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补阳还五汤含药血清对人肺动脉内皮细胞间质转化的影响

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中国实验方剂学杂志 2019年第19期25卷 1-9页

作者：渠景连杨邯捷赵惠亮贵州中医药大学贵阳550025

目的:研究补阳还五汤含药血清对人肺动脉内皮细胞(HPAEC)间质转化(End MT)的调控作用,并从Jagged1/Notch1信号传导进一步分析其作用机制。方法:以53. 36 g·kg-1·d-1剂量灌胃家兔,制备补阳还五汤含药血清,等容积生理盐水灌胃制备空白... 详细信息

目的:研究补阳还五汤含药血清对人肺动脉内皮细胞(HPAEC)间质转化(End MT)的调控作用,并从Jagged1/Notch1信号传导进一步分析其作用机制。方法:以53. 36 g·kg-1·d-1剂量灌胃家兔,制备补阳还五汤含药血清,等容积生理盐水灌胃制备空白血清。体外培养HPAEC细胞,转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导建立End MT模型,设立空白组(10%空白血清),模型组(10%空白血清+TGF-β1),补阳还五汤含药血清高剂量组(10%含药血清+TGF-β1),补阳还五汤含药血清中剂量组(5%含药血清+5%空白血清+TGF-β1)和补阳还五汤含药血清低剂量组(2. 5%含药血清+7. 5%空白血清+TGF-β1) 5组。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖能力,transwell和划痕实验检测细胞迁移能力,免疫荧光观察内皮细胞标志物血小板内皮细胞黏附分子1(CD31),血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)和间质细胞标志物成纤维细胞特异性蛋白1(FSP1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Notch1,Jagged1及CBF1蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组HPAEC细胞增殖能力、迁移能力均显著增强(P <0. 01),CD31和VE-cadherin表达呈下降趋势,FSP1和α-SMA表达呈上升趋势,Notch1,Jagged1和CBF1表达显著上调(P <0. 01)。补阳还五汤含药血清干预后,与模型组比较,细胞增殖能力、迁移能力均明显减弱(P <0. 05,P <0. 01),且CD31和VE-cadherin表达呈上升趋势,FSP1和α-SMA表达呈下降趋势,Notch1,Jagged1和CBF1表达明显降低(P <0. 05,P <0. 01),随着含药血清浓度的增加,作用越明显。结论:补阳还五汤含药血清可部分抑制人肺动脉内皮细胞发生间质转化,这一过程可能与调控Jagged1/Notch1信号有关。

关键词：补阳还五汤特发性肺纤维化人肺动脉内皮细胞内皮间质转化

以中医络病理论试论恶性肿瘤发病及其转移的病机证治

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广州中医药大学学报 2014年第6期31卷 1012-1015页

作者：陈惠龚婕宁渠景连南京中医药大学基础医学院江苏南京210046

基于吴以岭院士等提出的络病理论框架——"三维立体网络系统",探讨中医络病理论在恶性肿瘤发病及其转移的病机证治中的作用。提出恶性肿瘤形成及转移的基本病机为由气及血、痰瘀癌毒郁积络脉,其传变过程可概括为气络、血络、痰瘀、癌毒... 详细信息

基于吴以岭院士等提出的络病理论框架——"三维立体网络系统",探讨中医络病理论在恶性肿瘤发病及其转移的病机证治中的作用。提出恶性肿瘤形成及转移的基本病机为由气及血、痰瘀癌毒郁积络脉,其传变过程可概括为气络、血络、痰瘀、癌毒、肿瘤、伏毒、转移瘤的依次传变。将恶性肿瘤络病理论与中医辨治恶性肿瘤转移的5种假说及现代肿瘤学互相印证,阐述络病防治恶性肿瘤及转移的治则治法,为开展中医络病防治恶性肿瘤及其转移的临床应用及研究提供理论基础。

关键词：络病理论恶性肿瘤转移三维立体网络系统

Jagged1/Notch1信号通路对特发性肺纤维化过程中内皮间质转化的影响研究

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中国全科医学 2024年

作者：杨其芬赵惠亮郭永胜渠景连贵州中医药大学基础医学院贵州中医药大学人文与管理学院

背景特发性肺纤维化（IPF）是一种病理机制复杂且尚无有效治疗手段的世界性疾病，内皮间质转化（EndMT）作为多种慢性血管疾病的病理基础，近年来发现也是IPF的重要危险因素之一，但其相关机制却尚未明确。目的观察Jagged1/Notch1信号... 详细信息

背景特发性肺纤维化（IPF）是一种病理机制复杂且尚无有效治疗手段的世界性疾病，内皮间质转化（EndMT）作为多种慢性血管疾病的病理基础，近年来发现也是IPF的重要危险因素之一，但其相关机制却尚未明确。目的观察Jagged1/Notch1信号通路对EndMT的影响，以阐明IPF过程中EndMT的相关机制。方法 2021年3—6月体外培养人肺动脉内皮细胞（HPAEC），取HPAEC加空白血清作为对照组，5 mg/L TGF-β1刺激HPAEC 72 h作为模型组，造模后加500 nmol/L Notch信号阻断剂（DAPT）作为DAPT组。采用反转录·聚合酶链反应（RT-PCR）检测Notch1、Jagged1和启动子结合因子（CBF1）mRNA的表达，蛋白质印迹法（WB）检测Notch1,Jagged1和CBF1蛋白的表达，免疫共沉淀法（Co-IP）检测Notch1活性胞内结构域蛋白（NICD1）与CBF1的结合情况，噻唑蓝比色法（MTT）检测细胞增殖情况，Transwell和划痕实验检共同测细胞迁移能力，免疫荧光检测内皮细胞标志物血小板内皮细胞黏附分子1(CD31)和血管内皮钙粘蛋白（VE-cadherin）以及间质细胞标志物成纤维细胞特异性蛋白1(FSP1)和α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达。结果 3组Notch1、Jagged1和CBF1 mRNA和蛋白表达水平、细胞增殖和迁移能力比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。其中空白组和DAPT组Notch1、Jagged1和CBF1 mRNA和蛋白表达、细胞增殖和迁移能力均低于模型组（P<0.05）。Co-IP实验结果显示，3组NICD1与CBF1的结合情况有差异，其中空白组和DAPT组NICD1与CBF1的结合受到抑制，模型组NICD1与CBF1发生结合。免疫荧光结果显示，3组CD31、VE-Cadherin、FSP1和α-SMA表达比较，差异均有统计学意义（P<0.05）；其中空白组和DAPT组内皮细胞标志物CD31、VE-Cadherin表达高于模型组，间质细胞标志物FSP1、α-SMA表达低于模型组（P<0.05）。结论Jagged1/Notch1信号通路参与了IPF过程中的EndMT进程，阻断该信号通路可抑制EndMT。

关键词：特发性肺纤维化内皮细胞内皮间质转化 Jagged1/Notch1信号通路人肺动脉内皮细胞

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中医药防治肺纤维化作用机制研究进展

中国中医基础医学杂志 2015年第6期21卷 772-775页

作者：渠景连龚婕宁南京中医药大学基础医学院南京210023

肺纤维化是多种因素引起的弥漫性肺间质疾病,以弥漫性肺泡炎和肺泡结构紊乱最终导致肺间质纤维化为特征。本病临床缺乏特效药物,中医药在防治肺纤维化方面优势渐显,作用机制研究也不断深入。故通过归纳、总结近年来的相关文献,从减轻炎... 详细信息

肺纤维化是多种因素引起的弥漫性肺间质疾病,以弥漫性肺泡炎和肺泡结构紊乱最终导致肺间质纤维化为特征。本病临床缺乏特效药物,中医药在防治肺纤维化方面优势渐显,作用机制研究也不断深入。故通过归纳、总结近年来的相关文献,从减轻炎症反应、改善细胞外基质代谢、干预细胞凋亡、调节微血管新生、纠正氧化/抗氧化失衡、调节免疫功能、减轻内质网应激7个方面阐述了中医药防治肺纤维化的作用机制研究进展,可为临床中医药有效防治肺纤维化提供实验室依据。

关键词：中医药肺纤维化作用机制

基于Wnt1/β-catenin信号通路探讨补阳还五汤含药血清抑制人肺动脉内皮细胞内皮间质转化的机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第7期30卷 49-58页

作者：杨其芬渠景连赵惠亮郭永胜陈隆贵州中医药大学贵阳550025

目的:探讨Wnt1/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路在补阳还五汤(BYHWT)含药血清干预人肺动脉内皮细胞(HPAECs)内皮间质转化(EndMT)过程中的作用及其相关机制。方法:常法煎煮BYHWT,分别以53.36 g·kg^(-1)·d^(-1) BYHWT和等体积生理盐水... 详细信息

目的:探讨Wnt1/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路在补阳还五汤(BYHWT)含药血清干预人肺动脉内皮细胞(HPAECs)内皮间质转化(EndMT)过程中的作用及其相关机制。方法:常法煎煮BYHWT,分别以53.36 g·kg^(-1)·d^(-1) BYHWT和等体积生理盐水灌胃新西兰兔制备含药血清和空白血清。体外培养HPAECs,采用转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导建立EndMT模型。设立空白组(10%空白血清)、模型组(TGF-β1+10%空白血清)、BYHWT低剂量组(TGF-β1+2.5%含药血清+7.5%空白血清)、BYHWT中剂量组(TGF-β1+5%含药血清+5%空白血清)和BYHWT高剂量组(TGF-β1+10%含药血清)5个组,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Wnt1、β-catenin和糖原合成激酶-3β(GSK-3β)蛋白的表达。为进一步明确Wnt1/β-catenin信号通路在BYHWT含药血清干预EndMT过程中的机制,构建β-catenin过表达质粒转染至HPAECs,经聚合酶链式反应确认β-catenin过表达后,采用前期研究效果最优的10%含药血清进行干预,另设空白组(10%空白血清)、模型组(TGF-β1+10%空白血清)、BYHWT组(TGF-β1+10%含药血清)、BYHWT+过表达质粒组(TGF-β1+10%含药血清+空白质粒)和BYHWT+β-catenin过表达质粒组(TGF-β1+10%含药血清+β-catenin)5个组。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖能力,划痕实验和Transwell法共同检测细胞迁移能力,免疫荧光法检测血小板内皮细胞黏附分子(CD31)、血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、成纤维细胞特异性蛋白1(FSP1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果:与空白组比较,模型组Wnt1、β-catenin蛋白表达均显著升高(P<0.01),GSK-3β蛋白表达显著降低(P<0.01)。与模型组比较,BYHWT高剂量组Wnt1、β-catenin蛋白表达均显著降低(P<0.01),GSK-3β蛋白表达显著升高(P<0.01);BYHWT中剂量组β-catenin蛋白表达显著降低(P<0.01),GSK-3β蛋白表达显著升高(P<0.01);而BYHWT低剂量组差异无统计学意义。与空白组比较,模型组细胞增殖和迁移能力显著增强(P<0.01),CD31和VE-cadherin荧光强度降低,FSP1和α-SMA荧光强度增加。与模型组比较,BYHWT组细胞增殖和迁移能力受到抑制(P<0.01),CD31和VE-cadherin荧光强度增加,FSP1和α-SMA荧光强度降低,而BYHWT+β-catenin过表达质粒组以上指标变化趋势均与模型组一致。同时,与BYHWT+过表达质粒组比较,BYHWT+β-catenin过表达质粒组细胞增殖和迁移能力显著增强(P<0.01),CD31和VE-cadherin荧光强度降低,FSP1和α-SMA荧光强度增加。结论:BYHWT含药血清可以抑制HPAECs发生EndMT,这一过程与调控Wnt/β-catenin信号通路有关。

关键词：特发性肺纤维化内皮间质转化 Wnt1/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路补阳还五汤

养肺活血方对肺纤维化大鼠肺组织水通道蛋白、黏附分子表达的影响

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中药材 2014年第9期37卷 1657-1659页

作者：渠景连郭海龚婕宁辛丽丽陈惠南京中医药大学基础医学院江苏南京210023 南京医科大学附属淮安第一医院肿瘤中心江苏淮安223300

目的:探讨养肺活血方对平阳霉素诱导肺纤维化大鼠肺组织水通道蛋白、黏附分子表达的影响。方法:将40只大鼠随机分为假手术组、模型组、地塞米松阳性对照组和养肺活血组4组,采用气管注入平阳霉素的方法建立大鼠肺纤维化模型,造模后第2天... 详细信息

目的:探讨养肺活血方对平阳霉素诱导肺纤维化大鼠肺组织水通道蛋白、黏附分子表达的影响。方法:将40只大鼠随机分为假手术组、模型组、地塞米松阳性对照组和养肺活血组4组,采用气管注入平阳霉素的方法建立大鼠肺纤维化模型,造模后第2天开始每天灌胃给药。假手术组和模型组予5‰羧甲基纤维素钠(CMC钠)溶液,地塞米松阳性对照组、养肺活血组分别予地塞米松蒸馏水溶液、养肺活血合剂。给药28 d后处死大鼠,取左肺组织,用免疫组化SP法检测肺组织AQP1、AQP5、ICAM-1和VCAM-1。结果:模型组大鼠肺组织AQP1、AQP5表达显著低于假手术组(P0.05)。结论:上调肺纤维化大鼠肺组织AQP1、AQP5表达和抑制ICAM-1、VCAM-1表达可能是养肺活血方减轻肺部炎症和抗纤维化的作用机制之一。

关键词：肺纤维化养肺活血方水通道蛋白黏附分子

贝母合剂对肺损伤大鼠血管内皮功能的干预作用

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辽宁中医杂志 2015年第2期42卷 423-425页

作者：渠景连郭海龚婕宁南京中医药大学基础医学院江苏南京210023 南京医科大学附属淮安第一医院肿瘤中心江苏淮安223300

目的:探讨贝母合剂对博来霉素肺损伤大鼠血管内皮功能的干预作用。方法:40只大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、地塞米松组和贝母合剂组,后3组建立博来霉素肺损伤模型,地塞米松组和贝母合剂组分别予地塞米松、贝母合剂治疗。用免疫组... 详细信息

目的:探讨贝母合剂对博来霉素肺损伤大鼠血管内皮功能的干预作用。方法:40只大鼠随机分为4组:假手术组、模型组、地塞米松组和贝母合剂组,后3组建立博来霉素肺损伤模型,地塞米松组和贝母合剂组分别予地塞米松、贝母合剂治疗。用免疫组化SP法检测肺组织AQP1、ICAM-1和VCAM-1,并采用光学显微镜和Image Pro Plus6.0测量计算其平均光密度(IOD)值。结果:模型组大鼠肺组织AQP1表达显著低于假手术组(P<0.01),而ICAM-1、VCAM-1表达显著高于假手术组(P<0.01)。与模型组相比,贝母合剂组肺组织AQP1表达明显升高(P<0.01),ICAM-1、VCAM-1表达明显降低(P<0.01);地塞米松组肺组织ICAM-1、VCAM-1表达低于模型组(P<0.01,P<0.05),而AQP1表达与模型组无显著性差异(P<0.05)。结论:促进肺损伤大鼠肺组织AQP1表达和抑制ICAM-1、VCAM-1表达可能是贝母合剂防治肺损伤的作用机制之一。

关键词：博来霉素肺损伤贝母合剂血管内皮功能水通道蛋白黏附分子

叶天士对《黄帝内经》“风淫于内”理论的继承与发展运用探析

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时珍国医国药 2024年第8期35卷 1952-1954页

作者：郭永胜张思超渠景连黄书婷贵州中医药大学贵州贵阳550025 山东中医药大学山东济南250355

《黄帝内经》“风淫于内”理论,是针对五运六气学说中在泉之气的风气太过,浸淫体内发病的气味治则。历代医家多以五行胜复制化理论与脏腑苦欲补泻学说进行阐释,并常作为外风方剂的气味配伍组方用药规律。叶天士推崇《黄帝内经》,辨证治... 详细信息

《黄帝内经》“风淫于内”理论,是针对五运六气学说中在泉之气的风气太过,浸淫体内发病的气味治则。历代医家多以五行胜复制化理论与脏腑苦欲补泻学说进行阐释,并常作为外风方剂的气味配伍组方用药规律。叶天士推崇《黄帝内经》,辨证治法多依经旨,对《黄帝内经》“风淫于内”理论多有发挥:开创风邪初袭治法方药体系,因正伤邪郁程度,辛凉苦甘,主辅化裁;外感风热温邪入里伤津,主以甘寒生津,甚则用咸寒滋阴;内伤杂病,热淫风消而阴液耗损,肝阳动而化内风,宜甘寒益阴和阳。此对深入认识叶天士颇具特色的治风思想及其实践有所裨益,且拓展《黄帝内经》经义的理解,亦为中医经典的传承创新提供借鉴。

关键词：叶天士黄帝内经风淫于内气味

贝母素乙对肺损伤大鼠TGF-β/MAPK信号通路的影响

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中药药理与临床 2016年第3期32卷 37-41页

作者：郭海吉福志赵晓峰龚婕宁渠景连南京医科大学附属淮安第一医院淮安223300 南京中医药大学基础医学院南京210029

目的:探讨贝母素乙对博莱霉素诱导的急性肺损伤大鼠TGF-β/MAPK ERK细胞信号转导通路影响。方法:大鼠麻醉后,气管内注入博莱霉素5mg/kg复制大鼠肺损伤模型,术后第2天开始每天灌胃1ml/100g体重假手术组和模型组,地塞米松0.405mg/kg组,贝... 详细信息

目的:探讨贝母素乙对博莱霉素诱导的急性肺损伤大鼠TGF-β/MAPK ERK细胞信号转导通路影响。方法:大鼠麻醉后,气管内注入博莱霉素5mg/kg复制大鼠肺损伤模型,术后第2天开始每天灌胃1ml/100g体重假手术组和模型组,地塞米松0.405mg/kg组,贝母素乙5mg/kg组、贝母素乙2.5mg/kg组。28天后,麻醉并处死大鼠,肺组织固定、包埋、切片,脱蜡后,行Masson三色染色,观察肺间质炎症程度,免疫组化检测肺组织TGF-β1、MEK1/2、ERK1/2、CTGF的水平,观察贝母素乙对肺损伤大鼠TGF-β/MAPK ERK细胞信号转导通路影响。结果:贝母素乙可显著降低大鼠肺间质炎症程度,显著降低肺间质纤维化评分;贝母素乙可显著降低大鼠肺组织TGF-β1、ERK1/2、MEK1/2、CTGF水平,而与地塞米松0.405mg/kg组作用相似,贝母素乙的有效剂量为2.5mg/kg、5mg/kg。结论:贝母素乙可通过显著降低TGF-β/MAPK ERK细胞信号转导水平而减轻博莱霉素诱发的大鼠肺损伤程度。

关键词：贝母素乙肺损伤细胞信号转导