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端粒酶在人参皂甙Rh_2诱导肝癌细胞分化中的作用

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癌症 2004年第12期23卷 1655-1659页

作者：曾小莉涂植光首都医科大学附属北京安贞医院检验科北京100029 重庆医科大学医学检验系临床生化教研室重庆400016

背景与目的:最近我们研究发现,终浓度为20μg/ml的人参皂甙单体Rh2(ginsenosideRh2,G-Rh2)对人肝癌细胞株SMMC-7721有诱导分化作用,但其作用机制有待进一步研究。一些研究表明端粒酶再激活可能在细胞的癌变和永生化过程中发挥重要作用... 详细信息

背景与目的:最近我们研究发现,终浓度为20μg/ml的人参皂甙单体Rh2(ginsenosideRh2,G-Rh2)对人肝癌细胞株SMMC-7721有诱导分化作用,但其作用机制有待进一步研究。一些研究表明端粒酶再激活可能在细胞的癌变和永生化过程中发挥重要作用。本研究从端粒酶活性调控方面探讨G-Rh2诱导SMMC-7721分化的作用机制。方法:采用TRAP-PCR-ELISA法定量检测20μg/mlG-Rh2处理SMMC-7721细胞后端粒酶活性,RT-PCR法检测细胞内端粒酶催化亚单位(humantelomerasereversetranscriptase,hTERT)和p21mRNA的表达,以流式细胞仪检测药物作用前后细胞周期的改变和细胞内CyclinD1、CyclinE和P16蛋白水平。结果:G-Rh2呈时间依赖性抑制SMMC-7721细胞端粒酶活性,20μg/mlG-Rh2处理细胞1天后,端粒酶活性从1.105下降到0.765(P<0.01);而作用细胞5天后,活性从1.152下降到0.326(P<0.01)。20μg/mlG-Rh2能抑制细胞hTERTmRNA表达。20μg/mlG-Rh2使G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少;处理细胞24h后,G1期细胞升高最明显,从60.85%增高到78.53%(P<0.01)。20μg/mlG-Rh2可诱导细胞周期抑制因子P16蛋白和p21mRNA的表达,抑制细胞周期正调节因子CyclinD1和CyclinE表达。结论:hTERTmRNA表达水平和细胞周期的进程与端粒酶的活性密切相关。

关键词：人参皂甙Rh2 肝细胞癌端粒酶细胞周期

人参皂甙Rh_2对人肝癌细胞SMMC-7721信号传导的影响

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中华肝脏病杂志 2004年第9期12卷 565-566页

作者：曾小莉涂植光首都医科大学附属北京安贞医院检验科北京100029 重庆医科大学医学检验系临床生化教研室

人参具有抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、增强免疫力等多种生物学活性.人参皂甙是人参中主要的活性有效成分.我们曾发现人参总皂甙在体外能诱导人肝癌细胞株HepG2分化[1,2],最近又发现人参皂甙单体Rh2(G-Rh2)对人肝癌细胞株SMMC-7721有诱导分... 详细信息

人参具有抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、增强免疫力等多种生物学活性.人参皂甙是人参中主要的活性有效成分.我们曾发现人参总皂甙在体外能诱导人肝癌细胞株HepG2分化[1,2],最近又发现人参皂甙单体Rh2(G-Rh2)对人肝癌细胞株SMMC-7721有诱导分化作用.G-Rh2诱导SMMC-7721细胞分化过程中,癌细胞的信号传导系统必然会发生改变.通过研究G-Rh2对糖皮质激素受体(GR)、受体型酪氨酸激酶-胰岛素样生长因子I受体(IGFIR),Ca2+及蛋白激酶C(PKC)的影响,并观察糖皮质激素拮抗剂-RU486对细胞生长、PKC、IGFIR及细胞周期调节因子的影响,试图从信号传导方面初步探讨人参皂甙Rh2诱导分化作用机制.

关键词： SMMC-7721 人参皂甙人肝癌细胞株 GR 信号传导诱导胰岛素样生长因子Ⅰ 分化过程体型

血管内皮生长因子反义寡核苷酸对人白血病细胞血管内皮生长因子表达的影响

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中华血液学杂志 2004年第1期25卷 22-25页

作者：张伶涂植光冯文莉黄宗干重庆医科大学检验系 400016 重庆医科大学临床学院血液科

目的　探讨血管内皮生长因子 (VEGF)反义寡脱氧核苷酸 (AS ODN)对人白血病细胞系VEGF表达的影响。方法　将VEGFAS ODN与K5 6 2和HL 6 0细胞共孵育 ,采用RT PCR技术、免疫组化方法以及ELISA法观察VEGFAS ODN对人白血病细胞系VEGFmRNA和... 详细信息

目的　探讨血管内皮生长因子 (VEGF)反义寡脱氧核苷酸 (AS ODN)对人白血病细胞系VEGF表达的影响。方法　将VEGFAS ODN与K5 6 2和HL 6 0细胞共孵育 ,采用RT PCR技术、免疫组化方法以及ELISA法观察VEGFAS ODN对人白血病细胞系VEGFmRNA和蛋白水平的影响。应用MTT法观察VEGFAS ODN作用后的白血病细胞培养上清对人脐静脉血管内皮细胞 (ECV30 4 )增殖的影响。结果　K5 6 2细胞和HL 6 0细胞经VEGFAS ODN(2 .5～ 15 .0 μmol L)作用 2 4h后 ,VEGFmRNA的表达量呈剂量依赖性减少 ,而其表达量不受VEGF错义ODN的影响 ;当加入 5 .0 μmol LVEGFAS ODN作用 2 4h后 ,细胞内及其培养上清液中VEGF蛋白水平显著减少 ,其培养上清对ECV30 4细胞的促增殖作用减弱 ,而错义ODN处理组白血病细胞VEGF蛋白水平及其作用未见明显改变。结论　VEGFAS ODN在体外能够抑制人白血病细胞VEGF的表达。

关键词：血管内皮生长因子反义寡核苷酸白血病 RT-PCR技术免疫组织化学血管新生细胞培养

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MTS1基因β启动子转录活性研究

中华血液学杂志 2003年第7期24卷 344-346页

作者：冯文莉刘兴涂植光黄宗干重庆医科大学临床血液学教研室 400016 重庆医科大学临床生物化学教研室 400016 重庆医科大学临床学院血液科 400016

目的　研究MTS1基因 β启动子在急性T淋巴细胞白血病细胞株中的转录激活情况 ,鉴定 β启动子转录活性的功能片段区。方法　用DNA重组方法 ,构建MTS1基因 β启动子 3′端转录起始点相同 ,而 5′端序列不同的 7种pGL3重组质粒。用脂质体... 详细信息

目的　研究MTS1基因 β启动子在急性T淋巴细胞白血病细胞株中的转录激活情况 ,鉴定 β启动子转录活性的功能片段区。方法　用DNA重组方法 ,构建MTS1基因 β启动子 3′端转录起始点相同 ,而 5′端序列不同的 7种pGL3重组质粒。用脂质体介导的基因瞬时转染法 ,将构建的重组质粒分别转染MTS1基因双等位缺失的Jurkat细胞株 ,检测pGL3重组质粒中荧光素酶报告基因的表达 ,观察 β启动子在Jurkat细胞中的激活情况及其基础转录活性片段区。结果　成功构建了MTS1基因 β启动子 7种不同片段的重组质粒 ,它们在Jurkat细胞中均有转录活性 ,其中 0 .38kbSacⅡ SacⅠ酶切片段是MTS1基因 β启动子转录活性的基础片段。结论　MTS1β启动子可在Jurkat细胞中被激活。

关键词： MTS1基因 β启动子基因表达急性T淋巴细胞白血病发病机制

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兔肾脏DDAH活性测定方法的研究

中国药理学通报 2003年第3期19卷 348-351页

作者：秦俭陈运贞涂植光重庆医科大学临床学院心内科重庆400016 重庆医科大学临床学院检验系重庆400016

目的　建立日本大耳白家兔肾脏二甲基精氨酸二甲基氨基水解酶 (DDAH)活性的检测方法。方法　空气栓塞处死正常日本大耳白家兔后 ,取出肾脏并制备匀浆 ,以非对称性二甲基精氨酸 (ADMA)为底物 ,用UV 2 6 5型分光光度计在 5 2 5nm下测定生... 详细信息

目的　建立日本大耳白家兔肾脏二甲基精氨酸二甲基氨基水解酶 (DDAH)活性的检测方法。方法　空气栓塞处死正常日本大耳白家兔后 ,取出肾脏并制备匀浆 ,以非对称性二甲基精氨酸 (ADMA)为底物 ,用UV 2 6 5型分光光度计在 5 2 5nm下测定生成L 胍氨酸 (L Cit)的量 ,不同条件下比较 ,筛选最适条件 ,并计算DDAH降解ADMA的酶促反应动力学参数。结果　DDAH降解ADMA的酶促反应动力学参数为Km =(0 2 8± 0 10 )mmol·L-1,Vm =(1 36±0 4 2 )mmol·L-1·g-1·min-1。本实验选定的兔肾DDAH活性检测最适条件为 :酶蛋白浓度 12g·L-1、缓冲液最适pH7 4、ADMA终浓度 2mmol·L-1、反应时间 30min。结论　本法简便易行 ,且以Km 值作为确定酶促反应底物浓度的依据。

关键词：兔肾脏二甲基精氨酸二甲基氯基水解酶非对称性二甲基精氨酸

Wnt2在乳腺癌组织及患者血清中的表达及意义

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第6期29卷 633-636页

作者：郭变琴吴立翔汪先桃涂植光重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室重庆400016 重庆市肿瘤医院检验科重庆400030

目的检测乳腺癌细胞株(MDA-MB-231、ZR-75-30、MCF-7)、乳腺癌患者组织中Wnt2的表达,同时检测乳腺癌患者血清中Wnt2及CA-153表达量,并对二者的相关性进行分析。方法采用实时荧光定量PCR及Western blot技术检测MDA-MB-231、ZR-75-30、MC... 详细信息

目的检测乳腺癌细胞株(MDA-MB-231、ZR-75-30、MCF-7)、乳腺癌患者组织中Wnt2的表达,同时检测乳腺癌患者血清中Wnt2及CA-153表达量,并对二者的相关性进行分析。方法采用实时荧光定量PCR及Western blot技术检测MDA-MB-231、ZR-75-30、MCF-7中Wnt2 mRNA及蛋白水平;采用免疫组织化学对5例配对的癌旁组织、9例乳腺原位癌及9例侵袭性乳腺癌进行检测;同时采用ELISA检测15例健康成年女性、30例乳腺癌患者血清中Wnt2蛋白水平;电化学发光技术检测CA-153水平,并收集完整的病理资料与血清中Wnt2蛋白水平比较分析。结果 Wnt2在乳腺癌细胞株MDA-MB-231、ZR-75-30、MCF-7中未见表达;在乳腺癌组织上皮及间质细胞中呈高表达,而在配对的癌旁组织呈不表达或弱表达状态;30例乳腺癌患者血清中Wnt2及CA-153平均表达量显著高于健康成年女性(P<0.05),且Wnt2表达水平与CA-153呈正相关。结论血清Wnt2可与CA-153同时作为乳腺癌筛查的血清学辅助指标,有助于提高乳腺癌检出的灵敏度。

关键词： Wnt2 CA-153 乳腺癌实时荧光定量PCR 蛋白印迹免疫组织化学酶联免疫吸附试验

依托现代科学管理和技术开展肿瘤标志物研究和应用

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中华检验医学杂志 2006年第4期29卷 289-292页

作者：涂植光重庆医科大学医学检验系 400016

肿瘤标志物(TM)在肿瘤早期筛查、疗效评估、预后判断、指导制定肿瘤治疗方案及肿瘤辅助诊断等方面被广泛应用。但也存在TM不能满足早期临床诊断要求、检测方法未标准化、诊断性能缺乏科学评价等问题。因此,应依托现代科学管理和技术,通... 详细信息

肿瘤标志物(TM)在肿瘤早期筛查、疗效评估、预后判断、指导制定肿瘤治疗方案及肿瘤辅助诊断等方面被广泛应用。但也存在TM不能满足早期临床诊断要求、检测方法未标准化、诊断性能缺乏科学评价等问题。因此,应依托现代科学管理和技术,通过主动与临床和基础相关学科协作,努力寻找新的理想TM,并结合我国8种重点肿瘤防治工作,完善和发挥TM的作用。

关键词：肿瘤标志物标准化诊断性能

组织因子途径抑制物-2表达与肝癌细胞体外侵袭能力的实验研究

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肿瘤 2009年第10期29卷 976-979页

作者：周金敬毕晓徐勇涂植光重庆医科大学检验系临床检验诊断学实验室重庆400016 深圳市人民医院/暨南大学第二临床医学院检验科深圳518020

目的:研究肝癌组织中组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)基因的表达,同时探讨TFPI-2对肝癌细胞侵袭能力的影响。方法:应用原位杂交法和免疫组织化学法检测30例肝癌患者的癌组织和癌旁正常肝组织中TFPI-2... 详细信息

目的:研究肝癌组织中组织因子途径抑制物-2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)基因的表达,同时探讨TFPI-2对肝癌细胞侵袭能力的影响。方法:应用原位杂交法和免疫组织化学法检测30例肝癌患者的癌组织和癌旁正常肝组织中TFPI-2基因和蛋白的表达;通过脂质体法将TFPI-2基因转染人HepG2细胞,RT-PCR检测转染前后TFPI-2 mRNA的表达;Transwell小室法测定TFPI-2基因转染前后肝癌细胞体外侵袭迁移能力的变化。结果:肝癌组织中TFPI-2mRNA与蛋白的表达水平明显低于癌旁正常肝组织(P0.05)。结论:肝癌组织中TFPI-2表达明显降低,TFPI-2基因表达可明显抑制肝癌细胞的体外侵袭能力。

关键词：癌,肝细胞肿瘤浸润基因,TFPI-2 HepG2细胞

TFPI-2在肝癌和正常肝组织中表达的差异

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重庆医科大学学报 2009年第11期34卷 1472-1474页

作者：周金敬徐勇涂植光重庆医科大学检验系临床检验诊断学实验室重庆400016 深圳市人民医院龙华分院广东518020

目的:探讨肝癌组织和癌旁正常肝组织中组织因子途径抑制物2(Tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)基因及蛋白表达情况。方法:应用原位杂交和免疫组织化学技术检测30例肝癌患者的癌组织和癌旁正常肝组织中TFPI-2的基因和蛋白表达... 详细信息

目的:探讨肝癌组织和癌旁正常肝组织中组织因子途径抑制物2(Tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)基因及蛋白表达情况。方法:应用原位杂交和免疫组织化学技术检测30例肝癌患者的癌组织和癌旁正常肝组织中TFPI-2的基因和蛋白表达。结果:正常肝组织中TFPI-2mRNA的表达显著高于肝癌组织(P<0.05),TFPI-2指数分别为88.23±1.43和30.66±2.47;正常肝组织中TFPI-2蛋白的表达显著高于肝癌组织(P<0.05),TFPI-2指数分别为46.60±1.80和22.54±1.22。结论:肝癌组织和正常肝组织中TFPI-2mRNA和蛋白表达均存在明显差异,为进一步探讨TFPI-2表达与肝癌的发展、侵袭转移的关系提供了理论依据。

关键词：组织因子途径抑制物2 肝癌原位杂交免疫组化