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基于代谢组学研究肝复乐胶囊抑制LX-2细胞激活机制

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中成药 2024年第2期46卷 672-678页

作者：柯畅刘艳菊涂济源张方蕾高建龙周仲实湖北中医药大学药学院湖北武汉430065 湖北省中药炮制工程技术研究中心湖北武汉430065 湖北省肿瘤医院湖北武汉430074

目的研究肝复乐胶囊对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肝星状细胞LX-2激活的影响。方法 LX-2细胞分为对照组、模型组和肝复乐125、250、500μg/mL组。除对照组外,其余各组LX-2细胞给予5 ng/mL TGF-β1刺激24 h建立肝纤维化模型。通过... 详细信息

目的研究肝复乐胶囊对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肝星状细胞LX-2激活的影响。方法 LX-2细胞分为对照组、模型组和肝复乐125、250、500μg/mL组。除对照组外,其余各组LX-2细胞给予5 ng/mL TGF-β1刺激24 h建立肝纤维化模型。通过分子生物学手段(RT-qPCR及Western blot等)检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(COL1A1)表达。结合GC-MS法和代谢组学技术检测各组细胞代谢变化,寻找与肝星状细胞激活相关差异代谢物,进行通路富集,预测可能代谢通路。结果与模型组比较,肝复乐各剂量组LX-2细胞α-SMA、COL1A1的mRNA及蛋白表达降低(P<0.01),并呈剂量依赖性。代谢组学分析显示,丙酸、丁酸、苯丙氨酸、L-苏氨酸、肌醇、D-半乳糖、甘油、油酸、D-甘油酯与肝星状细胞激活关系密切,且在给药后回调,并富集得到4条代谢途径。结论肝复乐胶囊能够剂量依赖性地抑制TGF-β1对LX-2细胞的激活,并缓解其代谢异常,其机制可能是通过调节半乳糖代谢,甘油酯代谢,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成,苯丙氨酸代谢等途径实现的。

关键词：肝复乐胶囊肝星状细胞LX-2 TGF-β1 GC-MS 代谢组学

基于代谢组学探讨酒煨大黄缓和“损胃气”的机制

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中药药理与临床 2024年

作者：李振辉王本业陈思妙王琦涂济源周仲实王光忠湖北中医药大学药学院湖北省中药炮制工程技术研究中心

目的：探讨大黄酒煨前后对正常小鼠胃肠功能的作用差异及其机制。方法：将ICR小鼠随机分为正常对照组、生大黄12、3 g/kg、酒煨大黄12、3 g/kg。每天观察小鼠体质量和腹泻指数；给药7 d后，检测胃内容物残留率和小肠推进率，并进行胃HE... 详细信息

目的：探讨大黄酒煨前后对正常小鼠胃肠功能的作用差异及其机制。方法：将ICR小鼠随机分为正常对照组、生大黄12、3 g/kg、酒煨大黄12、3 g/kg。每天观察小鼠体质量和腹泻指数；给药7 d后，检测胃内容物残留率和小肠推进率，并进行胃HE切片染色；酶联免疫吸附法检测血清中MTL、GAS含量；RT-qPCR法检测胃组织中TNF-α、IL-6、IL-1β的mRNA表达；通过气相色谱质谱联用仪（GC-MS）筛选差异代谢物，并进行代谢通路富集分析。结果：酒煨大黄组相较于生大黄组显著升高小鼠体质量、降低腹泻指数、降低胃内容残留率、提高小肠推进率及胃肠激素、降低炎症因子水平、少量炎性浸润、降低差异代谢物D-半乳糖、D-葡萄糖、D-果糖、胆钙化醇的水平，增加肌醇、花生四烯酸、棕榈酸的水平。结论：酒煨大黄较生大黄缓和胃肠道不良反应，其机制可能与调节半乳糖代谢途径有关。该结果为进一步阐释酒煨大黄减轻“损胃气”副作用提供依据。

关键词：大黄黄酒煨制胃肠功能代谢组学炎症因子代谢物

生、醋柴胡UPLC-DAD指纹图谱建立及抗肝纤维化作用的谱效关系研究

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中国药理学通报 2024年第6期40卷 1145-1152页

作者：陈妮平王燕董妍肖扬鑫涂济源刘艳菊周仲实湖北中医药大学药学院湖北省中药炮制工程技术研究中心湖北武汉430065

目的建立生、醋柴胡的指纹图谱,比较生、醋柴胡化学成分差异,考察两者抗肝纤维化作用的差异,探究其与抗肝纤维化药效之间的关联性。方法采用UPLC法建立10批生柴胡和10批醋柴胡的指纹图谱,以TGF-β诱导肝星状细胞(LX-2)建立肝纤维化体外... 详细信息

目的建立生、醋柴胡的指纹图谱,比较生、醋柴胡化学成分差异,考察两者抗肝纤维化作用的差异,探究其与抗肝纤维化药效之间的关联性。方法采用UPLC法建立10批生柴胡和10批醋柴胡的指纹图谱,以TGF-β诱导肝星状细胞(LX-2)建立肝纤维化体外细胞模型,以Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ,col1a1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白表达情况为药效指标,利用MetaboAnalyst 5.0网站,以变量重要性投影(VIP)值>1为标准筛选影响生、醋柴胡质量的差异标志物,并采用正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)研究生、醋柴胡差异化学成分及与抗肝纤维化作用的谱效关系,筛选生、醋柴胡抗肝纤维化作用的主要成分。结果生、醋柴胡样品的UPLC指纹图谱共有峰有18个,生、醋柴胡的主要差异成分有9个,其中峰9、7、6可以指认为柴胡皂苷d、柴胡皂苷a、柴胡皂苷f。药效结果发现,生、醋柴胡均有抗纤维化活性,且醋柴胡抗纤维化活性更强。通过谱效关联结果发现,柴胡抗肝纤维化作用的主要相关成分为11、12、14、15、18号峰。结论建立生、醋柴胡的指纹图谱方法简单可行,通过谱效关系筛选出抗肝纤维化活性的重要成分,为明确生、醋柴胡抗肝纤维化作用物质基础提供依据。

关键词：生柴胡醋柴胡指纹图谱肝纤维化正交偏最小二乘谱效关系

人参皂苷Rb1调控MAPK通路改善小鼠脑缺血再灌注诱导血脑屏障损伤的作用研究

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药物评价研究 2024年第3期47卷 513-520页

作者：黄鹏吴斌高增祥余学成涂济源艾中柱曹国胜湖北中医药大学药学院湖北武汉430065

目的探讨人参皂苷Rb_(1)对小鼠脑缺血再灌注诱导的血脑屏障(BBB)损伤的作用及机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组和人参皂苷Rb_(1)低、中、高剂量(5、10、20 mg·kg-1)组,采用线栓法栓塞颈内动脉1 h后复灌建立脑缺血再灌... 详细信息

目的探讨人参皂苷Rb_(1)对小鼠脑缺血再灌注诱导的血脑屏障(BBB)损伤的作用及机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组和人参皂苷Rb_(1)低、中、高剂量(5、10、20 mg·kg-1)组,采用线栓法栓塞颈内动脉1 h后复灌建立脑缺血再灌注损伤模型,假手术组不栓塞,其余操作同模型小鼠。缺血1 h后ip相应药物,于再灌注24 h后处死取材。采用伊文思蓝染色法检测各组小鼠BBB损伤程度;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组小鼠脑组织中炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及紧密连接蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(Occludin)的mRNA表达水平;同时采用Western blotting检测各组小鼠脑组织中ZO-1、Occludin蛋白,金属基质蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)以及MAPK通路相关蛋白磷酸化的表达水平。结果与模型组相比,人参皂苷Rb_(1)可显著减少脑缺血再灌注小鼠脑组织中伊文思蓝的渗漏量(P<0.05),显著降低脑组织中IL-1β、IL-6和TNF-α的mRNA转录水平(P<0.05、0.01);显著上调ZO-1和Occludin的mRNA转录和蛋白表达水平(P<0.05、0.01);显著降低MMP-2、MMP-9的蛋白表达水平(P<0.05、0.01);显著抑制MAPK通路p38、JNK及ERK磷酸化蛋白的表达(P<0.05、0.01)。结论人参皂苷Rb_(1)对小鼠脑缺血再灌注诱导的BBB损伤具有一定的改善作用,其作用机制可能与抑制MAPK信号通路激活,减少MMP-2、MMP-9蛋白的表达,进而减轻对ZO-1、Occludin等紧密连接蛋白的降解有关。

关键词：人参皂苷Rb_(1) 脑缺血再灌注血脑屏障紧密连接蛋白 MAPK通路

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中药煨法历史沿革及现代研究概况

中国实验方剂学杂志 2024年第9期30卷 293-298页

作者：李振辉王本业舒宇航简祈盼涂济源刘艳菊王光忠湖北中医药大学药学院湖北省中药炮制工程技术研究中心武汉430065

煨法是中药传统炮制方法之一,历代本草和医书中均有相关记载,且种类繁多,但目前涉及到的具体中药品种也不多,且相关研究较少。笔者通过查阅古今相关资料,从煨法的历史沿革,炮制目的,现代代表性中药的炮制工艺、质量评价及药理学研究等... 详细信息

煨法是中药传统炮制方法之一,历代本草和医书中均有相关记载,且种类繁多,但目前涉及到的具体中药品种也不多,且相关研究较少。笔者通过查阅古今相关资料,从煨法的历史沿革,炮制目的,现代代表性中药的炮制工艺、质量评价及药理学研究等方面进行了整理和分析。梳理后发现,煨法在古代应用广泛,最早见于东汉《华氏中藏经》,历经唐、宋、金、元、明、清时期的丰富和发展,并随着明代经济的繁荣发展,在明清进入鼎盛时期,涉及的中药品种多达159种,并逐渐完善了煨法的炮制理论。然而现代沿用煨法的品种大幅减少,现代中药采用煨法的主要目的多为降低不良反应、缓和药性、增强疗效、除去非药用部位、利于进一步加工等。该文通过梳理中药古今煨法的关键信息,可为中药煨制品的临床应用及现代研究提供文献依据。

关键词：中医药炮制煨法历史沿革临床应用研究进展

基于GC-MS的枳壳水煎液抑制THP-1源性巨噬细胞泡沫化代谢组学研究

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中华中医药杂志 2024年第3期39卷 1522-1527页

作者：柯畅王燕曹国胜周仲实刘艳菊涂济源湖北中医药大学药学院武汉430065 湖北省中药炮制技术工程研究中心武汉430065

目的:研究枳壳水煎液(AFD)抑制氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人单核白血病细胞(THP-1)源性巨噬细胞泡沫化的代谢组学及其可能机制。方法:THP-1细胞分为对照组,模型组,枳壳低、中、高剂量组。采用油红O染色法检测泡沫细胞的形成,用ELIS... 详细信息

目的:研究枳壳水煎液(AFD)抑制氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人单核白血病细胞(THP-1)源性巨噬细胞泡沫化的代谢组学及其可能机制。方法:THP-1细胞分为对照组,模型组,枳壳低、中、高剂量组。采用油红O染色法检测泡沫细胞的形成,用ELISA法检测细胞内甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)及炎症因子水平[单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)],采用GC-MS检测各组细胞代谢组,寻找与药效相关的差异代谢物,并预测相关代谢通路。结果:AFD可抑制泡沫细胞形成,降低TG、TC及炎症因子MCP-1、IFN-γ、TNF-α表达水平(P<0.01,P<0.05)。代谢组学分析显示,L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-甲硫氨酸等7种生物标志物与细胞泡沫化关系密切,给药后显著回调(P<0.05,P<0.01)。结论:AFD可通过调节甘氨酸/丝氨酸代谢、鞘脂代谢、甲硫氨酸代谢抑制巨噬细胞泡沫化,为动脉粥样硬化的治疗提供依据。

关键词：枳壳水煎液动脉粥样硬化巨噬细胞泡沫化代谢组学

白术治疗溃疡性结肠炎作用机制的网络药理学分析及实验验证研究

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世界科学技术-中医药现代化 2024年第1期26卷 145-156页

作者：余学成高增祥吴斌涂济源陈林霖曹国胜湖北中医药大学药学院武汉430065 湖北省中药炮制工程技术研究中心武汉430065

目的基于网络药理学探究并预测白术治疗溃疡性结肠炎(UC)的作用靶点及分子机制,并加以动物实验验证。方法从TCMSP数据库、TCM-ID数据库以及结合相关参考文献筛选出白术的活性成分,在Swiss数据库获得对应靶点,从GeneCards数据库中获取UC... 详细信息

目的基于网络药理学探究并预测白术治疗溃疡性结肠炎(UC)的作用靶点及分子机制,并加以动物实验验证。方法从TCMSP数据库、TCM-ID数据库以及结合相关参考文献筛选出白术的活性成分,在Swiss数据库获得对应靶点,从GeneCards数据库中获取UC疾病的相关靶点,分别构建“药物-成分-靶点-疾病”网络图“、通路-活性成分-靶点”网络图以及绘制PPI核心靶点网络图,并进行GO功能富集分析和KEGG通路注释分析,然后进行活性成分与核心靶点的分子对接。以葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠UC模型,通过采用苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-Eosin staining)、AB-PAS染色法及免疫组织化学法分别检测小鼠结肠组织中病理形态学变化、杯状细胞数目以及炎症因子的表达情况,进行网络药理学预测结果的实验验证。结果筛选出白术内酯I、II、III等30个活性成分,获取其活性成分对应靶点591个,其中关键靶点有IL-1β、TNF-α等,分子对接结果显示IL-1β、TNF-α与核心成分具有良好的结合能力。动物实验结果显示,白术醇提物组可明显增加UC小鼠的结肠长度、降低DAI评分,还可改善UC小鼠结肠组织病变情况,增加杯状细胞的个数,抑制结肠组织中IL-1β、TNF-α的高表达。结论该研究表明白术可通过多组分、多靶点、多通路调控炎症因子的释放而抑制炎症反应,发挥改善UC的药效作用。

关键词：白术网络药理学分子对接溃疡性结肠炎炎症反应

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结合网络药理学及动物实验初步探究苍术抗溃疡性结肠炎的作用机制

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中国医院药学杂志 2024年第12期44卷 1405-1415页

作者：高增祥涂济源吴斌李振辉杨德森曹国胜湖北中医药大学药学院湖北武汉430065

目的:基于网络药理学方法结合体内动物试验探究苍术抗溃疡性结肠炎的作用机制。方法:(1)通过TCMSP、BATMAN-TCM数据库筛选出苍术的活性成分及其可能的作用靶点;通过GeneCards数据库检索溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)疾病的相关靶... 详细信息

目的:基于网络药理学方法结合体内动物试验探究苍术抗溃疡性结肠炎的作用机制。方法:(1)通过TCMSP、BATMAN-TCM数据库筛选出苍术的活性成分及其可能的作用靶点;通过GeneCards数据库检索溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)疾病的相关靶点;将上述靶点导入Venny 2.1中对苍术活性成分的作用靶点与UC的疾病靶点取交集,获得苍术抗UC的交集靶点;采用Cytoscape 3.7.1构建苍术抗UC的“苍术-活性成分-交集靶点”网络,分析其关键活性成分;将交集靶点导入STRING数据库,构建蛋白-蛋白互作网络图,筛选出核心靶点;将交集靶点导入Matescape数据库对其进行GO功能及KEGG富集分析,最后使用Maestro 11.1软件对关键活性成分与核心靶点蛋白进行分子对接。(2)体内复制葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导UC小鼠模型,将BALB/c小鼠通过随机数字表法分为空白组、模型组、苍术醇提物组(1110 mg·kg^(-1)·d^(-1))及阳性药组(柳氮磺吡啶,SASP,250 mg·kg^(–1)·d^(–1)),每组6只;灌胃给药(10 mL·kg^(-1)),每天1次,连续给药7 d,末次给药1 h后处死,并进行相关指标检测。结果:(1)苍术抗UC的活性成分有26个,苍术-UC交集靶点273个;KEGG富集分析显示主要涉及的信号通路有MAPK通路及PI3K/Akt等炎症通路;分子对接结果显示其关键活性成分与核心靶点蛋白之间具有较强的结合活性。(2)动物实验数据表明,苍术醇提物可明显增加UC小鼠的结肠长度、降低疾病活动指数评分,减缓UC小鼠结肠组织病变程度、增加杯状细胞的个数,抑制结肠组织中IL-1β、MMP-2、MMP-9等炎性介质的高表达,调控PI3K/Akt通路的激活。结论:该研究结合网络药理学及动物实验初步证实苍术可能通过作用于IL-1β等靶点、参与PI3K/Akt信号通路的调控改善UC小鼠结肠损伤,为深入研究苍术及其活性成分抗溃疡性结肠炎的作用机制提供实验依据和理论参考。

关键词：苍术溃疡性结肠炎网络药理学分子对接 PI3K/Akt

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“酒制升提”炮制理论在“寒性”中药中的应用及研究进展

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湖北中医药大学学报 2024年第4期26卷 120-124页

作者：陈高源韩一凡韩羽亭谢颖颜春潮涂济源刘艳菊湖北中医药大学湖北武汉430065 湖北省中药炮制工程技术研究中心湖北武汉430065

酒制可引药上行、增效减毒、缓解寒性中药过偏之性产生的副作用。“酒制升提”指导着中药药性理论的研究和“寒性”中药的炮制与临床应用。本文研究酒制对寒性中药的物质基础、药理药效、作用机制等的作用,揭示“酒制升提”炮制理论的... 详细信息

酒制可引药上行、增效减毒、缓解寒性中药过偏之性产生的副作用。“酒制升提”指导着中药药性理论的研究和“寒性”中药的炮制与临床应用。本文研究酒制对寒性中药的物质基础、药理药效、作用机制等的作用,揭示“酒制升提”炮制理论的发生发展与科学内涵,为深度挖掘“酒制升提”炮制理论的现实研究与应用提供参考与思路。

关键词：中药寒性酒制升提炮制理论