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打造既“叫好”又“叫座”的朝阳产业 A01

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不同浓度脂多糖刺激奶牛乳腺上皮细胞对NF-κB及LAP表达的影响

德州日报

作者：王育恒温世勇

坚持“要素跟着项目走”让“关键变量”成为“最大增量”培育冠军提升话语权责任部门当好“保障部”随着国家和人民对环境保护的重视，环保装备产业已成为前景广阔的朝阳产业。我市环保装备产业有平台、有基础，下一步如何加快推进全市... 详细信息

坚持“要素跟着项目走”让“关键变量”成为“最大增量”培育冠军提升话语权责任部门当好“保障部”随着国家和人民对环境保护的重视，环保装备产业已成为前景广阔的朝阳产业。我市环保装备产业有平台、有基础，下一步如何加快推进全市环保装备产业发展，形成?

关键词：环保装备产业链朝阳产业产业化压滤机关键变量贝莱特

来源： cnki报纸评论

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cnki报纸

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中国兽医科学 2012年第10期42卷 1068-1072页

作者：程兰玲曹贵方温世勇赵鹏伟凃勇菅瑞珍李琦内蒙古农业大学动物胚胎与发育生物学研究室内蒙古呼和浩特010018

为了观察不同浓度脂多糖对奶牛乳腺上皮细胞NF-κB及LAP基因表达的影响,设置不同浓度(0、50、100、200、400和800ng/mL)的脂多糖(LPS)刺激奶牛乳腺上皮细胞,分别于刺激2、4、8、16、24、48和72h后提取细胞总RNA,经反转录反应后,运用荧... 详细信息

为了观察不同浓度脂多糖对奶牛乳腺上皮细胞NF-κB及LAP基因表达的影响,设置不同浓度(0、50、100、200、400和800ng/mL)的脂多糖(LPS)刺激奶牛乳腺上皮细胞,分别于刺激2、4、8、16、24、48和72h后提取细胞总RNA,经反转录反应后,运用荧光定量PCR方法检测NF-κB P65亚单位和LAP的表达水平。结果,与空白对照组相比,脂多糖浓度达到400ng/mL并培养72h后,奶牛乳腺上皮细胞NF-κB P65亚单位和LAP的表达量最高,且与对照组有极显著差异(P<0.01)。结果表明,在脂多糖诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎性效应中,NF-κB的表达活性增强,调控着防御基因LAP表达,呈现一定的剂量和时间效应关系。

关键词： β-防御素 NF-κB 乳腺上皮细胞脂多糖

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马羊膜上皮干细胞的分离培养和鉴定

畜牧与兽医 2015年第4期47卷 32-35页

作者：张福全丛姗温世勇郭继彤曹贵方内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 内蒙古大学生命科学院内蒙古呼和浩特010010

通过Tryp LE消化马羊膜收集羊膜上皮细胞,经过传代培养后,用免疫荧光染色、RT-PCR及流式细胞技术(FACS)分析其干细胞特征。免疫荧光染色发现马羊膜上皮细胞表达SSEA-1、SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60和TRA-1-81,只有少量的半贴壁细胞表达Oct... 详细信息

通过Tryp LE消化马羊膜收集羊膜上皮细胞,经过传代培养后,用免疫荧光染色、RT-PCR及流式细胞技术(FACS)分析其干细胞特征。免疫荧光染色发现马羊膜上皮细胞表达SSEA-1、SSEA-3、SSEA-4、TRA-1-60和TRA-1-81,只有少量的半贴壁细胞表达Oct4;RTPCR进一步证实马羊膜上皮细胞表达Oct4、Nanog和Sox2,而不表达STAT-3;流式细胞技术分析显示马羊膜上皮细胞也表达CD44、CD90、CD105,但不表达CD45。马羊膜上皮细胞培养三代时,平均倍增时间为(1.25±0.17)d。研究结果表明,通过Tryp LE消化马羊膜上皮可以分离获得马羊膜上皮细胞。

关键词：马羊膜上皮干细胞 TrypLE 鉴定

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马羊膜上皮细胞分离、培养及影响因素的研究

黑龙江畜牧兽医 2014年第12期 76-78页

作者：张福全温世勇丛姗郭继彤曹贵方内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 内蒙古大学生命科学学院呼和浩特010010

为了建立马羊膜上皮细胞(equine amniotic epithelial cells,e AECs)的分离、培养方法,并对其影响因素进行研究,试验从胎盘剥离羊膜,采用Trypsin-乙二胺四乙酸(EDTA)或Tryp LE消化法分离获得上皮细胞,然后进行上皮细胞培养传代研究。结... 详细信息

为了建立马羊膜上皮细胞(equine amniotic epithelial cells,e AECs)的分离、培养方法,并对其影响因素进行研究,试验从胎盘剥离羊膜,采用Trypsin-乙二胺四乙酸(EDTA)或Tryp LE消化法分离获得上皮细胞,然后进行上皮细胞培养传代研究。结果表明:通过0.25%Trypsin-EDTA消化,每克羊膜平均获得2.2×106个细胞,其3代传代倍增时间平均为(1.32±0.21)d;通过0.25%Tryp LE消化,每克羊膜平均获得1.9×106个细胞,其3代传代倍增时间平均为(1.26±0.17)d,两者间差异显著(P<0.05)。Tryp LE消化结果比较稳定,更适合从马羊膜层消化、分离上皮细胞。

关键词：马羊膜上皮细胞(eAECs) 分离培养消化倍增时间

一氧化氮合酶在绵羊卵母细胞体外成熟及胚胎发育中的表达

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动物医学进展 2014年第8期35卷 59-65页

作者：张冠华杨燕燕温世勇彭灿泉曹贵方内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 内蒙古自治区农牧业科学院畜牧研究所内蒙古呼和浩特010031

为了解一氧化氮合酶(NOS)的3个亚型在绵羊早期胚胎发育过程中的表达情况,明确一氧化氮(NO)是否参与调控绵羊早期胚胎发育。运用体外培养体系获得成熟卵母细胞及不同阶段早期胚胎(2-细胞胚胎、4-细胞胚胎、8-细胞胚胎、桑葚胚、囊胚),应... 详细信息

为了解一氧化氮合酶(NOS)的3个亚型在绵羊早期胚胎发育过程中的表达情况,明确一氧化氮(NO)是否参与调控绵羊早期胚胎发育。运用体外培养体系获得成熟卵母细胞及不同阶段早期胚胎(2-细胞胚胎、4-细胞胚胎、8-细胞胚胎、桑葚胚、囊胚),应用实时荧光定量PCR技术检测目标基因神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)相对表达情况。结果显示,1在绵羊未成熟卵母细胞、成熟卵母细胞和各发育阶段的早期胚胎,nNOS、eNOS、iNOS mRNA均有表达;2绵羊卵母细胞成熟过程中,nNOS mRNA相对表达量在未成熟卵母细胞期及成熟卵母细胞期均显著高于eNOS、iNOS的表达量(P<0.05),并且在成熟卵母细胞中的表达显著高于未成熟卵母细胞(P<0.05);3早期胚胎发育过程中,nNOS、iNOS mRNA相对表达水平显著高于eNOS的表达(P<0.05),并且表达趋势相似,具体呈现出4-细胞期较2-细胞有降低趋势;8-细胞期的表达量显著升高(P<0.05)并在桑葚胚期达到最高;到囊胚期出现显著降低(P<0.05)的表达趋势。研究结果显示,NO可能参与调控绵羊卵母细胞成熟和早期胚胎发育过程,尤其在8-细胞期到桑葚胚期这一特定阶段可能具有实质性的生理意义;并且在绵羊卵母细胞成熟过程中的NO产生可能主要由nNOS介导,而早期胚胎发育过程中的NO可能主要由nNOS和iNOS共同介导调控。

关键词：氧化氮合酶体外培养早期胚胎实时荧光定量PCR

蒙古绵羊Ghrelin基因的克隆和原核表达

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畜牧兽医学报 2011年第12期42卷 1782-1786页

作者：梁建荣曹贵方赵鹏伟温世勇程兰玲凃勇内蒙古农业大学动物胚胎与发育生物学研究室呼和浩特010018

为了克隆蒙古绵羊Ghrelin基因,构建其原核表达载体,并检测其在大肠杆菌中的表达情况。本研究用RT-PCR方法从蒙古绵羊胃组织mRNA扩增获得Ghrelin基因的cDNA序列,克隆到pMD-19T载体后进行序列分析。将测序正确的cDNA序列与原核表达载体pET... 详细信息

为了克隆蒙古绵羊Ghrelin基因,构建其原核表达载体,并检测其在大肠杆菌中的表达情况。本研究用RT-PCR方法从蒙古绵羊胃组织mRNA扩增获得Ghrelin基因的cDNA序列,克隆到pMD-19T载体后进行序列分析。将测序正确的cDNA序列与原核表达载体pET-32a(+)连接,并转化BL21(DE3)大肠杆菌。经IPTG诱导后进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果表明克隆的蒙古绵羊Ghrelin基因序列与已发表基因序列有2个碱基的差异,该碱基的变化并不影响氨基酸序列,目的蛋白主要以可溶性形式存在,Western-blot初步证实了所获得的融合蛋白是特异的。本研究成功构建了蒙古绵羊Ghrelin基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达,为进一步研究蒙古绵羊Ghrelin基因的功能提供参考。

关键词： Ghrelin 基因克隆原核表达蒙古绵羊

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防御素的免疫相关作用

黑龙江畜牧兽医 2014年第7期 44-46页

作者：孟庆刚李琦赵鹏伟温世勇菅瑞珍曹贵方内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018

防御素是一类广泛存在于黏膜上皮细胞和中性粒细胞中的阳离子多肽。作为先天性免疫反应的一部分,防御素对细菌、真菌、病毒和寄生虫均表现出抗菌活性。防御素除了作为先天性免疫的直接效应分子具有广谱的抗菌作用外,在获得性免疫反应中... 详细信息

防御素是一类广泛存在于黏膜上皮细胞和中性粒细胞中的阳离子多肽。作为先天性免疫反应的一部分,防御素对细菌、真菌、病毒和寄生虫均表现出抗菌活性。防御素除了作为先天性免疫的直接效应分子具有广谱的抗菌作用外,在获得性免疫反应中还具有作为配体的免疫调节作用和趋化作用,也可以增强针对肿瘤抗原、蛋白质抗原的体液和细胞免疫应答。文章通过探讨防御素的免疫相关作用,揭示防御素在先天性免疫反应和特异性免疫反应中的作用。

关键词：防御素多肽抗菌活性免疫作用

人β-防御素3在体外对小鼠淋巴细胞增殖反应的影响

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黑龙江畜牧兽医 2014年第5期 33-35页

作者：孟庆刚李琦赵鹏伟温世勇菅瑞珍曹贵方内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018

为了更充分地阐明人β-防御素3(HBD3)对淋巴细胞增殖反应的影响,试验先用CCK-8对不同浓度的刀豆蛋白A(ConA)诱导的淋巴细胞增殖反应进行检测,进而筛选出最适ConA浓度,然后再用CCK-8检测不同浓度(1,10,100,500,1 000 ng/mL)的HBD3协同最... 详细信息

为了更充分地阐明人β-防御素3(HBD3)对淋巴细胞增殖反应的影响,试验先用CCK-8对不同浓度的刀豆蛋白A(ConA)诱导的淋巴细胞增殖反应进行检测,进而筛选出最适ConA浓度,然后再用CCK-8检测不同浓度(1,10,100,500,1 000 ng/mL)的HBD3协同最适ConA浓度诱导淋巴细胞增殖反应。结果表明:ConA的最适浓度为2μg/mL;浓度为1,10,100 ng/mL的HBD3可以显著促进2μg/mL ConA诱导的淋巴细胞增殖反应,但是伴随着HBD3浓度的不断升高这一作用逐渐降低,当浓度为500 ng/mL和1 000 ng/mL时表现出一定程度的抑制作用。说明HBD3在一定浓度范围内对ConA诱导的淋巴细胞增殖反应具有促进作用,而超出这一浓度范围就会出现抑制作用。

关键词： CCK -8 淋巴细胞增殖人β-防御素3(HBD3) 刀豆蛋白A(ConA) 体外

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荷斯坦奶牛乳腺β-防御素的差异表达

中国畜牧兽医 2012年第6期39卷 65-68页

作者：程兰玲曹贵方温世勇赵鹏伟关洪敏菅瑞珍内蒙古农业大学动物胚胎与发育生物学研究室内蒙古呼和浩特010018

本研究为证明荷斯坦奶牛乳腺β-防御素的表达,扩增出6种β-防御素序列进行氨基酸分析,结果发现,扩增的6个保守的半胱氨酸,其核酸序列与NCBI数据库序列进行BLAST比对,结果LAP、BNBD4同源性100%,BNBD5为99.6%,EBD为99.5%,BNBD7、TAP为98.... 详细信息

本研究为证明荷斯坦奶牛乳腺β-防御素的表达,扩增出6种β-防御素序列进行氨基酸分析,结果发现,扩增的6个保守的半胱氨酸,其核酸序列与NCBI数据库序列进行BLAST比对,结果LAP、BNBD4同源性100%,BNBD5为99.6%,EBD为99.5%,BNBD7、TAP为98.5%;实时荧光定量PCR检测6种防御素的mRNA水平的表达,它们之间的表达量都有显著性差异(BNBD4与BNBD5除外),其中LAP表达量最多,BNBD7,EBD,BNBD5,BNBD4次之,TAP的表达量最低。

关键词： β-防御素差异表达荷斯坦奶牛乳腺炎