硒代蛋氨酸(Se-Met)培养巨噬细胞,用CCK-8法检测巨噬细胞的增殖活力,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹技术检测Se-Met对小鼠巨噬细胞中Sel K m RNA和Sel K蛋白表达的影响;用细胞免疫荧光法观察Sel K在巨噬细胞中的位置。结果 Se-Met能促进巨噬细胞的增殖,其中浓度为1μmol/L Se-Met在处理巨噬细胞24 h和48h后,能显著性地促进巨噬细胞的增殖(P<0.01);1μmol/L Se-Met能使巨噬细胞中Sel K的m RNA含量显著增加(24 h处理组,P<0.05;48 h处理组,P<0.01),另外,Sel K蛋白的含量也有所增加(48 h处理组,P<0.05)。浓度为100μmol/L Se-Met在处理巨噬细胞48 h后,能极显著性地抑制巨噬细胞增殖(P<0.01)。结果还显示Sel K蛋白与内质网标志物KDEL都存在于巨噬细胞内的相同位置上。结论 Se-Met在促进巨噬细胞增殖的同时,使存在于内质网上的Sel K增加。

关键词：硒代蛋氨酸巨噬细胞增殖硒蛋白K 内质网

干扰selk对小鼠巨噬细胞非特异性免疫应答的影响

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干扰selk对小鼠巨噬细胞非特异性免疫应答的影响

硒蛋白K在小鼠中的组织差异表达及T淋巴细胞内定位

第六届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛

作者：王淼黄飞雁满云翔傅玉才张仁利深圳大学生命科学学院深圳市疾病预防控制中心深圳市龙岗区坪地预防保健所汕头大学医学院

目的探究硒蛋白K（selk）基因沉默对小鼠巨噬细胞增殖、吞噬和迁移的影响,阐明selk对预防手足口等病毒性疾病感染的免疫效应机制。方法制作并包装小鼠巨噬细胞selk慢病毒干扰株,将细胞分为未转染巨噬细胞（Mφ）、空载体慢病毒转染巨噬... 详细信息

目的探究硒蛋白K（selk）基因沉默对小鼠巨噬细胞增殖、吞噬和迁移的影响,阐明selk对预防手足口等病毒性疾病感染的免疫效应机制。方法制作并包装小鼠巨噬细胞selk慢病毒干扰株,将细胞分为未转染巨噬细胞（Mφ）、空载体慢病毒转染巨噬细胞（Mφ-NC）和selk慢病毒干扰巨噬细胞（Mφ-RNAi）。建立稳定干扰的巨噬细胞株后,实时定量RT-PCR法和蛋白质免疫印迹法检测selk的干扰效率,CCK8法检测细胞增殖,巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验检测其吞噬能力和Transwell法检测细胞迁移能力。结果与Mφ-NC组相比,Mφ-RNAi株巨噬细胞selk的mRNA和蛋白质水平显著降低（p＜0.05）,48 h后,与Mφ-NC组相比,Mφ-RNAi组巨噬细胞的增殖受到了明显的抑制（P＜0.01）,同时Mφ-RNAi组巨噬细胞穿过小室的细胞数显著低于Mφ-NC组（P＜0.05）,能吞噬鸡红细胞的Mφ-RNAi组巨噬细胞数量显著较少。结论 selk基因沉默使小鼠巨噬细胞的增殖、吞噬和迁移能力降低,从而改变其抗感染免疫能力。

关键词：硒蛋白K 巨噬细胞增殖吞噬迁移

来源： cnki会议评论

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热带医学杂志 2014年第11期14卷 1420-1423,F0002页

作者：李瑞敏王超满云翔阳帆黄达娜吴春利房师松张仁利深圳大学生命科学学院广东深圳518060 深圳市疾病预防控制中心广东深圳518055

目的检测硒蛋白K(Sel K)在小鼠脾、肾、肠、肺、脑、肝组织中的表达差异及在T淋巴细胞内的定位,为研究Sel K的分布与生物学功能的关联性提供参考。方法采用实时荧光定量PCR,Western blot以及免疫组化方法检测硒蛋白K在小鼠各组织的表达... 详细信息

目的检测硒蛋白K(Sel K)在小鼠脾、肾、肠、肺、脑、肝组织中的表达差异及在T淋巴细胞内的定位,为研究Sel K的分布与生物学功能的关联性提供参考。方法采用实时荧光定量PCR,Western blot以及免疫组化方法检测硒蛋白K在小鼠各组织的表达差异,并采用细胞免疫化学的方法 ,用激光共聚焦显微镜观察硒蛋白K在小鼠T淋巴细胞内的定位。结果实时荧光定量PCR结果显示硒蛋白K在小鼠各组织中均有表达,并且在脾脏中的表达明显高于其他组织(P<0.05)。Western blot及免疫组化结果与实时荧光定量PCR结果基本一致。细胞免疫化学结果显示硒蛋K在小鼠T淋巴细胞中定位于内质网。结论硒蛋白K是一种在脾脏中高表达的内质网蛋白。

关键词：硒蛋白K 实时荧光定量PCR Western blot 免疫组化细胞免疫荧光

干扰SelK对小鼠巨噬细胞非特异性免疫应答的影响

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中国热带医学 2015年第8期15卷 907-911页

作者：黄飞雁满云翔傅玉才张仁利深圳市龙岗区坪地预防保健所广东深圳518117 深圳市疾病预防控制中心广东深圳518052 汕头大学医学院广东汕头515063

目的探讨硒蛋白K(Selenoprotein K,SelK)基因沉默(RNA silence,RNAi)对小鼠巨噬细胞增殖、吞噬和迁移的影响。方法制作并包装小鼠巨噬细胞SelK慢病毒干扰株,将细胞分为未转染正常对照组、空载体慢病毒转染组和慢病毒干扰组。建立稳定干... 详细信息

目的探讨硒蛋白K(Selenoprotein K,SelK)基因沉默(RNA silence,RNAi)对小鼠巨噬细胞增殖、吞噬和迁移的影响。方法制作并包装小鼠巨噬细胞SelK慢病毒干扰株,将细胞分为未转染正常对照组、空载体慢病毒转染组和慢病毒干扰组。建立稳定干扰的巨噬细胞株后,应用实时定量RT-PCR法和蛋白质免疫印迹法检测SelK的干扰效率,分别应用CCK8法、巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验和Transwell法检测细胞增殖、细胞吞噬能力和细胞迁移能力。结果与空载体慢病毒转染组相比,SelK慢病毒干扰组巨噬细胞的mRNA和SelK水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);48 h后,与空载体慢病毒转染组相比,慢病毒干扰组巨噬细胞的增殖受到了明显的抑制,差异有统计学意义(P<0.01),同时慢病毒干扰组巨噬细胞穿过小室的细胞数显著低于空载体慢病毒转染组(P<0.05),慢病毒干扰组巨噬细胞能吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数量显著较少。结论 Selk基因沉默能使小鼠巨噬细胞的增殖、吞噬和迁移能力降低,从而改变其抗感染免疫能力。

关键词：硒蛋白K 巨噬细胞增殖吞噬迁移

深圳市龙华区2019年札如病毒基因分型以及进化分析

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中国热带医学 2021年第3期21卷 247-250页

作者：郝夏琼任燕许少坚李锦宗满云翔赖晓玲全德甫曹赫林启辉深圳市龙华区疾病预防控制中心深圳市公共卫生应急检测重点实验室深圳市传染病预防控制重点实验室广东深圳518109

目的分析2019年深圳市龙华区札如病毒的基因型别,掌握辖区内札如病毒的流行情况。方法采用实时荧光定量PCR对283份龙华区感染性腹泻疫情样本进行轮状病毒、诺如病毒和札如病毒核酸检测,对札如病毒阳性样本核酸采用RT-PCR(反转录–聚合... 详细信息

目的分析2019年深圳市龙华区札如病毒的基因型别,掌握辖区内札如病毒的流行情况。方法采用实时荧光定量PCR对283份龙华区感染性腹泻疫情样本进行轮状病毒、诺如病毒和札如病毒核酸检测,对札如病毒阳性样本核酸采用RT-PCR(反转录–聚合酶链式反应)扩增,并对扩增产物进行序列测定和遗传进化分析。结果 2019年龙华区共发生感染性腹泻聚集性疫情24起,共采集283份样本。其中由诺如病毒引起15起(占62.5%),札如病毒引起4起(占16.6%),札如和诺如病毒共同引起1起(占4.1%),未检测出病原体4起(占16.6%)。283份感染性腹泻疫情样本中,诺如病毒检测阳性率为17.7%(50/283);札如病毒阳性率为8.1%(23/283),轮状病毒未检出,所有病例无混合感染情况。23例札如阳性样本有5例VP1条带扩增成功,扩增效率为21.7%,基因亚型鉴定分析结果表明2株为GII.3型,3株为GII.4型。结论在2019年龙华区腹泻疫情方面,GⅡ.3和GⅡ.4型是札如病毒的主要型别。诺如依然是龙华区感染性腹泻中引起散发和暴发的首要病原体,星状,轮状,腺状仅在散发病例中发现,而札如已成为引起急性腹泻病的重要病原体,应尽快开展龙华区对札如病毒的常规检测和进一步的分子分型工作。

关键词：札如病毒进化分析基因分型疫情暴发

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深圳市龙华区疱疹性咽峡炎病原学特点

中国热带医学 2019年第3期19卷 267-270页

作者：许少坚郝夏琼任燕姚相杰陈龙全德甫赖晓玲满云翔刘佳娴曹赫林启辉深圳市龙华区疾病预防控制中心龙华新区传染病预防控制重点实验室龙华区公共卫生应急检测重点实验室广东深圳518109 深圳市疾病预防控制中心病原生物研究所广东深圳518109

目的分析深圳市龙华区疱疹性咽峡炎病原学特点,为辖区疱疹性咽峡炎预防和控制策略的制定和调整提供科学依据。方法采用荧光定量RT-PCR方法对手足口病哨点医院送检的疱疹性咽峡炎临床诊断病例的肛拭子样本进行肠道病毒(enteroviurs,EVs)... 详细信息

目的分析深圳市龙华区疱疹性咽峡炎病原学特点,为辖区疱疹性咽峡炎预防和控制策略的制定和调整提供科学依据。方法采用荧光定量RT-PCR方法对手足口病哨点医院送检的疱疹性咽峡炎临床诊断病例的肛拭子样本进行肠道病毒(enteroviurs,EVs)、肠道病毒71型(enteroviurs-A71,EV-A71)和柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirusA16, CV-A16)核酸检测,并对非EV-A71非CV-A16的其他肠道病毒的VP1区序列进行测定,亚型鉴定和系统进化分析。结果临床诊断病例肛拭子样本38份中实验室确诊病例29例,确诊率为76.32%(29/38),病原谱监测共发现有9种人肠道病毒(EV-A71、CV-A16、CV-A6、CV-A10、CV-A2、CV-A4、CV-A5、Echo9和CV-B4),其中构成比占前3位的病原体分别CV-A2(24.14%,7/29)、CV-A10(20.69%,6/29)和CV-A6(17.24%,5/29)。实验室确诊病例中,男性有19例(65.52%,19/29),女性有10例(34.48%,10/29);3岁以下儿童25例(86.21%,25/29)。病例发病时间主要集中在4—6月份,有23例(占79.31%,23/29)。系统进化树分析结果显示,CV-A6属于D3进化分支,CV-A10(66.67%)属于C进化分支,CV-A2属于D进化分支。结论深圳市龙华区应开展疱疹性咽峡炎常规监测,重点关注3岁以下儿童,并关注病原谱构成及重要病原体进化情况。

关键词：疱疹性咽峡炎病原学特点病原谱进化分支

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深圳市龙华区2018年手足口病病原学特征

中国热带医学 2019年第10期19卷 972-976页

作者：许少坚任燕郝夏琼李锦宗杨洪姚相杰陈龙全德甫赖晓玲满云翔李新楼曹赫林启辉深圳市龙华区疾病预防控制中心龙华新区传染病预防控制重点实验室龙华区公共卫生应急检测重点实验室广东深圳518109 深圳市疾病预防控制中心病原生物研究所广东深圳518000 广东医科大学公共卫生学院广东东莞523808 战略支援部队特色医学中心北京100000

目的分析2018年深圳市龙华区手足口病病原学特点,为辖区手足口病预防和控制策略的制定和调整提供科学依据。方法采用荧光定量RT-PCR方法对哨点医院送检的223份手足口病临床诊断病例的肛拭子样本进行肠道病毒(Enteroviurs,EV)、肠道病毒A... 详细信息

目的分析2018年深圳市龙华区手足口病病原学特点,为辖区手足口病预防和控制策略的制定和调整提供科学依据。方法采用荧光定量RT-PCR方法对哨点医院送检的223份手足口病临床诊断病例的肛拭子样本进行肠道病毒(Enteroviurs,EV)、肠道病毒A组71型(Enteroviurs A71,EV-A71)、柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CV-A16)、柯萨奇病毒A组6型(Coxsackievirus A6,CV-A6)、柯萨奇病毒A组10型(Coxsackievirus A10,CV-A10)核酸检测,并对EV核酸阳性样本进行VP1区序列测定、同源性分析、亚型鉴定和系统进化分析。结果实验室确诊病例有166例,阳性率为74.44%,构成比前3位的病毒亚型依次为CV-A6(43.37%),CV-A16(31.33%),CV-A10(13.86%);2018年深圳市龙华区流行的主要肠道病毒中,EV-A71属于C4a进化分支;CV-A16(n=18)核苷酸同源性为89.0%~99.9%,氨基酸同源性为98.3%~99.7%,属于B1a(38.89%,7/18)和B1b(61.11%,11/18)进化分支;CV-A6(n=45)核苷酸同源性为95.1%~99.9%,氨基酸同源性为98.1%~99.0%,均属于D3进化分支;CV-A10(n=12)核苷酸同源性为93.5%~99.8%,氨基酸同源性为97.6%~99.7%,均属于C进化分支。结论深圳市龙华区应进一步加强辖区手足口病监测,持续关注病原谱构成和重要病原体进化情况。

关键词：手足口病病原谱构成同源性分析系统进化

深圳市2014年登革热流行病学和病原学特征研究

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深圳市2014年登革热流行病学和病原学特征研究