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少弱精子症患者睾丸组织中NOSTRIN的表达及其与eNOS的相关性研究

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华中科技大学学报（医学版） 2009年第2期38卷 247-249页

作者：相文佩水丽君温子娜胡廉熊承良华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心武汉430030

目的通过测定少弱精子症患者睾丸组织中内皮型一氧化氮合酶运输介导物(endothelial nitric oxide syn-thase traffic inducer,NOSTRIN)和内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的表达,探讨其与少弱精子症发病的相关性。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测11例严重少弱精子症患者(病例组)和7例正常男性(正常组)睾丸组织中NOSTRIN mRNA的表达;分光光度法测定睾丸组织中eNOS的活性;应用硝酸还原酶法测定睾丸组织上清液中NO代谢产物NO2-/NO3-水平。结果病例组患者睾丸组织中NOSTRIN mRNA呈弱表达(0.312±0.076),明显低于正常组(0.793±0.082,P<0.01);病例组患者睾丸组织eNOS活性[(33.73±3.58)U/mg]与正常组[(17.69±3.84)U/mg]比较显著增强(P<0.01);病例组患者睾丸中NO2-/NO3-水平为(48.56±8.49)μmol/L,较正常组(25.37±9.61)μmol/L显著升高(P<0.01);病例组睾丸组织中NOSTRIN表达水平与eNOS活性呈负相关(r=-0.57,P<0.01),与NO代谢产物NO2-/NO3-同样呈负相关(r=-0.61,P<0.01)。结论少弱精子症患者睾丸组织中NOSTRIN表达水平降低,eNOS活性增强,NO2-/NO3-水平升高,可能与少弱精子症的发生有着相关性。

关键词：内皮型一氧化氮合酶运输介导物一氧化氮合酶睾丸少弱精子症

CR16在特发性无精子症患者睾丸组织中的表达

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中华男科学杂志 2010年第12期16卷 1101-1104页

作者：温子娜庞文娟相文佩华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心湖北武汉430030

目的:研究糖皮质激素区域表达基因16(corticosteroids and regional expression 16,CR16)在特发性无精子症患者睾丸组织中的表达,探讨CR16在精子发生中的作用。方法:采用免疫组化法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CR16蛋白和CR16 mRN... 详细信息

目的:研究糖皮质激素区域表达基因16(corticosteroids and regional expression 16,CR16)在特发性无精子症患者睾丸组织中的表达,探讨CR16在精子发生中的作用。方法:采用免疫组化法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CR16蛋白和CR16 mRNA在48例特发性无精子症患者(病例组)和10例正常生育男性(正常组)睾丸组织中的表达情况。结果:CR16蛋白表达于睾丸生精小管上皮,主要分布在支持细胞与生精细胞连接区,在特发性无精子症患者睾丸组织中的表达显著弱于正常生育男性睾丸组织中的表达。CR16 mRNA在病例组睾丸组织中的表达水平显著低于正常组。结论:特发性无精子症患者睾丸组织中CR16表达水平显著降低,这可能与无精子症相关。

关键词：糖皮质激素区域表达基因16 精子发生无精子症睾丸

人脐静脉内皮细胞中肿瘤坏死因子-α诱导NOSTRIN基因表达上调的实验研究

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现代妇产科进展 2010年第7期19卷 514-517,522页

作者：相文佩温子娜水丽君胡廉陈汉平华中科技大学同济医学院计划生育研究所生殖医学中心武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中内皮型一氧化氮合酶运输介导物(NOSTRIN)基因表达的诱导作用以及二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对此诱导作用的抑制。方法:将培养的内皮细胞分为3组:第1组为无任何处理的HUVEC... 详细信息

目的:探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中内皮型一氧化氮合酶运输介导物(NOSTRIN)基因表达的诱导作用以及二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对此诱导作用的抑制。方法:将培养的内皮细胞分为3组:第1组为无任何处理的HUVEC,第2组为子痫前期(PE)患者血清作用的HUVEC,第3组为正常晚孕妇女血清作用的HUVEC。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测3组细胞中NOSTRIN mR-NA的表达。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测PE患者和正常孕妇血清中TNF-α含量。用1,3,5ng/ml3种浓度的TNF-α分别作用3组细胞6h,以及用浓度3ng/ml的TNF-α作用3组细胞分别达6h、12h、24h,RT-PCR检测NOSTRIN mRNA的表达;将PDTC(5mmol/ml)与TNF-α(3ng/ml)同时作用以及TNF-α(3ng/ml)单独作用3组细胞6h,RT-PCR检测NOSTRIN基因mRNA的表达。结果:3组细胞中都有NOSTRIN表达,第2组表达量显著高于第1组和第3组(P<0.01)。ELISA结果显示,PE患者血清中TNF-α含量显著高于正常晚孕妇女(P<0.01)。TNF-α作用HUVEC细胞后NOSTRIN显著高表达,呈时间和剂量依赖关系(P<0.01)。PDTC和TNF-α同时作用的HUVEC与TNF-α单独作用的HUVEC相比,其NOSTRIN表达显著降低(P<0.01)。结论:TNF-α可上调NOSTRIN在HUVEC中的表达。

关键词：肿瘤坏死因子-α 内皮型一氧化氮合酶运输介导物二硫代氨基甲酸吡咯烷人脐静脉内皮细胞

利用母血中胎儿有核红细胞结合血清筛查和三维超声无创性产前诊断唐氏综合征

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中国妇幼保健 2011年第7期26卷 1034-1037页

作者：相文佩温子娜水丽君徐晓燕陈汉平华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心湖北武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科

目的:利用母外周血中胎儿有核红细胞结合血清三联筛查及三维超声,建立快速无创性产前诊断唐氏综合征的有效模式。方法:早、中期孕妇共670例,采取血清三联筛查结合三维超声和病史选取唐氏高危孕妇,抽取高危孕妇的外周血,流式细胞术富集... 详细信息

目的:利用母外周血中胎儿有核红细胞结合血清三联筛查及三维超声,建立快速无创性产前诊断唐氏综合征的有效模式。方法:早、中期孕妇共670例,采取血清三联筛查结合三维超声和病史选取唐氏高危孕妇,抽取高危孕妇的外周血,流式细胞术富集母血中的胎儿有核红细胞(Fetal Nucleated Red Blood Cells,FNRBCs);次日进行多重引物原位杂交(muti-primed in situ labeling,multi-PRINS)检测胎儿细胞21号染色体与Y染色体。结果:通过血清三联筛查和三维超声结合病史筛选出高危孕妇24例,高危孕妇在两日内即可确诊,24例中诊断23例染色体正常胎儿,包括男胎12例、女胎11例;诊断1例男性唐氏综合征胎儿。24例标本检测结果和实际胎儿核型符合。结论:血清三联筛查、超声检查结合病史筛选出高危孕妇,然后利用母血中胎儿有核红细胞进行多重引物原位杂交检测细胞染色体,可作为快速、无创性产前诊断唐氏综合征的有效模式,并可为其他胎儿染色体基因异常或者宫内感染的无创性产前诊断提供参考。

关键词：唐氏综合征胎儿有核红细胞多重引物原位杂交产前诊断

NOSTRIN在无精子症患者睾丸组织中的表达

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中华男科学杂志 2011年第1期17卷 38-42页

作者：相文佩温子娜胡廉李红钢熊承良华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心湖北武汉430030

目的:通过测定无精子症患者睾丸组织中内皮型一氧化氮合酶运输介导物(NOSTRIN)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达,探讨其与无精子症发病的相关性。方法:采用免疫组化法检测17例特发性无精子症患者(病例组)和10例正常男性(正常组)睾丸组... 详细信息

目的:通过测定无精子症患者睾丸组织中内皮型一氧化氮合酶运输介导物(NOSTRIN)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达,探讨其与无精子症发病的相关性。方法:采用免疫组化法检测17例特发性无精子症患者(病例组)和10例正常男性(正常组)睾丸组织中NOSTRIN的定位和定量表达;RT-PCR检测睾丸组织中NOSTRINmRNA的表达;分光光度法测定睾丸组织中eNOS的活性;应用硝酸还原酶法测定睾丸组织上清液中NO代谢产物亚硝酸基/亚硝基(NO2-/NO3-)水平。结果:NOSTRIN在睾丸组织中表达于生精细胞、支持细胞以及血管内皮细胞,NOSTRIN在特发性无精子症患者睾丸中的表达水平显著低于正常男性;病例组患者睾丸组织中NOSTRINmRNA呈弱表达(0.312±0.076),明显低于正常组(0.793±0.082,P<0.01);病例组患者睾丸组织eNOS活性[(33.727±3.58)U/mg]与正常组[(17.69±3.84)U/mg]比较显著增高(P<0.01);病例组患者睾丸中NO2-/NO3-水平为[(48.56±8.49)μmol/L],与正常组[(25.37±9.61)μmol/L]比较显著升高(P<0.01);病例组睾丸组织中NOSTRIN表达水平与eNOS活性呈负相关(r=-0.57,P<0.01),与NO代谢产物NO2-/NO3-同样呈负相关(r=-0.61,P<0.01)。结论:无精子症患者睾丸组织中NOSTRIN表达水平降低,eNOS活性增强,NO-/NO-水平升高,这可能与无精子症的发生有着相关性。

关键词：内皮型一氧化氮合酶运输介导物一氧化氮合酶精子发生无精子症

线粒体融合蛋白2在胚胎停止发育者绒毛组织中的表达

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中国妇幼保健 2011年第33期26卷 5231-5234页

作者：庞文娟赵娜符小春温子娜徐晓燕相文佩华中科技大学同济医学院计划生育研究所湖北武汉430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科

目的:测定线粒体融合蛋白2(Mitofusin 2,Mfn2)在正常早孕妇女和不明原因胚胎停止发育患者绒毛组织中的表达差异,探讨Mfn2在胚胎发育过程中的可能作用。方法:采用HE染色观察正常早孕妇女(正常早孕组,30例)和不明原因胚胎停止发育患者(胚... 详细信息

目的:测定线粒体融合蛋白2(Mitofusin 2,Mfn2)在正常早孕妇女和不明原因胚胎停止发育患者绒毛组织中的表达差异,探讨Mfn2在胚胎发育过程中的可能作用。方法:采用HE染色观察正常早孕妇女(正常早孕组,30例)和不明原因胚胎停止发育患者(胚胎停育组,35例)绒毛组织形态;采用免疫组织化学技术(SABC法)检测Mfn2在两组妇女绒毛组织中的定位表达和表达强度;同时采用实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)技术检测两组妇女绒毛组织中Mfn2的相对表达。结果:Mfn2在正常早孕组和胚胎停育组绒毛合体滋养细胞和细胞滋养细胞中均有阳性表达,在细胞滋养细胞中表达尤为明显,而在间质细胞中无明显表达,且Mfn2阳性表达主要分布在细胞浆中。胚胎停育组的绒毛组织中Mfn2的相对表达量(0.006 8±0.003 2)显著低于正常早孕组(0.023 9±0.005 5),差异有统计学意义(P<0.01)。结论:Mfn2在不明原因胚胎停止发育患者绒毛组织中的表达水平下降,提示Mfn2可能与胚胎发育相关,绒毛滋养层细胞中Mfn2的正常表达可能对维持早期妊娠起到一定作用。

关键词：线粒体融合蛋白2 胚胎发育绒毛组织滋养层细胞线粒体

Changes in Human Umbilical Vein Endothelial Cells Induced by Endothelial Nitric Oxide Synthase Traffic Inducer

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Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences) 2013年第2期33卷 272-276页

作者：徐晓燕庞文娟温子娜相文佩 Department of Obstetrics and Gynaecology Tongji Hospital Tongji Medical College Huazhong University of Science and Technology Family Planning Research Institute Center of Reproductive Medicine Tongji Medical College Huazhong University of Science and Technology

This study investigated the changes in human umbilical vein endothelial cells （HUVECs） induced by overexpression of endothelial nitric oxide synthase traffic inducer （NOSTRIN） and its role in cellular injury. Recombinant NOSTRIN-expressing and empty vectors were transfected into cultured HUVECs, and factor Ⅷ-related antigen was examined by using immunohistochemical analysis. Growth curves were generated for both transfected and untransfected cells and these indicated that the prolifera- tive ability of cells overexpressing NOSTRIN was significantly decreased. The expression of NOSTRIN and eNOS proteins was detected by using Western blot analysis, endothelial NOS （eNOS） activity was assayed by using spectrophotometry, and NO2-/NO3- levels were measured usin~ nitrate reductase. Immunohistochemical analysis demonstrated that all groups expressed NOSTRIN in the plasma mem- brane and cytoplasm, and Western blot analysis confirmed that NOSTR1N levels were significantly higher in cells transfected with the NOSTR1N plasmid （P〈0.01）. The activity of eNOS and the levels of NO2-/NO3 were significantly decreased in NOSTRIN overexpressing cells as compared with empty vector and untransfected cells （P〈0.01 and P〈0.01, respectively）. Morphological and ultrastructural changes were observed under light and electron microscopy, and it was found that NOS- TRIN-overexpressing cells were elongated with deformities of the karyotheca, injury to the plasma membrane, increased lipids in the cytoplasm, and shortened microvilli. This study showed that overex- pression of NOSTRIN had a significant effect on eNOS activity in HUVECs and resulted in significant cellular damage.

关键词： human umbilical vein endothelial cell nitric oxide synthase traffic inducer nitric oxide synthase nitric oxide

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快速无创性产前诊断唐氏综合征的初步研究

中国优生与遗传杂志 2010年第5期18卷 37-39页

作者：相文佩水丽君温子娜徐晓燕华中科技大学同济医学院计划生育研究所/生殖医学中心华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科 430030

目的建立快速无创性产前诊断唐氏综合征的有效诊断模式。方法从98名孕妇中筛选出12名高度怀疑唐氏妊娠者,当日流式细胞术分选母血中的胎儿有核红细胞(Fetal nucleated red blood cells,FNRBCs),制备滴片后,次日进行多重引物原位杂交(mut... 详细信息

目的建立快速无创性产前诊断唐氏综合征的有效诊断模式。方法从98名孕妇中筛选出12名高度怀疑唐氏妊娠者,当日流式细胞术分选母血中的胎儿有核红细胞(Fetal nucleated red blood cells,FNRBCs),制备滴片后,次日进行多重引物原位杂交(muti-primed in situ labeling,multi-PRINS)检测胎儿细胞21号、Y染色体。结果均可在两日内得到诊断结论 ,诊断10例正常胎儿和两例男性唐氏综合征胎儿,与实际胎儿核型完全一致。结论流式分选母血中胎儿有核红细胞后多重PRINS技术检测细胞染色体可作为快速无创性产前诊断的有效模式,并可为其他非整倍体异常和单基因病的快速无创性产前诊断提供有效参考。

关键词：胎儿有核红细胞流式细胞术多重引物原位杂交唐氏综合征

性染色体与常染色体平衡易位导致无精子症2例报告

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中华男科学杂志 2021年第11期27卷 1044-1046页

作者：韩婷婷黄继华钟影温子娜李凌霄孟祥黔刘思瑶张心悦廖雪成都锦欣生殖医学与遗传学研究所/锦江区妇幼保健院生殖中心四川成都610061

不孕不育一直是生殖健康领域亟待解决的重大科学问题。生育障碍问题影响全球六分之一的育龄夫妇;。我国育龄夫妇近10%存在生育问题,并以每年40万对左右的速度逐年递增。在众多导致不孕不育的原因中,男性因素所占比重已经高达50%。引起... 详细信息

不孕不育一直是生殖健康领域亟待解决的重大科学问题。生育障碍问题影响全球六分之一的育龄夫妇;。我国育龄夫妇近10%存在生育问题,并以每年40万对左右的速度逐年递增。在众多导致不孕不育的原因中,男性因素所占比重已经高达50%。引起男性不育的原因复杂给临床诊治带来了很多困难。随着临床先进技术的应用,部分导致男性不育症的病因已被确定,如遗传学因素:常染色体或性染色体异常,AZF微缺失等。

关键词：无精子症染色体核型染色体易位精子生成障碍