检索结果-南通市图书馆

新型H7N9亚型禽流感病毒多重荧光RT-PCR快速检测方法的建立

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病毒学报 2014年第1期30卷 1-5页

作者：罗宝正莫秋华李儒曙薄清如徐海聂沙才华廖秀云珠海出入境检验检疫局珠海519015 珠海市动物卫生监督所珠海519001

为研制新型H7N9亚型禽流感病毒快速检测试剂盒,根据GenBank中公布的新型H7N9亚型(2013年)禽流感病毒血凝素抗原(HA)和神经氨酸酶抗原(NA)的基因序列,设计两套特异性的引物和探针,建立基于TaqMan探针的多重荧光RT-PCR快速检测新型H7N9亚... 详细信息

为研制新型H7N9亚型禽流感病毒快速检测试剂盒,根据GenBank中公布的新型H7N9亚型(2013年)禽流感病毒血凝素抗原(HA)和神经氨酸酶抗原(NA)的基因序列,设计两套特异性的引物和探针,建立基于TaqMan探针的多重荧光RT-PCR快速检测新型H7N9亚型禽流感病毒方法。实验结果表明,该方法灵敏度高、特异性好,能够检测到最低浓度为10拷贝/μL数量级的阳性标准品,不但能够将禽流感病毒H7亚型与H1、H3、H5、H6和H9亚型区分开,而且可将新型N9亚型禽流感病毒与原有的N9亚型区分开。采用该方法对珠海市2 700份样品的检测结果与预期结果一致,证实该方法具有较好的推广应用前景。

关键词：新型H7N9 多重荧光RT-PCR 快速检测

施马伦贝格病毒RT-LAMP检测方法的建立

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中国兽医科学 2015年第8期45卷 826-831页

作者：陈轩杨素黄海超王岚沙才华廖秀云徐海聂罗宝正薄清如珠海出入境检验检疫局广东珠海519015

根据GenBank中施马伦贝格病毒S基因的保守区序列,设计1组对应目的片段6个区域的4条特异性引物(包括1对内引物和1对外引物)进行核酸扩增,建立RT-LAMP反应体系并进行反应条件优化,确定最佳内外引物浓度分别为1.2、0.15μmol/L,最佳反应条... 详细信息

根据GenBank中施马伦贝格病毒S基因的保守区序列,设计1组对应目的片段6个区域的4条特异性引物(包括1对内引物和1对外引物)进行核酸扩增,建立RT-LAMP反应体系并进行反应条件优化,确定最佳内外引物浓度分别为1.2、0.15μmol/L,最佳反应条件为61℃保温60min。特异性和敏感性试验结果表明,本研究建立的施马伦贝格病毒RT-LAMP能检测到133 copies/μL的施马伦贝格病毒克隆质粒。结果表明,该RT-LAMP具有特异性强、灵敏度高和快速简便等优点,是在进出境口岸、养殖场或基层实验室等场所开展快速检测的良好方法。

关键词：施马伦贝格病毒 RT-LAMP 检测

施马伦贝格病毒套式RT-PCR检测方法的建立

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中国兽医学报 2016年第6期36卷 923-927,932页

作者：杨素黄海超陈轩许彩芸沙才华薄清如罗宝正廖秀云珠海出入境检验检疫局广东珠海519015

根据GenBank公布的施马伦贝格病毒S基因序列,设计特异性引物,构建施马伦贝格病毒S基因重组克隆质粒作为阳性对照,经各反应条件的优化以及特异性、敏感性和重复性试验,建立了施马伦贝格病毒套式RT-PCR检测方法。结果表明,本研究建立的套... 详细信息

根据GenBank公布的施马伦贝格病毒S基因序列,设计特异性引物,构建施马伦贝格病毒S基因重组克隆质粒作为阳性对照,经各反应条件的优化以及特异性、敏感性和重复性试验,建立了施马伦贝格病毒套式RT-PCR检测方法。结果表明,本研究建立的套式RT-PCR方法可特异性的检测施马伦贝格病毒,且与BTV、EHDV、AKV、BVDV、IBRV等其他病毒的核酸不发生交叉反应。每个反应可检测到相当于6.65×102 copies/μL施马伦贝格病毒重组克隆质粒。与传统的病毒分离及血清学方法相比较,不但耗时短(仅需5h),而且费用低廉。本研究建立的套式RT-PCR方法具有特异、敏感、重复性好、快速、费用低廉等优点,是施马伦贝格病毒快速初筛的良好方法。

关键词：施马伦贝格病毒 S基因套式RT-PCR

Taqman探针荧光PCR检测鲨鱼源性成分

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食品与生物技术学报 2015年第10期34卷 1083-1088页

作者：陈轩廖秀云陶旻罗宝正薄清如沙才华黄海超徐海聂杨素珠海出入境检验检疫局国家外来病检测重点实验室广东珠海519015

针对鲨鱼产品掺杂造假增多而缺乏有效鉴定技术的情况,作者根据Gen Bank中鲨鱼基因的线粒体DNA(mt DNA)序列,使用分子生物学软件Primer Express 2.0设计了一套特异性引物和探针,用来建立Taqman探针荧光PCR检测鲨鱼源性成分的方法。结果表... 详细信息

针对鲨鱼产品掺杂造假增多而缺乏有效鉴定技术的情况,作者根据Gen Bank中鲨鱼基因的线粒体DNA(mt DNA)序列,使用分子生物学软件Primer Express 2.0设计了一套特异性引物和探针,用来建立Taqman探针荧光PCR检测鲨鱼源性成分的方法。结果表明,对13份已鉴定为鲨鱼鱼翅的样品进行检测,全部出现特异性扩增曲线,阴性对照没有荧光增长。方法特异性强,对市场购买的12份鲨鱼源性样品及9份其他鱼类样品进行检测,12份鲨鱼样品均出现荧光扩增曲线,而非鲨鱼样品均未出现荧光增长;方法灵敏度较高,可检测到的最低质粒拷贝数量级为10拷贝/μL;方法快速准确,操作简便,重复性好,稳定可靠,可应用于市场上鱼翅等常见鲨鱼源性产品的真假鉴定。

关键词：鲨鱼源性成分 Taqman探针荧光PCR 检测

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应用ELISA检测珠海市供港澳猪猪瘟抗体

畜禽业 2008年第1期19卷 71-72页

作者：沙才华廖秀云罗宝正珠海出入境检验检疫局广东珠海519015

猪瘟在我省流行比较严重，曾造成较大的经济损失。从1988年后全省采取每年春秋两防的免疫措施。使我省的猪瘟疫情得到了全而的控制。但是猪瘟病例时有发生。为了调查我市供港澳猪猪瘟的免疫情况，应用ELISA方法检测猪瘟免疫抗体。酶联... 详细信息

猪瘟在我省流行比较严重，曾造成较大的经济损失。从1988年后全省采取每年春秋两防的免疫措施。使我省的猪瘟疫情得到了全而的控制。但是猪瘟病例时有发生。为了调查我市供港澳猪猪瘟的免疫情况，应用ELISA方法检测猪瘟免疫抗体。酶联免疫吸附试验（ELISA）具有操作简便、快速、灵敏度高、特异性强等特点，国内许多学者、专家通过大量研究探讨，认为ELISA法检测猪瘟抗体与中和试验检测结果基本一致，两者没有明显的差异，较之血清中和试验法具有更大的实用价值。现随机从9个注册猪场共采集90份血样进行ELISA检测．检测情况如下。

关键词： ELISA检测猪瘟抗体应用珠海市酶联免疫吸附试验 ELISA方法 ELISA法中和试验

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鸽禽I型副粘病毒病流行特点及其防制对策

中国家禽 2004年第14期26卷 26-27页

作者：邹永新刘思伽李剑荣黄爱芳沙才华广东省家禽科学研究所广东广州510430

鸽禽Ⅰ型副粘病毒病(PA/PMV-I)一直是各类鸽病中发生频率最高、危害性最大的一种传染病,自从20世纪80年代初,在深圳及珠海拱北动检所先后从进口种鸽中发现本病以来,目前已普遍存在于我国各养鸽地区,不但对养鸽业的发展构成严重损害,而... 详细信息

鸽禽Ⅰ型副粘病毒病(PA/PMV-I)一直是各类鸽病中发生频率最高、危害性最大的一种传染病,自从20世纪80年代初,在深圳及珠海拱北动检所先后从进口种鸽中发现本病以来,目前已普遍存在于我国各养鸽地区,不但对养鸽业的发展构成严重损害,而且对鸡等家禽也是一种严重的潜在威胁.

关键词：鸽禽Ⅰ型副粘病毒病病原发病率流行病学防治

A型H1N1及H3N2亚型流感病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立

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中国兽医科学 2010年第3期40卷 245-251页

作者：杨素陈博文沙才华廖明秦爱建徐海聂廖秀云罗宝正薄清如陈伟生扬州大学兽医学院江苏扬州225009 珠海出入境检验检疫局广东珠海519015 华南农业大学兽医学院广东广州510642

根据A型H1N1亚型流感病毒2009年北美变异株和H3N2亚型流行株的基因序列,设计了3套特异性引物、TaqMan探针,分别用不同的荧光基团标记,以构建的A型流感病毒及H1N1和H3N2亚型流感病毒基因重组质粒作为阳性对照,经反应条件优化,特异性、敏... 详细信息

根据A型H1N1亚型流感病毒2009年北美变异株和H3N2亚型流行株的基因序列,设计了3套特异性引物、TaqMan探针,分别用不同的荧光基团标记,以构建的A型流感病毒及H1N1和H3N2亚型流感病毒基因重组质粒作为阳性对照,经反应条件优化,特异性、敏感性和重复性试验,筛选出3套不同的反应体系及同一个反应参数,建立了可同时检测A型流感病毒、H1N1和H3N2亚型流感病毒的实时荧光RT-PCR方法。结果表明,该方法可特异地检测H1N1(人源、猪源)、H3N2(猪源),禽流感病毒H5、H9等A型流感病毒,且与新城疫病毒、减蛋综合征病毒等其他病毒不发生交叉反应,具有特异、敏感、重复性好、快速、费用低廉等优点,试验耗时仅3h。表明,建立的方法,一次试验即可完成A型流感病毒的初筛和H1N1、H3N2亚型流感病毒的初步确认定型。

关键词： A型流感病毒 H1N1亚型 H3N2亚型实时荧光RT-PCR

荧光RT-PCR鉴别诊断O型与Asia Ⅰ型口蹄疫病毒方法的建立

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农业生物技术学报 2009年第1期17卷 24-28页

作者：薄清如罗宝正杨素徐海聂沙才华罗吉新珠海出入境检验检疫局国家外来病检测重点实验室三统万福(青岛)食品有限公司

从GenBank中获取多个口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)基因组序列,进行多序列比对之后,设计对应于口蹄疫病毒的3D、VP3和3C区域的引物和探针,分别建立了FMDV群特异性实时荧光RT-PCR、O型特异性实时荧光RT-PCR和AsiaⅠ型... 详细信息

从GenBank中获取多个口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)基因组序列,进行多序列比对之后,设计对应于口蹄疫病毒的3D、VP3和3C区域的引物和探针,分别建立了FMDV群特异性实时荧光RT-PCR、O型特异性实时荧光RT-PCR和AsiaⅠ型特异性实时荧光RT-PCR检测方法。三种FMDV实时荧光RT-PCR在Lightcycler荧光PCR仪上扩增均出现标准的S型曲线,并且具有良好的特异性,可以很好地将FMDV与传染性牛鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitisvirus)、猪传染性胃肠炎病毒(Swine transmissible gastroenteritis virus)、赤羽病病毒(Akabane virus)和猪呼吸系统冠状病毒(Porcine respiratory corona virus)区分。FMDV群特异性实时荧光RT-PCR可以成功扩增O型(O1和O2毒株)和AsiaⅠ型(AsiaⅠ1和AsiaⅠ2毒株)FMDV;O型特异性实时荧光RT-PCR可成功扩增O型(O1和O2毒株)FMDV,AsiaⅠ型(AsiaⅠ1和AsiaⅠ2毒株)FMDV为阴性;AsiaⅠ型特异性实时荧光RT-PCR可成功扩增AsiaⅠ型(AsiaⅠ1和AsiaⅠ2毒株)FMDV,O型(O1和O2毒株)FMDV为阴性。FMDV群特异性实时荧光RT-PCR、O型特异性实时荧光RT-PCR和AsiaⅠ型特异性实时荧光RT-PCR都可以检测到10个拷贝的模板,灵敏度接近检测方法的极限。检测时间短,从加样到反应结束只需要70 min。该方法有潜力用于FMDV的实验室筛查与鉴别诊断。

关键词：口蹄疫病毒荧光RT-PCR 鉴别诊断

应用三重PCR方法鉴别肉制品中猪和牛源性成分

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畜禽业 2011年第12期22卷 52-53页

作者：沙才华杨素廖秀云薄清如广东省珠海出入境检验检疫局广东珠海519000

近年来,江苏、山西等地出现的猪肉合成假牛肉事件引起人们高度关注,这些假牛肉不但严重危害群众的身体健康,也极易造成由于宗教信仰引发的矛盾和纠纷（伊斯兰教禁食猪肉）。因此肉制品的成分鉴别已成为食品检测部门和消费者所共同关心... 详细信息

近年来,江苏、山西等地出现的猪肉合成假牛肉事件引起人们高度关注,这些假牛肉不但严重危害群众的身体健康,也极易造成由于宗教信仰引发的矛盾和纠纷（伊斯兰教禁食猪肉）。因此肉制品的成分鉴别已成为食品检测部门和消费者所共同关心的问题,为调查珠海市场上是否存在猪肉合成的牛肉制品,应用通用的真核、猪线粒体、牛线粒体DNA保守序列建立一套准确、快速的三重PCR方法鉴别肉制品中猪和牛源性成分,

关键词：牛源性成分牛肉制品 PCR方法中猪鉴别应用线粒体DNA 身体健康