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紫花苜蓿MsMAX2的克隆及功能研究

中国农业科学 2021年第19期54卷 4061-4069页

作者：马琳温红雨王学敏高洪文庞永珍中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

【背景】分枝是重要的产量构成因子,在紫花苜蓿育种中至关重要。发掘紫花苜蓿分枝相关基因并明确其作用机理,有助于加快紫花苜蓿高产优质育种。MAX2是重要的分枝相关基因,参与多种植物的分枝调控。【目的】通过对紫花苜蓿MsMAX2功能的研... 详细信息

【背景】分枝是重要的产量构成因子,在紫花苜蓿育种中至关重要。发掘紫花苜蓿分枝相关基因并明确其作用机理,有助于加快紫花苜蓿高产优质育种。MAX2是重要的分枝相关基因,参与多种植物的分枝调控。【目的】通过对紫花苜蓿MsMAX2功能的研究,为建立MsMAX2调控紫花苜蓿分枝发育分子机制奠定基础。【方法】利用同源克隆的方法从紫花苜蓿中获得MsMAX2的基因序列。通过Expy Protparatam、DNAMAN和MEGA-X等软件对MsMAX2进行序列分析并构建系统进化树。采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法分析MsMAX2在紫花苜蓿中的组织表达特异性。运用烟草瞬时表达系统确定MsMAX2蛋白的亚细胞定位。利用农杆菌介导的转化方法获得转基因拟南芥,以明确MsMAX2的基因功能。用酵母双杂交技术探明与MsMAX2互作的蛋白。【结果】MsMAX2包含长度为2 136 bp的开放阅读框,编码由711个氨基酸构成的蛋白,属于F-box蛋白超家族。系统进化分析表明,MsMAX2及其同源基因的进化与物种的分化高度相似,表明其是一个功能保守的基因。MsMAX2在紫花苜蓿的颈部组织中表达量最高,苗期叶片和授粉当天的花序中表达量较高,根中次之,其他组织表达量相对较低,暗示其在紫花苜蓿多个组织中发挥作用。亚细胞定位试验表明MsMAX2蛋白定位于细胞核中。在拟南芥max2突变体中过表达MsMAX2可互补突变体的多分枝表型。酵母双杂交试验表明MsMAX2与激素受体D14存在依赖于独脚金内酯的相互作用。【结论】获得在紫花苜蓿颈部组织中高水平表达的MsMAX2,其编码的蛋白定位于细胞核中;MsMAX2在拟南芥多分枝突变体max2中过表达时,能够互补突变表型,表明MsMAX2参与植物的分枝调控,其功能保守。

关键词：紫花苜蓿 MsMAX2 分枝互补试验酵母双杂交

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紫花苜蓿MsGAI的克隆、表达及遗传转化

中国农业科学 2019年第2期52卷 201-214页

作者：张涵王学敏刘希强马琳温红雨王赞中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

【目的】DELLA蛋白属于GRAS家族,是赤霉素信号转导途径中重要的转录因子,负向调节GA转导途径。克隆获得紫花苜蓿GAI,分析其基因生物信息学特征并预测蛋白结构域。明确紫花苜蓿GAI组织表达特征及不同处理下的表达模式,构建该基因超表达... 详细信息

【目的】DELLA蛋白属于GRAS家族,是赤霉素信号转导途径中重要的转录因子,负向调节GA转导途径。克隆获得紫花苜蓿GAI,分析其基因生物信息学特征并预测蛋白结构域。明确紫花苜蓿GAI组织表达特征及不同处理下的表达模式,构建该基因超表达载体并转入紫花苜蓿,以探究DELLA蛋白基因在紫花苜蓿赤霉素(GA)信号转导途径及胁迫条件下的作用机理。【方法】利用同源克隆的方法,从紫花苜蓿中克隆得到MsGAI。利用生物信息学方法分析该基因的序列特征,使用MEGA7.0对MsGAI蛋白序列及同源序列进行多序列比对,构建同源物种间的系统发育树。利用实时荧光定量PCR检测紫花苜蓿各组织GAI表达量以及在PEG、NaCl、GA、ABA和黑暗处理下,GAI的表达变化。同时对转基因GAI株系表达水平进行分析,选择表达量高、中、低株系(L5、L8、L11)分别进行PEG和NaCl处理,分析GAI的表达变化。以pBI121为基础载体,采用双酶切-连接的方法构建植物超表达载体35S:MsGAI-gus。将重组载体转入农杆菌GV3101菌株中,以紫花苜蓿叶片为外植体,采用农杆菌介导的愈伤组织转化法转化紫花苜蓿,经PCR检测和GUS组织化学染色,得到转基因阳性苗。【结果】该基因序列包含有一个1 818 bp的开放阅读框,编码605个氨基酸。生物信息学分析结果显示,MsGAI蛋白具有GRAS家族的典型结构域和保守区,其中包含N端保守结构域DELLA和TVHYNP,C端保守结构域SAW。多序列比对及系统进化树分析表明,该序列与其他物种的DELLA蛋白序列相似度均高达80%以上,将其命名为MsGAI。该基因与蒺藜苜蓿GAI亲缘关系最近,其次与鹰嘴豆、红三叶等双子叶豆科植物亲缘关系较近,与大麦等单子叶植物较远。实时荧光定量PCR分析表明,MsGAI在紫花苜蓿各组织中均有表达,根中的表达量最高。经PEG、NaCl、GA以及ABA处理后,均有明显响应;黑暗处理显著抑制MsGAI的表达。转基因株系经PEG、NaCl处理后,GAI表达量均上调。对构建完善的35S:MsGAI-gus植物超表达载体进行双酶切检测,琼脂糖凝胶电泳显示,条带大小与预期一致。对转基因植株进行GUS组织染色验证,结果表明,阳性植株呈现蓝色,对照组为白色。对超表达载体携带的MsGAI和GUS序列进行PCR检测均呈阳性。【结论】紫花苜蓿DELLA蛋白基因的克隆和超表达载体构建成功,MsGAI对逆境胁迫有响应。

关键词：紫花苜蓿 DELLA蛋白赤霉素表达分析同源克隆遗传转化

东方山羊豆GoGID基因表达载体构建及紫花苜蓿转化

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草地学报 2015年第1期23卷 167-172页

作者：李俊温红雨高洪文 Dzyubenko Nikolay Chapurin Vladimir 王学敏中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 俄罗斯瓦维洛夫全俄植物栽培研究所圣彼得堡190000

根据已经克隆得到的东方山羊豆赤霉素受体(GoGID)基因,扩增编码区cDNA。以pBI121为基础载体,采用酶切连接法,构建植物超表达载体pBI121-GoGID。酶切鉴定表明:目的基因已经正确插入载体中,超表达载体构建成功。采用CaCl_2冻融法将重组载... 详细信息

根据已经克隆得到的东方山羊豆赤霉素受体(GoGID)基因,扩增编码区cDNA。以pBI121为基础载体,采用酶切连接法,构建植物超表达载体pBI121-GoGID。酶切鉴定表明:目的基因已经正确插入载体中,超表达载体构建成功。采用CaCl_2冻融法将重组载体转入农杆菌菌株中。以叶片为外植体,采用农杆菌介导的愈伤组织培养法,转化紫花苜蓿(Medicage sativa),得到抗性苗。对载体携带的nptⅡ基因、GUS基因进行PCR检测均成阳性,表明目的基因已成功导入紫花苜蓿基因组中。同时对转基因植株进行Southern-blot及RT-PCR检测,并均得到目的条带。本研究为进一步分析GoGID基因对紫花苜蓿生物量影响奠定了基础。

关键词：东方山羊豆赤霉素受体紫花苜蓿遗传转化

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注重实践德美并举

当代教育科学 2008年第15期 53-53页

作者：温红雨山东省德州学院教育系

在以课堂教学作为主渠道对学生实施美育的同时，我们应注重理论联系实际，一方面在校园内开展丰富多彩的美育活动，另一方面让美育活动进入社区，走向社会。通过多渠道、多形式的美育活动，进一步开发学生的特长，提高学生的道德文化修... 详细信息

在以课堂教学作为主渠道对学生实施美育的同时，我们应注重理论联系实际，一方面在校园内开展丰富多彩的美育活动，另一方面让美育活动进入社区，走向社会。通过多渠道、多形式的美育活动，进一步开发学生的特长，提高学生的道德文化修养，使美育和德育有机结合起来，融为一体。互为作用。

关键词：美育活动实践理论联系实际课堂教学文化修养学生主渠道多渠道

安置房项目施工质量评价研究 ——以Z项目为例

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安置房项目施工质量评价研究 ——以Z项目为例

作者：温红震云南财经大学

学位级别：硕士

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多维策略促进幼儿在劳动教育中全面发展

好家长 2024年第9期 66-67页

作者：温红江苏省睢宁县双沟镇中心幼儿园

劳动教育是幼儿园教育的重要组成部分。在具体实际中，幼儿劳动教育往往流于形式，浮于表面。本文采用文献法、观察法、访谈法等研究方法，坚守儿童本位，立足全面发展，阐述在劳动教育中促进幼儿全面发展的多维策略。一、多维环境策略...

劳动教育是幼儿园教育的重要组成部分。在具体实际中，幼儿劳动教育往往流于形式，浮于表面。本文采用文献法、观察法、访谈法等研究方法，坚守儿童本位，立足全面发展，阐述在劳动教育中促进幼儿全面发展的多维策略。一、多维环境策略：激发幼儿在劳动教育中的学习兴趣兴趣具有指向功能、维持功能。为了促进幼儿在劳动教育中全面发展，教师要注重培养幼儿的劳动兴趣，让劳动真正成为幼儿自发的、主动的活动。在激发幼儿劳动兴趣的过程中，教师要关注环境的物质维度和心理维度。物质维度是指基础性的物质条件，心理维度是指同一个环境中人与人、人与物的互动中所形成的心理氛围。

关键词：

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基于知识图谱的区域韧性研究热点与趋势分析

安徽建筑 2024年第10期31卷 16-18页

作者：温红上海应用技术大学城市建设与安全工程学院上海201418

文章从多学科、多领域梳理区域韧性概念的知识基础和研究前沿,综述了国内和国外区域韧性应用的研究进展。选取2012-2022年CSSCI和Web of Science核心数据库收录的区域韧性相关研究文献成果并进行一定的筛选,从发文趋势、合作关系、研究... 详细信息

文章从多学科、多领域梳理区域韧性概念的知识基础和研究前沿,综述了国内和国外区域韧性应用的研究进展。选取2012-2022年CSSCI和Web of Science核心数据库收录的区域韧性相关研究文献成果并进行一定的筛选,从发文趋势、合作关系、研究热点及研究历程进行分析。通过时区图和突变词分析每个阶段理论研究的主题重要转折点以及研究脉络的展开,最后总结了国内研究成果的不足以及分析未来研究趋势。

关键词：区域韧性 CiteSpace 知识图谱研究进展

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从一起涉税诉讼案看税收政策的延续性

中国税务 2024年第5期 54-55页

作者：温红利国家税务总局北京市税务局

综观我国税收法律体系的实际情况,不乏以财税文件的形式就某一项或某一类经济行为的征税规则进行明确或者规范的现象,特别是针对金融领域及近几年出现的各种新业态的税收政策问题,实践中由于政策的历史延续或仅适用于特定主体、特定事... 详细信息

综观我国税收法律体系的实际情况,不乏以财税文件的形式就某一项或某一类经济行为的征税规则进行明确或者规范的现象,特别是针对金融领域及近几年出现的各种新业态的税收政策问题,实践中由于政策的历史延续或仅适用于特定主体、特定事项等原因,税企之间容易出现理解上的分歧和偏差,需要税务机关结合案件的具体情况,对政策制定的本意和延续过程进行通盘考量,从而保障政策适用的准确性、公平性、合理性。

关键词：税收政策问题税务机关特定事项税收法律体系金融领域新业态历史延续特定主体

轧钢加热炉中燃烧工艺参数对温度均匀性的影响及优化

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冶金与材料 2024年第5期44卷 148-150页

作者：张波温红南京钢铁股份有限公司江苏南京210035

文章旨在探讨轧钢加热炉燃烧工艺参数对温度均匀性的影响,并提出相应的优化措施。针对多种燃料类型、供给量、空气混合比例、送风方式,以及燃烧室与炉腔的结构设计、控制和操作相关参数进行了深入研究。在此基础上,提出了一系列改进措施... 详细信息

文章旨在探讨轧钢加热炉燃烧工艺参数对温度均匀性的影响,并提出相应的优化措施。针对多种燃料类型、供给量、空气混合比例、送风方式,以及燃烧室与炉腔的结构设计、控制和操作相关参数进行了深入研究。在此基础上,提出了一系列改进措施,包括优化调整策略、升级燃烧系统,以及构建温度监控与反馈控制机制,旨在增强加热炉的温度均衡性,并促进经济与环境的和谐发展。

关键词：轧钢加热炉温度均匀性燃烧工艺参数优化方法经济与环境效益