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HPV16型E7重组蛋白的表达及其多克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第2期30卷 167-170,175页

作者：王冰冰涂建欣吕艳侯柏龙刘巧琼林晓云陈韶薛向阳朱珊丽张丽芳温州医科大学分子病毒与免疫研究所/微生物学与免疫学教研室浙江温州325000

目的制备人乳头瘤病毒(HPV)16型E7原核表达蛋白及其多克隆抗体。方法用PCR方法从宫颈癌组织中扩增HPV16 E7基因,克隆至pET21a(+)载体并构建pET21a(+)/HPV16 E7重组质粒,测序鉴定;将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-... 详细信息

目的制备人乳头瘤病毒(HPV)16型E7原核表达蛋白及其多克隆抗体。方法用PCR方法从宫颈癌组织中扩增HPV16 E7基因,克隆至pET21a(+)载体并构建pET21a(+)/HPV16 E7重组质粒,测序鉴定;将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导后表达重组蛋白,用Ni-NTA亲和层析法纯化并经SDS-PAGE及Western blot分析鉴定;纯化的HPV16 E7重组蛋白免疫日本大耳白兔制备多克隆抗体,用ELISA检测多克隆抗体的效价,并用Western blot法及免疫荧光技术分析多克隆抗体的特异性。结果 HPV16 E7重组蛋白可通过原核表达系统进行表达和纯化;通过兔免疫后可制备特异性的多克隆IgG抗体,效价达1∶30 000;经Western blot法和免疫荧光染色结果证实兔多克隆抗体可特异性识别HPV16 E7蛋白。结论成功进行了HPV16 E7原核表达并制备了HPV16 E7兔多克隆抗体。

关键词：人乳头瘤病毒 E7蛋白多克隆抗体

蛋白组合标志物对依那西普治疗类风湿关节炎预后的影响

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现代实用医学 2020年第6期32卷 652-654页

作者：童筱君涂建欣孙莉台州市中心医院浙江省台州318000 温州医科大学附属第一医院

目的探讨特定蛋白(自身抗体和细胞因子)对依那西普治疗中高疾病活动度类风湿关节炎(RA)的疗效预测作用。方法筛选24个高潜肿瘤坏死因子(TNF)-α抑制剂治疗RA疗效预测的特定蛋白标志物,然后使用TNF-α抑制剂(依那西普)治疗6例中高疾病活... 详细信息

目的探讨特定蛋白(自身抗体和细胞因子)对依那西普治疗中高疾病活动度类风湿关节炎(RA)的疗效预测作用。方法筛选24个高潜肿瘤坏死因子(TNF)-α抑制剂治疗RA疗效预测的特定蛋白标志物,然后使用TNF-α抑制剂(依那西普)治疗6例中高疾病活动度RA患者,分析高潜蛋白标志物对于依那西普治疗RA疗效预测价值,以及精神状态对TNF-α抑制剂治疗RA疗效的影响。结果治疗24周后,6例患者RA的活动指标如血沉、C反应蛋白、肿胀关节计数、压痛关节计数指标、DAS28评分相对基线时明显好转焦虑抑郁及疲乏状态亦较前改善,其中3例达到疾病缓解,另外3例达到低疾病活动。10种蛋白标志物以3:3升高和降低。剔除这10种蛋白后,经依那西普治疗后,抗环瓜氨酸肽抗体、抗环瓜氨酸抗体、载脂蛋白E、钙卫蛋白、细胞间黏附分子1、白介素1α、白细胞介素21及骨诱导因子等指标降低,软骨寡聚基质蛋白、趋化因子配体3、白细胞介素6、生存素、维生素D结合蛋白及白细胞介素1β升高。结论经依那西普治疗后RA的疾病活动度明显改善,也可以改善焦虑抑郁和疲乏状态。可将血清蛋白标志物作为重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白治疗RA疗效的预测因子,为临床蛋白质组学应用于RA患者的精准治疗和构建预测模型提供基础和方向。

关键词：类风湿关节炎依那西普蛋白标志物疗效预测因子

膝骨关节炎软骨下骨髓水肿样病变的危险因素研究

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膝骨关节炎软骨下骨髓水肿样病变的危险因素研究

膝骨关节炎软骨下骨髓水肿样病变的危险因素研究

二零一四年浙江省风湿病学学术年会

作者：熊江彪陈静涂建欣朱小春温州大学医学院附属第一医院

目的探讨膝骨关节炎磁共振出现软骨下骨髓水肿样病变(BMLs)的危险因素。方法收集2012年9月-2013年6月在温州医科大学附属第一医院接受膝关节MRI及膝关节X线检查的膝关节OA患者资料,在矢状位的脂肪抑制T2加权像上应用WORMS法评估膝关节...

目的探讨膝骨关节炎磁共振出现软骨下骨髓水肿样病变(BMLs)的危险因素。方法收集2012年9月-2013年6月在温州医科大学附属第一医院接受膝关节MRI及膝关节X线检查的膝关节OA患者资料,在矢状位的脂肪抑制T2加权像上应用WORMS法评估膝关节磁共振软骨下BMLs,采用Logistic回归分析对BMLs的可能危险因素进行单因素和多因素分析,再对筛选出来的有意义的危险因素与BMLs作直线相关分析。P<0.05认为差异有统计学意义。

关键词：

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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医学研究杂志 2013年第12期42卷 108-110页

作者：熊江彪陈静涂建欣朱小春温州医科大学附属第一医院风湿免疫科 325000

目的探讨膝骨关节炎磁共振出现软骨下骨髓水肿样病变(BMLs)的危险因素。方法 41例膝骨关节炎患者纳入研究,采用WORMS法评估膝关节磁共振软骨下BMLs,采用Logistic回归分析BMLs的危险因素。结果体重指数、年龄是膝关节软骨下BMLs的危险因... 详细信息

目的探讨膝骨关节炎磁共振出现软骨下骨髓水肿样病变(BMLs)的危险因素。方法 41例膝骨关节炎患者纳入研究,采用WORMS法评估膝关节磁共振软骨下BMLs,采用Logistic回归分析BMLs的危险因素。结果体重指数、年龄是膝关节软骨下BMLs的危险因素,体重指数(r=0.437,P=0.004)、年龄(r=0.358,P=0.022)分别与BMLs呈正相关。结论体重指数、年龄是膝骨关节炎软骨下BMLs的危险因素,体重指数、年龄越大,软骨下BMLs也越严重。

关键词：骨关节炎骨髓肿样病变磁共振成像体重指数

EB病毒对系统性红斑狼疮患者临床表现及Th1/Th2平衡的影响

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中国现代医生 2016年第15期54卷 5-8页

作者：涂建欣朱小春孙莉温州医科大学附属第一医院风湿免疫科浙江温州325000

目的探讨EBV对SLE患者临床表现及Th1/Th2平衡的影响。方法选择2013年1月~2015年12月在我院治疗的系统性红斑狼疮患者171例为研究组,另选择在我院进行健康体检者60例为对照组。SLE患者根据EBV-DNA结果分为EBV阳性亚组和EBV阴性亚组。分... 详细信息

目的探讨EBV对SLE患者临床表现及Th1/Th2平衡的影响。方法选择2013年1月~2015年12月在我院治疗的系统性红斑狼疮患者171例为研究组,另选择在我院进行健康体检者60例为对照组。SLE患者根据EBV-DNA结果分为EBV阳性亚组和EBV阴性亚组。分析EBV感染对患者临床表现的影响及对Th1/Th2平衡的影响。结果 SLE患者EBV-DNA阳性率显著高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。EBV阳性亚组SLE患者皮疹、关节炎、血液系统受累发生率、抗Rib-P抗体、抗Smith抗体阳性率及高免疫球蛋白血症发生率显著高于EBV阴性亚组,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。SLE患者EBV阳性亚组与阴性亚组及对照组Th2水平及Th1/Th2水平,IL-4水平比较,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。结论 EBV感染可能通过影响Th1/Th2平衡参与SLE发生发展,并与SLE患者皮疹、关节炎和血液系统损害有关。

关键词： EB病毒系统性红斑狼疮 Th1 Th2

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胃癌组织中人巨细胞病毒感染及其临床意义

温州医学院学报 2014年第10期44卷 703-707页

作者：金劲激涂建欣吴明马海广沈贤薛向阳温州医科大学附属第一医院胃肠外科浙江温州325015 温州医科大学附属第一医院风湿免疫科浙江温州325015 温州医科大学附属第一医院消化内科浙江温州325015 温州医科大学分子病毒与免疫研究所浙江温州325035

目的:初步探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染与胃癌的关系。方法:采用化学发光(CLIA)法对胃癌组(n=80)及健康对照组(n=80)的外周血清进行HCMV Ig G、Ig M抗体检测;巢式PCR技术检测22例胃癌患者的肿瘤及癌旁正常胃黏膜组织标本中的HCMV UL55基... 详细信息

目的:初步探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染与胃癌的关系。方法:采用化学发光(CLIA)法对胃癌组(n=80)及健康对照组(n=80)的外周血清进行HCMV Ig G、Ig M抗体检测;巢式PCR技术检测22例胃癌患者的肿瘤及癌旁正常胃黏膜组织标本中的HCMV UL55基因;统计分析HCMV感染与胃癌临床特征的关系。结果:胃癌组血清HCMV-Ig G阳性率为95%(76/80),HCMV-Ig M阳性率为6.25%(5/80);在健康对照组血清中,HCMV-Ig G阳性率为97.5%(78/80),HCMV-Ig M阳性率为3.75%(3/80),HCMV Ig G、Ig M在胃癌组与健康对照组血清中差异无统计学意义(P>0.05)。HCMV UL55阳性检出率在22例胃癌组织中为50%(11/22),在相应正常胃黏膜组织中为9.09%(2/22),胃癌组织HCMV阳性检出率较癌旁正常组织显著升高(P<0.01)。此外,未发现HCMV感染与胃癌的TMN分期、组织病理分化及肿块大小有显著性关联。结论:胃癌组织中存在HCMV感染,且HCMV相较于癌旁正常组织更倾向感染癌灶,提示HCMV感染可能参与胃癌的发生发展过程。

关键词：胃肿瘤人巨细胞病毒 UL55

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乙型肝炎病毒C基因多态性及其蛋白特性分析

温州医学院学报 2012年第5期42卷 409-412,418页

作者：冯娟吕艳陈昊涂建欣朱珊丽薛向阳张丽芳温州医学院分子病毒与免疫研究所/微生物学与免疫学教研室浙江温州325035

目的:调查温州医学院大学生人群乙型肝炎病毒(HBV)C基因多态性及其HBc蛋白特性变化,为了解乙肝病毒核心抗原(HBcAg)变异提供理论依据。方法:采用HBV-C基因特异性引物对21份温州医学院大学生HBV携带者(血清学检测为大三阳患者)血清标本进... 详细信息

目的:调查温州医学院大学生人群乙型肝炎病毒(HBV)C基因多态性及其HBc蛋白特性变化,为了解乙肝病毒核心抗原(HBcAg)变异提供理论依据。方法:采用HBV-C基因特异性引物对21份温州医学院大学生HBV携带者(血清学检测为大三阳患者)血清标本进行PCR扩增鉴定,并取19份PCR检测阳性产物直接测序;进一步用Vector NTI 8.0和DNA Star软件分析HBV-C基因多态性及HBc蛋白特性的变化。结果:21份标本中,HBV-C DNA阳性率达90.48%(19/21),与标准基因序列(Gen Bank X01587)比较,HBV-C基因同源性为93.3%～95.1%。HBV-C基因分别形成51种突变模式,其中一处由于核苷酸的改变,翻译的氨基酸也发生了相应的改变,此处氨基酸序列的第130处脯氨酸(Pro)突变为苏氨酸(Thr),其余标本均为同义突变;但突变处编码蛋白在亲水性、表面可及性及抗原性与标准株相比较无明显变化。结论:温州医学院大学生HBV携带者的HBV C基因具有多态性,但是由C基因决定的核心蛋白序列相对保守。

关键词：乙型肝炎病毒 C基因突变多态性

大鼠创伤性脑损伤后皮质中胰岛素样生长因子-1的表达

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南通大学学报（医学版） 2011年第3期31卷 162-165,F0002页

作者：赵婧涂建欣吴炳轩吴萱沈西伟衣昕金国华南通大学医学院南通226001

目的:观察大鼠创伤性脑损伤(TBI)后不同时相点损伤区周围皮质胰岛素样生长因子-1(IGF-1)mRNA和蛋白的表达变化。方法:采用大鼠自由落体脑损伤模型(Feneey法),通过RT-PCR和Western Blot方法检测大鼠TBI后12、24、48、72 h损伤区周围皮质I... 详细信息

目的:观察大鼠创伤性脑损伤(TBI)后不同时相点损伤区周围皮质胰岛素样生长因子-1(IGF-1)mRNA和蛋白的表达变化。方法:采用大鼠自由落体脑损伤模型(Feneey法),通过RT-PCR和Western Blot方法检测大鼠TBI后12、24、48、72 h损伤区周围皮质IGF-1 mRNA和蛋白的表达,用免疫荧光检测上述相同时间点IGF-1的表达定位。结果:大鼠TBI后12 h损伤区周围皮质IGF-1 mRNA和蛋白已开始显著表达,24 h达到高峰,48 h表达开始减少,72 h仍有少量表达。结论:大鼠TBI后,损伤区周围皮质IGF-1的表达在伤后24 h达到高峰,48 h后开始减少的变化趋势可为应用IGF-1治疗TBI提供合适的时间窗。

关键词：创伤性脑损伤皮质胰岛素样生长因子-1 大鼠

沙眼衣原体主要外膜蛋白_(21-387)的原核表达及其免疫原性

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温州医学院学报 2015年第2期45卷 95-99,105页

作者：刘巧琼涂建欣林晓云熊一融朱珊丽陈韶张丽芳温州医科大学分子病毒和免疫研究所微生物学和免疫学教研室浙江温州325035

目的:探讨沙眼衣原体(Ct)E血清型主要外膜蛋白(MOMP21-387)的原核表达及其免疫原性。方法:利用PCR方法扩增Ct E血清型MOMP第21至第387氨基酸的基因序列,克隆至p ET21a(+)原核表达载体构建重组质粒p ET21a(+)/MOMP21-387,并进行原核表达... 详细信息

目的:探讨沙眼衣原体(Ct)E血清型主要外膜蛋白(MOMP21-387)的原核表达及其免疫原性。方法:利用PCR方法扩增Ct E血清型MOMP第21至第387氨基酸的基因序列,克隆至p ET21a(+)原核表达载体构建重组质粒p ET21a(+)/MOMP21-387,并进行原核表达和纯化,经SDS-PAGE和Western blot法分析鉴定后,通过BALB/c小鼠免疫检测MOMP21-387蛋白的免疫原性,即通过ELISA法检测小鼠血清Ig G和生殖道分泌物Ig A抗体反应,乳酸脱氢酶(LDH)法检测其脾细胞的特异性杀伤作用。结果:在原核表达系统成功表达了MOMP21-387融合蛋白,经SDS-PAGE及Western blot法鉴定在相对分子质量(Mr)约44 000处出现特异性条带;并经NiNTA亲和层析的方法获得了纯化的MOMP21-387融合蛋白,免疫BALB/c小鼠可诱导产生特异性血清Ig G抗体和生殖道分泌物Ig A抗体,至第6周达到高峰,MOMP21-387组的Ig G和Ig A抗体较PBS组差异均有统计学意义(P<0.05);LDH检测结果显示,MOMP21-387组小鼠脾细胞对靶细胞的杀伤率,在10:1、20:1和40:1和80:1时均明显高于PBS组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Ct E型MOMP21-387融合蛋白具有良好的免疫原性,为基于MOMP21-387的Ct的ELISA法检测方法的开发和疫苗研究奠定了基础。

关键词：沙眼衣原体主要外膜蛋白原核表达免疫原性