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均质荧光复合微球技术定量检测狂犬病病毒中和抗体方法的建立

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中国兽医学报 2014年第10期34卷 1603-1609页

作者：朱绍智陈轩罗宝正何媛薄清如徐海聂吴静波沙才华黄新民廖秀云珠海出入境检验检疫局广东珠海519015 华南农业大学广东广州510642 韶关学院广东韶关512005 甘肃出入境检验检疫局

为实现对狂犬病病毒中和抗体的绝对定量检测,建立了检测中和抗体的均值荧光复合技术。用狂犬病毒糖蛋白标记带有荧光物质Eu3+的纳米微球载体,并用其特异性结合已捕获的中和抗体,根据荧光强弱判定抗体效价。通过试验我们获得了最佳反应条... 详细信息

为实现对狂犬病病毒中和抗体的绝对定量检测,建立了检测中和抗体的均值荧光复合技术。用狂犬病毒糖蛋白标记带有荧光物质Eu3+的纳米微球载体,并用其特异性结合已捕获的中和抗体,根据荧光强弱判定抗体效价。通过试验我们获得了最佳反应条件;在此条件下,荧光强度与中和抗体效价具有良好的线性关系,相关系数能达到0.99以上;而且检测灵敏度能达到0.01IU/mL;另外此方法对犬温热病毒和犬细小病毒阳性血清不产生交叉反应,具有良好的特异性;并且与金标准FAVN的符合率达到98%。此方法不仅能够用于狂犬病毒中和抗体的特异性检测,而且能够实现绝对定量检测;在狂犬疫苗免疫效果评价和动物的检验检疫等应用中具有重要意义。

关键词：均质荧光复合微球狂犬病毒糖蛋白中和抗体

基于同源加尾系统的双重实时PCR方法鉴定混合肉样中猪成分比例

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现代食品科技 2019年第2期35卷 264-269页

作者：邵建宏廖秀云罗宝正赵福振沙才华陈轩薄清如中华人民共和国拱北海关广东珠海519001

为了对掺入猪肉成分的比例进行鉴定,本研究拟建立基于同源加尾系统(Homo-tag Assisted Non-dimer system,HANDS)的双重实时PCR检测方法,借助简易数学模型将实时PCR的Ct值(循环阈值)换算成猪肉成分的百分比。根据常见家畜、家禽染色体中... 详细信息

为了对掺入猪肉成分的比例进行鉴定,本研究拟建立基于同源加尾系统(Homo-tag Assisted Non-dimer system,HANDS)的双重实时PCR检测方法,借助简易数学模型将实时PCR的Ct值(循环阈值)换算成猪肉成分的百分比。根据常见家畜、家禽染色体中的管家基因Myostatin序列设计家禽家畜通用引物和探针序列,针对猪染色体beta actin基因设计猪源性成分特异型引物和探针序列,并在所有引物5’端加上同源引物。通过评估以上两套引物和探针的通用性,特异性,优化引物和探针浓度、退火温度,构建同源加尾双重实时PCR检测方法对不同猪源性成分比例的肉样进行检测并换算Ct值得出混合肉样中猪源性成分的比例。所构建的同源加尾双重实时PCR方法两重之间扩增效率相近,通用性引物、探针可以扩增所有家畜家禽成分,特异性引物探针只扩增猪源性成分。通过检测制备的混合肉样显示,该方法换算结果与肉样实际比例接近。

关键词：混合肉样猪肉比例同源加尾系统双重实时PCR

多重实时RT-PCR快速检测新型甲型H1N1流感病毒

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农业生物技术学报 2010年第2期18卷 352-355页

作者：潘朝思罗宝正薄清如莫秋华徐海聂沙才华廖秀云珠海出入境检验检疫局国家外来病检测重点实验室

从GenBank中获取新型甲型H1N1流感病毒(2009年流行株)HA和NA基因序列,通过多重序列比对之后,设计合成H1和N1基因特异性的引物和探针,用来建立新的甲型H1N1亚型流感病毒的多重实时RT-PCR检测方法。合成的两条荧光探针分别标记FAM和CY5荧... 详细信息

从GenBank中获取新型甲型H1N1流感病毒(2009年流行株)HA和NA基因序列,通过多重序列比对之后,设计合成H1和N1基因特异性的引物和探针,用来建立新的甲型H1N1亚型流感病毒的多重实时RT-PCR检测方法。合成的两条荧光探针分别标记FAM和CY5荧光报告基团,荧光淬灭均使用BHQ基团。多重实时RT-PCR实验在ABI7500实时PCR仪上进行,经过40个循环的扩增之后,阳性对照出现标准的S型曲线,并且具有良好的特异性,可以很好地将新的甲型H1N1与传统的甲型H1N1以及H3N2、H5N1、H6N2和H9N2等流感病毒区分。多重实时RT-PCR可以检测到10个拷贝的模板,灵敏度接近检测方法的极限。检测时间短,从加样到反应结束只需要90min。在对243例发热病人临床样品检测过程中发现7例阳性,1351份猪临床样品检测中未发现阳性,该检测结果和采用中国检验检疫科学研究院研制的试剂盒获得的检测结果一致。本研究所建立的快速、准确和高敏感性的多重实时RT-PCR方法非常适用于新型甲型H1N1流感病毒的实验室筛查。

关键词：甲型流感病毒 H1N1亚型多重实时RT-PCR

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狂犬病病毒RT-LAMP检测方法的建立

动物医学进展 2013年第5期34卷 1-5页

作者：何媛罗宝正邵建宏薄清如徐海聂林瑞庆沙才华廖秀云陈步雲华南农业大学兽医学院广东广州510642 珠海出入境检验检疫局广东珠海519015 珠海市香洲区宠物行业协会广东珠海519015

本研究利用逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP),以狂犬病病毒的核蛋白基因保守区段设计LAMP引物,建立了狂犬病病毒的RT-LAMP快速检测方法,并对建立的方法进行了特异性、灵敏度和稳定性试验。结果显示,该方法检测结果可直接用肉眼判... 详细信息

本研究利用逆转录环介导等温核酸扩增技术(RT-LAMP),以狂犬病病毒的核蛋白基因保守区段设计LAMP引物,建立了狂犬病病毒的RT-LAMP快速检测方法,并对建立的方法进行了特异性、灵敏度和稳定性试验。结果显示,该方法检测结果可直接用肉眼判断,重复性好,稳定可靠,可将狂犬病病毒与犬瘟热病毒(CDV)、犬副流感病毒(PIV)、犬腺病毒(CAV)、犬细小病毒(CPV)进行鉴别,对86份犬唾液样品和3种商品化狂犬病疫苗进行检测表明,建立的方法适用于样品中狂犬病病毒的临床检测。

关键词：狂犬病病毒逆转录-环介导等温核酸扩增技术检测

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兽药残留种类及检测方法

中国动物保健 2022年第1期24卷 1-1,3页

作者：林志达黄晶蔡杰陈轩沙才华吴洁姗拱北海关技术中心广东珠海519000

近年来,畜产品质量安全问题的频频发生,引发了社会各界的高度关注,严重威胁消费者健康及社会和谐稳定发展。在此情形下,认真做好畜产品兽药残留检测工作具有重要的现实意义。本文并分析了兽药残留种类,并探讨了兽药残留检测方法。

关键词：兽药残留检测种类方法研究

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广东地区鸽禽Ⅰ型副黏病毒分离株生物学特性研究

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中国家禽 2008年第16期30卷 42-43页

作者：邹永新余双祥刘思伽李剑荣黄爱芳沙才华罗映霞广东科贸职业学院广东广州510430

鸽禽Ⅰ型副黏病毒（Avian Paramyxovirus TypeⅠ，PA／PMV—Ⅰ）感染，因其病原及症状均与鸡新城疫（ND）十分相似，通常又称之为鸽新城疫，或鸽瘟，是鸽的一种急性烈性传染病。近年来我们从广东的深圳、东莞、广州市郊等地区发病鸽群... 详细信息

鸽禽Ⅰ型副黏病毒（Avian Paramyxovirus TypeⅠ，PA／PMV—Ⅰ）感染，因其病原及症状均与鸡新城疫（ND）十分相似，通常又称之为鸽新城疫，或鸽瘟，是鸽的一种急性烈性传染病。近年来我们从广东的深圳、东莞、广州市郊等地区发病鸽群中分离并鉴定到23株禽Ⅰ型副黏病毒，对其中6株病毒进行生物学特性研究。

关键词： Ⅰ型副黏病毒病毒分离株生物学特性鸽新城疫广东地区禽烈性传染病鸡新城疫

多重荧光RT-PCR鉴别诊断新型H1N1流感病毒方法的建立及应用

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多重荧光RT-PCR鉴别诊断新型H1N1流感病毒方法的建立及应用

鸽禽Ⅰ型副粘病毒病复合中药佐剂灭活疫苗的研制

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会

作者：罗宝正薄清如徐海聂沙才华廖秀云珠海出入境检验检疫局国家级外来病检测重点实验室

从GenBank中获取新型H1N1流感病毒(Influenza virus)HA和NA基因序列,进行多序列比对之后,设计用于多重荧光RT-PCR的引物和探针,用来建立新型H1N1亚型流感病毒的多重荧光RT-PCR检测方法。两种荧光探针分别标记FAM和CY5荧光基团,淬灭都使... 详细信息

从GenBank中获取新型H1N1流感病毒(Influenza virus)HA和NA基因序列,进行多序列比对之后,设计用于多重荧光RT-PCR的引物和探针,用来建立新型H1N1亚型流感病毒的多重荧光RT-PCR检测方法。两种荧光探针分别标记FAM和CY5荧光基团,淬灭都使用BHQ基团。多重荧光RT-PCR在ABI7500荧光PCR仪上进行,经过40个循环的扩增之后,阳性对照出现标准的S型曲线,并且具有良好的特异性,可以很好地将新型H1N1与传统型H1N1以及H3N2、H5N1、H6N2和H9N2等A型流感病毒区分。多重荧光RT-PCR可以检测到10个拷贝的模板,灵敏度接近检测方法的极限。检测时间短,从加样到反应结束只需要70min。该方法有潜力用于新型H1N1流感病毒的实验室筛查与鉴别诊断。

关键词：流感病毒甲型H1N1 多重荧光RT-PCR 鉴别诊断

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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云南大学学报（自然科学版） 2004年第S2期26卷 105-110页

作者：邹永新李剑荣刘思伽余双祥黄爱芳沙才华罗映霞广东省家禽科学研究所广东广州510430

鸽禽Ⅰ型副粘病毒(A/PMV-Ⅰ)病是鸽的病毒性传染病,给养鸽业造成了巨大损失.为了更好地预防本病的发生,我们用从现场分离鉴定的23株鸽A/PMV-Ⅰ毒株中,筛选出3株抗原性良好的毒株作为种毒,研制成以蜂胶、黄芪、人参、扶芳藤为主的复合中... 详细信息

鸽禽Ⅰ型副粘病毒(A/PMV-Ⅰ)病是鸽的病毒性传染病,给养鸽业造成了巨大损失.为了更好地预防本病的发生,我们用从现场分离鉴定的23株鸽A/PMV-Ⅰ毒株中,筛选出3株抗原性良好的毒株作为种毒,研制成以蜂胶、黄芪、人参、扶芳藤为主的复合中药佐剂灭活疫苗.经安全试验、最佳免疫剂量测定、效力试验,以及田间应用的结果,表明该疫苗抗原性良好、使用安全和免疫保护效果确实.实验室试验,用本疫苗免疫后60,90,120,150,180d,其保护指数分别为100%,100%,100%,94.4%,88.9%,免疫有效期可达6个月以上;在4～8℃下保存,其有效期最少可达180d.

关键词：鸽禽Ⅰ型副粘病毒复合中药佐剂疫苗

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犀牛源性成分PCR检测方法的建立

野生动物学报 2016年第4期37卷 316-320页

作者：邵建宏赵福振罗宝正薄清如沙才华廖秀云徐海聂珠海出入境检验检疫局国家外来病检测重点实验室珠海519015

为了对犀牛源性成分进行有效鉴定,根据犀科(Rhinocerotidae)动物线粒体DNA(mitochondrial DNA)序列,使用分子生物学软件Oligo 7.0设计了特异性引物,用来建立PCR检测犀牛源性成分的方法。结果显示,建立的PCR方法可以对犀牛阳性样品进行扩... 详细信息

为了对犀牛源性成分进行有效鉴定,根据犀科(Rhinocerotidae)动物线粒体DNA(mitochondrial DNA)序列,使用分子生物学软件Oligo 7.0设计了特异性引物,用来建立PCR检测犀牛源性成分的方法。结果显示,建立的PCR方法可以对犀牛阳性样品进行扩增,凝胶电泳呈现特异性条带。方法特异性好,13份其他物种的样品均为阴性结果。方法灵敏度较高,可检测到100拷贝重组质粒DNA模板。对5份送检样品检测发现2份犀牛样品,与测序结果一致。结果表明,新建立的方法可应用于样品中犀牛源性成分的检测。

关键词：犀牛源性成分 PCR 检测