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PKM2基因对胆管细胞癌迁移、侵袭及增殖的影响

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南京医科大学学报（自然科学版） 2015年第5期35卷 615-621页

作者：柴浩熊新魁孙道一单文刚浦立勇俞悦成峰南京医科大学第一附属医院肝脏移植中心江苏南京210029

目的 :检测M2-型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)在胆管癌(cholangiocarcinoma,CCA)组织中的表达情况,探讨PKM2下调对胆管癌细胞迁移、侵袭及增殖的影响。方法:实时定量逆转录聚合酶链反应(q RT-PCR)和免疫组织化学(immunohistoche... 详细信息

目的 :检测M2-型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)在胆管癌(cholangiocarcinoma,CCA)组织中的表达情况,探讨PKM2下调对胆管癌细胞迁移、侵袭及增殖的影响。方法:实时定量逆转录聚合酶链反应(q RT-PCR)和免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色分别检测胆管癌及对应癌旁组织标本中PKM2的m RNA和蛋白表达水平。利用慢病毒表达载体系统在胆管癌细胞株Hu CCT-1、HCCC-9810中下调PKM2,分别用划痕实验、Transwell细胞侵袭实验和CCK-8比色法检测细胞迁移、侵袭及增殖能力。结果:胆管癌组织中PKM2的m RNA和蛋白表达水平明显高于对应癌旁组织。经q RT-PCR和Western blot方法证实稳定转染PKM2 sh RNA的胆管癌细胞中PKM2的m RNA和蛋白水平较对照组均明显下降(P<0.05),与空载对照组(PKM2-NC)和正常对照组(PKM2)相比,实验组细胞(PKM2-sh RNA)的迁移、侵袭及增殖能力明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:胆管癌组织中PKM2表达明显高于癌旁组织,PKM2 sh RNA能有效地降低胆管癌细胞中PKM2基因的表达,PKM2基因沉默可以抑制Hu CCT-1、HCCC-9810细胞的迁移、侵袭及增殖。

关键词： shRNA干扰 PKM2基因生物学功能

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肝血管周上皮样细胞瘤的诊断与外科治疗

中华消化外科杂志 2014年第6期13卷 477-479页

作者：武正山韩晟朱岩孔连宝李相成浦立勇王学浩南京医科大学第一附属医院肝脏外科 210029 南京医科大学第一附属医院病理科 210029

目的总结肝血管周上皮样细胞瘤（PEComa）的临床特征,探讨该病的诊断与治疗方法.方法回顾性分析2008年1月至2012年1月南京医科大学第一附属医院收治的16例肝PEComa患者的临床资料,总结该病的发病情况、临床特点、影像学特征、手术及... 详细信息

目的总结肝血管周上皮样细胞瘤（PEComa）的临床特征,探讨该病的诊断与治疗方法.方法回顾性分析2008年1月至2012年1月南京医科大学第一附属医院收治的16例肝PEComa患者的临床资料,总结该病的发病情况、临床特点、影像学特征、手术及病理检查情况.患者行部分肝切除术后定期复查腹部B超、肝功能和肿瘤标志物,必要时复查腹上区CT,了解肿瘤有无复发、转移.随访时间截至2012年12月.结果 16例患者中发病以中年女性患者居多,8例无自觉症状,其他患者表现为右季肋区不适、肝区隐痛或胀痛.肿瘤均为单发,位于肝右叶11例、肝左叶4例、肝尾状叶1例.术前B超检查无明显特异性征象,CT检查示肿瘤呈不均匀低密度表现.16例患者均行部分肝切除术,术后病理检查示均为R0切除,无手术并发症发生及患者死亡.免疫组织化学检测示16例患者上皮样肿瘤细胞中恶性黑色素瘤HMB-45、Melan-A和血管平滑肌肌动蛋白均呈阳性.16例患者均获随访,平均随访时间为27.9个月（9.0 ～46.0个月）,随访期内无肿瘤复发和死亡.结论肝PEComa好发于中年女性患者,无特异性临床表现,术前CT检查有利于肝PEComa的鉴别诊断,行部分肝切除术治疗近期疗效良好.

关键词：肝肿瘤血管周上皮样细胞瘤肝切除术

线粒体ATP敏感性钾通道在大鼠肝缺血再灌注损伤中的作用及机制研究

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中华普通外科杂志 2007年第10期22卷 781-784页

作者：张伟张峰吕凌曹晓飞浦立勇刘现忠南京医科大学第一附属医院肝脏移植中心中国活体肝移植研究所 210029

目的探讨线粒体ATP敏感性钾通道在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的作用及机制。方法建立70%的大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型,SD大鼠随机分为6组,假手术组（sham,S）,缺血再灌注损伤（ischemia-reperfusion,IR）组,对照组（control,C）,二氮嗪... 详细信息

目的探讨线粒体ATP敏感性钾通道在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的作用及机制。方法建立70%的大鼠肝脏缺血再灌注损伤模型,SD大鼠随机分为6组,假手术组（sham,S）,缺血再灌注损伤（ischemia-reperfusion,IR）组,对照组（control,C）,二氮嗪（diazoxide,DZ）预处理组,DZ＋ 5-羟基葵酸（5-hydroxydecanoate,5-HD）预处理组,以及5-HD预处理组。再灌注后,取肝脉血检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）水平,取肝脏组织TUNEL法检测缺血肝脏细胞凋亡指数（apoptotic index,AI）,免疫组化检测Bcl-2,Bax,caspase-3表达。结果其他各组与S组相比,血清ALT、AST水平升高（P〈0.05）,C组与IR组之间AIX、AST水平无差异（P〉0.05）。DZ预处理组大鼠血ALT、AST水平较IR组明显改善,肝细胞凋亡减少,为（14.5±4.5）%（P〈0.05）,Bax及caspase-3表达降低,分别为15.7±5.4,15.1±6.3（P〈0.05）,而Bcl-2表达升高（18.5±5.8）（P〈0.05）,5-HD能阻断DZ的保护作用,使肝细胞凋亡（25.6±7.9）%增加,Bcl-2表达（13.4±5.7）下降,caspase-3表达（25.0±6.6）升高（P〈0.05）。单独应用5-HD时与IR组相比肝脏细胞凋亡（30.4±8.7）%和caspase-3（33.8±7.1）表达增加（P〈0.05）,Bax（31.2±7.0）和Bcl-2（9.1±3.6）差异没有统计学意义（P〉0.05）。结论线粒体ATP敏感性钾通道的开放对肝脏缺血再灌注损伤有保护作用,它可能是通过上调Bcl-2表达,下调Bax和caspase-3表达,抑制肝脏细胞凋亡而起作用的。

关键词：线粒体,肝钾通道二氮嗪再灌注损伤

表达HGF的骨髓间充质干细胞促进小移植肝早期肝再生

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中华肝胆外科杂志 2009年第4期15卷 283-287页

作者：俞悦张峰李相成姚爱华钱晓峰浦立勇范烨王学浩中国活体肝移植研究所南京医科大学第一附属医院肝脏外科江苏省肝脏移植中心南京210029

目的建立大鼠小体积肝移植模型，输注表达人肝细胞生长因子（human hepatocyte growth factor，hHGF）的骨髓间充质干细胞（mesenchymal stemcells，MSCs），研究其在移植早期对小移植肝促再生作用。方法将已建立的表达hHGF和绿色荧光... 详细信息

目的建立大鼠小体积肝移植模型，输注表达人肝细胞生长因子（human hepatocyte growth factor，hHGF）的骨髓间充质干细胞（mesenchymal stemcells，MSCs），研究其在移植早期对小移植肝促再生作用。方法将已建立的表达hHGF和绿色荧光蛋白（green fluorescence protein，GFP）的MSCs，分别命名为HGF／MSCs，GFP／MSCs。建立大鼠30％肝移植模型。受体分为4组，实验组输注5×10^6HGF／MSCs；对照组则分别输注相同体积的生理盐水（PS），5×10^6GFP／MSCs或1．0×10^9pfu含hHGF的重组腺病毒液（Ad-HGF）。分别于术后1，3，5，7d各组随机抽取5只大鼠处死。取血检测血清ALT和hHGF。记录移植物湿重。取肝组织检测hHGF、c-met表达，以及肝细胞凋亡和增殖活性。另每组15只，分组同上，用于观察生存期。结果PS组大鼠7d生存率33．3％；组织学及血清学检查示术后肝脏损伤重，汇管区单核细胞浸润多；而实验组大鼠7d生存率为73．3％，肝脏损伤轻，炎性细胞浸润少；实验组移植肝再生较PS组明显增加。结论大鼠部分肝移植后，输注HGF／MSCs能够保护小体积移植肝，促进小移植肝再生，提高7d生存率。

关键词：肝移植肝再生肝细胞生长因子间充质干细胞小体积供肝

西罗莫司预处理减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用及其机制

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中华器官移植杂志 2009年第12期30卷 749-752页

作者：饶建华吕凌成峰浦立勇钱晓峰王学浩张峰南京医科大学第一附属医院肝脏移植中心卫生部活体肝移植重点实验室 210029

目的探讨西罗莫司（SRL）预处理减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用及其机制。方法将SD大鼠随机分为4组，每组12只。假手术对照组：开腹后仅用生理盐水纱布覆盖切口60min，关腹；假手术SRL组：手术方式同假手术对照组；实验对照组：开腹... 详细信息

目的探讨西罗莫司（SRL）预处理减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤的作用及其机制。方法将SD大鼠随机分为4组，每组12只。假手术对照组：开腹后仅用生理盐水纱布覆盖切口60min，关腹；假手术SRL组：手术方式同假手术对照组；实验对照组：开腹后夹闭肝门静脉左支、肝动脉左支及左肝管，60min后开放血管；实验SRL组：手术方式同实验对照组。两SRL组大鼠术前2周开始给予SRL2mg·kg^-1·d^-1灌胃，术前6h加用1次，而丽对照组同期仅给予等体积无菌生理盐水灌胃。术后24h分别采集各组大鼠的血液和肝组织，检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）水平，光镜下观察肝组织的病理学变化，采用流式细胞术检测肝组织中CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞占单个核细胞的比例，采用实时聚合酶链反应检测肝组织中Foxp3 mRNA的表达，采用酶联免疫吸附试验检测血清中转化生长因子-β（TGF-β）和白细胞介素10（IL-10）的含量。结果假手术对照组和假手术SRL组血清ALT和AST均处于较低水平，而实验SRL组和实验对照组明显升高，且实验SRL组低于实验对照组（P〈0．05）。假手术对照组和假手术SRL组肝组织结构正常，实验对照组可见明显的片状坏死，实验SRL组肝小叶结构基本完整，未见明显细胞坏死。假手术对照组、假手术SRL组、实验对照组和实验SRL组CD4^＋CD25^＋T淋巴细胞占单个核细胞的比例分别为（6．12±1．87）％、（22．36±6．75）％、（4．53±1．02）％和（13．29±3．16）％。假手术SRL组Foxp3 mRNA的相对表达量以及血清中TGF—β和1L-10的含量明显高于假手术对照组（P〈0．05），实验SRL组明显高于实验对照组（P〈0．05）。结论SRL可以减轻大鼠肝脏缺血再灌注损伤，其机制可能与SRL诱导体内CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T淋巴细胞的分化以及增加TGF-β和IL-10的分泌抑制炎症反应有关。

关键词：西罗莫司肝再灌注损伤

缺血预处理对于大鼠部分肝移植术后肝再生信号通路的影响

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南京医科大学学报（自然科学版） 2007年第7期27卷 724-728,F0004页

作者：仲跻巍刘现忠姚爱华浦立勇李相成南京医科大学第一附属医院肝移植中心江苏南京210029

目的:观察缺血预处理对于大鼠部分肝移植术后肝再生信号通路的影响。方法:采用雄性Lewis大鼠建立50%体积肝移植,将120只大鼠随机分为对照组(C组)和缺血预处理组(IPC组),IPC组大鼠在体内切肝前接受10min肝血流阻断及随后15min的血液复流... 详细信息

目的:观察缺血预处理对于大鼠部分肝移植术后肝再生信号通路的影响。方法:采用雄性Lewis大鼠建立50%体积肝移植,将120只大鼠随机分为对照组(C组)和缺血预处理组(IPC组),IPC组大鼠在体内切肝前接受10min肝血流阻断及随后15min的血液复流。分别在术后2、6、24、48h提取肝组织。观察术后两组生存率,提取血清测定谷丙转氨酶(ALT),ELISA法测肝组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α),白细胞介素(IL-6)水平,免疫组化法测定肝细胞增殖核细胞抗原(PCNA)。Western blot测定肝脏中cyclin D1、CDK4、STAT3、磷酸化STAT3(P-STAT3)水平。结果:术后两组生存率比较无明显差别,术后ALT水平,IPC组在2、6h低于C组。TNF-α术后6hIPC组明显高于C组。IPC组的IL-6水平在术后2、6、24、48h均高于C组。PCNA显示术后IPC组阳性细胞数明显高于C组。cyclin D1蛋白在术后C组表达弱于IPC组。Cdk4蛋白在术后IPC组表达强于C组。STAT3蛋白术后两组表达相似。P-STAT3蛋白术后C组蛋白表达弱于IPC处理组。结论:经过缺血预处理的50%部分体积大鼠肝移植,IL-6、TNF-α诱导的肝再生信号通路增强,提示肝再生能力也增强。

关键词：缺血预处理肝移植肝再生信号通路

单人操作建立大鼠原位肝移植模型的学习曲线分析

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南京医科大学学报（自然科学版） 2007年第9期27卷 924-926页

作者：黄国荣李相成浦立勇姚爱华吕凌王学浩南京医科大学第一附属医院肝脏外科江苏南京210029

目的:分析单人操作大鼠原位肝移植(rat orthotopic liver transplantation,ROLT)模型建立术的学习曲线。方法:将作者学习制作该模型最初的100例资料分为5阶段(各20例),对操作时间,无肝期,手术成功率,长期存活率及并发症率进行分析。结果... 详细信息

目的:分析单人操作大鼠原位肝移植(rat orthotopic liver transplantation,ROLT)模型建立术的学习曲线。方法:将作者学习制作该模型最初的100例资料分为5阶段(各20例),对操作时间,无肝期,手术成功率,长期存活率及并发症率进行分析。结果:Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ阶段操作无肝期较Ⅰ,Ⅱ阶段明显减少(P=0.000),手术成功率从35%稳定上升至100%,长期存活率经历Ⅲ阶段55%～60%的平台期,达到95%;并发症率大大降低,模型稳定。结论:初学者经过耐心反复的训练,可通过学习曲线,熟练掌握ROLT术,成功建立肝移植基础研究需要的各种模型。

关键词：肝移植模型学习曲线大鼠

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大鼠肝移植急性排斥时基因表达谱变化的研究

大鼠肝移植急性排斥时基因表达谱变化的研究

CD4^+CD25^+调节性T细胞回输对大鼠肝移植急性排斥反应的影响

第十二届全国肝癌学术会议

作者：朱亚青浦立勇姚爱华张盛吴斌王学浩江苏省常州市第三人民医院普外科南京医科大学第一附属医院肝脏外科

＜正＞目的探讨同种异体大鼠肝移植急性排斥时基因表达谱的变化。方法建立大鼠肝移植急性排斥反应和同基因模型,术后7天收集肝脏标本,用

关键词：

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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世界华人消化杂志 2006年第3期14卷 261-266页

作者：浦立勇李相成王学浩张峰姚爱华俞悦吕凌李国强南京医科大学第一附属医院肝脏移植中心江苏省南京市210029

目的:探讨回输CD4+CD25+调节性T细胞对大鼠肝移植急性排斥反应的影响．方法:免疫磁珠阴性加阳性分选Lewis大鼠脾脏、外周淋巴结内的CD4+CD25+调节性T细胞,分离后的细胞与丝裂霉素C处理过的DA 大鼠脾细胞混合培养3 d．淋巴细胞增殖实验... 详细信息

目的:探讨回输CD4+CD25+调节性T细胞对大鼠肝移植急性排斥反应的影响．方法:免疫磁珠阴性加阳性分选Lewis大鼠脾脏、外周淋巴结内的CD4+CD25+调节性T细胞,分离后的细胞与丝裂霉素C处理过的DA 大鼠脾细胞混合培养3 d．淋巴细胞增殖实验评价新鲜分离和体外培养后的CD4+CD25+调节性T细胞对CD4+CD25-T细胞增殖的抑制作用．以DA大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,建立4组原位肝移植模型,每组12例,共48例．A 组术后不进行任何干预;B组术后0-6 d FK506 0．2 mg/(kg·d)灌胃;C组、D组术前1 d经阴茎背静脉分别向受体回输新鲜分离、体外培养后的1×106的CD4+CD25+T细胞．术后7 d每组随机处死6只,收集血标本作血清天冬氨酸氨基转移酶(asparate transaminase,AST)、总胆红素(bilirubin,BIL)检测,取肝脏标本作病理学检查,每组各留6只观察生存期．结果:分选后的CD4+CD25+T细胞纯度为 90．2％±1．8％(86％-93％,n=10),淋巴细胞混合培养实验中新鲜分离和体外培养后的 CD4+CD25+T细胞均可抑制CD4+CD25-T细胞的增殖(7 681．7±1 004．9,6 573．3±1 722．7 cpm vs 24 918．7±2 276．3 cpm;P=0．000,P =0．000)．术后7 d,新鲜细胞回输组以及体外培养细胞回输组AST低于对照组(8．1±2．0 μkat/L vs 17．9±3．8 μkat/L,P=0．000;8．4±1．4 μkat/L vs 17．9±3．8 μkat/L,P=0．000),BIL亦低于对照组(45．8±9．0 μmol/L vs 98．4±21．2 μmol/L,P=0．000;44．7±12．0 μmol/L vs 98．4 ±21．2 μmol/L,P=0．000)．四组的Banff评分比较,两组细胞回输组与对照组比较有统计学差异(P<0．05)．两组细胞回输组生存时间均大于对照组(21．7±1．7 d vs 12．8±0．5 d,P=0．0001; 30．3±1．7 vs 12．8±0．5 d,P=0．000 4),体外培养细胞回输组生存时间大于新鲜细胞回输组 (30．3±1．7 d vs 21．7±1．7 d,P=0．0017)．结论:回输新鲜分离/经供体抗原体外激活的受体CD4+CD25+调节性T细胞,可以明显减轻大鼠肝脏移植的急性排斥反应,延长生存期; 其中经供体抗原体外激活的CD4+CD25+调节性T细胞的作用更持久．

关键词：细胞磁分离技术 CD4^+CD25^+调节性T细胞大鼠肝移植急性排斥反应