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宏基因组技术诊断亲内皮疱疹病毒感染致濒危亚洲象死亡病例

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畜牧兽医学报 2024年第6期55卷 2569-2577页

作者：沈青春仉伟刘青刘一朵钱佳豪张博源周师众张宜宸幸倩如丁家波周向梅张广智李秋辰李伟范学政中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 济南市公园发展服务中心济南250099 中国农业大学动物医学院北京100193

本研究旨在借助宏基因组测序分析技术快速发现引起濒危亚洲象死亡的可能病原,再结合常规诊断技术,对大象病因进行分析和确诊,为大象相关疫病的快速诊断和预防提供参考。对死亡大象进行尸检,取心、肝、脾、肺、肾、淋巴结、肌肉、胃、十... 详细信息

本研究旨在借助宏基因组测序分析技术快速发现引起濒危亚洲象死亡的可能病原,再结合常规诊断技术,对大象病因进行分析和确诊,为大象相关疫病的快速诊断和预防提供参考。对死亡大象进行尸检,取心、肝、脾、肺、肾、淋巴结、肌肉、胃、十二指肠、空肠、结肠、盲肠、胰腺等器官制备切片,进行HE染色和病理分析;取腹股沟淋巴结进行宏基因组测序分析;使用特异性PCR方法对特征基因进行扩增和测序,经序列比对绘制进化树,分析其与其他毒株的进化关系。结果显示,死亡大象的剖检和病例切片结果符合象亲内皮疱疹病毒感染的特征,宏基因组分析结果显示,大象的腹股沟淋巴结中含有大量的象β疱疹病毒1型(即亲内皮疱疹病毒)。该大象死亡的原因可能是象亲内皮疱疹病毒感染所致,宏基因组技术对大象亲内皮疱疹病毒感染以及其他濒危动物病例的快速诊断具有良好的应用前景。

关键词：亚洲象亲内皮疱疹病毒宏基因组分析

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9株猪瘟分离毒株致病特性的研究

9株猪瘟分离毒株致病特性的研究

第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会

作者：王琴宁宜宝赵耘王在时张广川范学政宋立秦玉明沈青春丘惠深余兴龙吕宗吉徐兴然涂长春中国兽医药品监察所国家猪瘟参考实验室军事医学科学院军事兽医研究所

为了研究我国目前流行的部分猪瘟分离株在致病性方面的差异以及在本动物体内的传代特性,本研究采用9株田间表现高、中、低致病特点的猪瘟野毒分离株第3代细胞毒作为种毒对实验猪进行肌肉接种,用上一代传代猪发病后的血毒作为下一代接毒... 详细信息

为了研究我国目前流行的部分猪瘟分离株在致病性方面的差异以及在本动物体内的传代特性,本研究采用9株田间表现高、中、低致病特点的猪瘟野毒分离株第3代细胞毒作为种毒对实验猪进行肌肉接种,用上一代传代猪发病后的血毒作为下一代接毒用种毒接种实验猪1-2头,或上一代毒引起猪发病后,同圈放入1-2头实验猪进行同居感染,如此进行连续传代。GDGZ1/95、BJCY1/96和JL1/94传至8代;FJFQ1/99传至7代;HeBHH1/95、HeNBY1/96、BJTX3/96、GXBH1/98和HeNXH2/98传代至3代。结果上述分离株传代到3-5代过程中均表现出致病力增强的趋势,从3-5代传代到8(7)代的过程中致病力逐代增强并趋于稳定,均超过了标准石门强毒株的发病特点。所有试验猪均出现较典型的猪瘟临床症状,剖解后均表现出不同程度的病理变化,死后或剖解后的各种脏器经HCFA检查均为强阳性,这种现象说明,在田间表现不同致病性的CSFV分离株,在本动物连续传代后致病力均表现出强致病力。再对其中7株分离株传代血毒部分代次E2基因主要区域进行序列分析,结果仅GDGZ1/95株从F1-F8代,其中F6代有2个核苷酸的差异,其余毒株的不同代次没有一个碱基发生变异,说明猪瘟病毒基因型表现出相对的稳定件。

关键词：猪瘟病毒致病特性

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猪瘟病毒低毒力毒株FJFQ株的分离鉴定

动物医学进展 2005年第3期26卷 67-71页

作者：赵耘宁宜宝王在时王琴宋立张广川沈青春秦玉明中国兽医药品监察所农业部猪瘟参考实验室北京100081

从福建某猪场分离到 1 株病毒,其在PK 15细胞上的毒价为 106.5 TCID50/mL,该病毒能被猪瘟病毒高免血清所中和(效价为1∶8)。通过 RT -PCR 扩增出猪瘟病毒约250 bp的E2蛋白主要抗原编码区序列,其与几株已发表毒株序列的核苷酸及氨基酸同... 详细信息

从福建某猪场分离到 1 株病毒,其在PK 15细胞上的毒价为 106.5 TCID50/mL,该病毒能被猪瘟病毒高免血清所中和(效价为1∶8)。通过 RT -PCR 扩增出猪瘟病毒约250 bp的E2蛋白主要抗原编码区序列,其与几株已发表毒株序列的核苷酸及氨基酸同源性分别为79.9%~87.9%,77.7%~86.6%,与Alfort 株同属于基因二群。经本动物传3代均不表现明显的临床症状。用猪瘟兔化弱毒疫苗免疫后以此分离毒作强攻进行免疫保护相关实验,结果免疫组猪在攻毒前及攻毒后扁桃体 HCFA检测均为阴性,对照组猪扁桃体HCFA于攻毒后1周开始出现阳性结果,且一直持续到试验结束。用分离株免疫本动物后再攻石门毒, 2 头试验猪中 1 头死亡,1头出现临床症状。初步说明,所分离的病毒为猪瘟病毒(命名为CSFV- FJFQ株),可能是一株低毒力毒株,且其免疫原性不好。

关键词：猪瘟病毒毒株毒力分离鉴定 CSFV 毒价抗原编码区扁桃体免疫后对照组

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PCR方法测定猪肺炎支原体培养物菌数

中国畜牧兽医文摘 2006年第5期22卷 30-30页

作者：沈青春覃青松王琴

猪肺炎支原体(Mhp)是一种引起猪支原体肺炎(又称喘气病)的病原微生物,广泛流行于世界各地,在畜牧业发达的美国、澳大利亚等国也普遍存在,也是对我国养猪业造成严重经济损失的主要疾病之一。其主要危害是引起猪的生长受阻、饲料转化率大... 详细信息

猪肺炎支原体(Mhp)是一种引起猪支原体肺炎(又称喘气病)的病原微生物,广泛流行于世界各地,在畜牧业发达的美国、澳大利亚等国也普遍存在,也是对我国养猪业造成严重经济损失的主要疾病之一。其主要危害是引起猪的生长受阻、饲料转化率大幅下降,继发引起其他疾病的发生并加重发病症状,严重影响养猪的经济效益。其感染率高。

关键词：猪肺炎支原体培养物猪支原体肺炎 PCR 菌数

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9株猪瘟分离毒株致病特性的研究

9株猪瘟分离毒株致病特性的研究

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会

为了研究我国目前流行的部分猪瘟分离株在致病性方面的差异以及在本动物体内的传代特性,本研究采用9株田间表现高、中、低致病特点的猪瘟野毒分离株第3代细胞毒作为种毒对实验猪进行肌肉接种,用上一代传代猪发病后的血毒作为下一代接毒用种毒接种实验猪1～2头,或上一代毒引起猪发病后,同圈放入1～2头实验猪进行同居感染,如此进行连续传代。GDGZ1/95、BJCY1/96和JL1/94传至8代;FJFQ1/99传至7代;HeBHH1/95、HeNBY1/96、BJTX3/96、GXBH1/98和HeNXH2/98传代至3代。结果上述分离株传代到3—5代过程中均表现出致病力增强的趋势,从3—5代传代到8(7)代的过程中致病力逐代增强并趋于稳定,均超过了标准石门强毒株的发病特点。所有试验猪均出现较典型的猪瘟临床症状,剖解后均表现出不同程度的病理变化,死后或剖解后的各种脏器经HCFA检查均为强阳性,这种现象说明,在田间表现不同致病性的CSFV分离株,在本动物连续传代后致病力均表现出强致病力。再对其中7株分离株传代血毒部分代次E2基因主要区域进行序列分析,结果仅GDGZ1/95株从F1—F8代,其中F6代有2个核苷酸的差异,其余毒株的不同代次没有一个碱基发生变异,说明猪瘟病毒基因型表现出相对的稳定性。

关键词：猪瘟病毒致病特性

重组大肠杆菌DE-pET-P46的培养基优化和高密度发酵

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中国兽药杂志 2014年第8期48卷 10-17页

作者：沈青春王芳张纯萍高和义宋立李聪研魏晶晶宋萧婷苏鹏宁宜宝北京中海生物科技有限公司北京100081 中国兽医药品监察所北京100081

为提高重组蛋白的生产效率,利用响应面试验设计技术,对表达猪肺炎支原体P46蛋白的重组大肠杆菌DE-pET-P46的培养基进行了优化,确定了培养基各营养成分及其最佳配比。在相同培养条件下,优化培养基比LB培养基的菌体浓度高出一倍。在生物... 详细信息

为提高重组蛋白的生产效率,利用响应面试验设计技术,对表达猪肺炎支原体P46蛋白的重组大肠杆菌DE-pET-P46的培养基进行了优化,确定了培养基各营养成分及其最佳配比。在相同培养条件下,优化培养基比LB培养基的菌体浓度高出一倍。在生物反应器中利用优化培养基发酵培养该重组大肠杆菌,培养物的湿菌重达39.5 g/L。SDS-PAGE电泳结果显示,高密度发酵对重组大肠杆菌DE-pET-P46的rP46的表达和占细胞总蛋白比例均没有明显的改变。

关键词：猪肺炎支原体 P46蛋白高密度发酵响应面

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我国部分猪瘟流行毒株病原学特性研究

我国部分猪瘟流行毒株病原学特性研究

中国畜牧兽医学会2004学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会

作者：王琴王在时宁宜宝丘惠深赵耘张广川范学政沈青春秦玉明涂长春余兴龙吕宗杰徐欣然李红卫中国兽医药品监察所解放军军需大学

目前猪瘟遍布全世界,根据OIE制定的《国际动物卫生法典》(2003年版),猪瘟被列为A类16种法定传染病之一,全世界现有50个国家和地区存在猪瘟。在我国按年饲养量接近10亿头计算,发病死亡按5-10%计,猪瘟每年给我国造成的经济损失近100亿,对... 详细信息

目前猪瘟遍布全世界,根据OIE制定的《国际动物卫生法典》(2003年版),猪瘟被列为A类16种法定传染病之一,全世界现有50个国家和地区存在猪瘟。在我国按年饲养量接近10亿头计算,发病死亡按5-10%计,猪瘟每年给我国造成的经济损失近100亿,对我国养猪业的危害极其严重。通过实验证实,猪瘟兔化弱毒疫苗疫苗(HCLV)虽然效果优良,但由于各种原因,该病仍在我国不间断流行。为了调查我国猪瘟的流行病学数据,获得系统和完整猪瘟病毒流行株的遗传变异情况、基因多态性分布及其与病毒致病性和免疫原性的关系的研究资料,为消灭猪瘟提供技术指导。1995年来我们从全国26个省市自治区收集了并鉴定了258份猪瘟病料,开展了流行株病原学特性差异研究。通过对不同流行株的发病地区、单抗反应性、致病力、基因分型和持续感染动物模型的建立等抗原性差异方面的研究,初步建立了我国猪瘟部分流行株的数据库。阐明了我国猪瘟的流行特点具有遗传多样性现状,揭示了我国猪瘟流行的复杂态势,表明了猪群的随意流动是传播与扩散该病的重要原因;还表明我国猪瘟流行株在病原致病力及抗原特性方面具有复杂性和多样性,尽管如此免疫保护试验证明目前使用的HCLV完全能对各种毒力、各种抗原性的不同流行流行株提供有效的保护。另外通过毒力测定证明了我国猪瘟流行流行株有高、中、低3种毒力之分,采用低毒力流行株进行了猪瘟病毒胎盘垂直传播(持续感染)及水平传播的研究,在国内外首次人工复制并建立了猪瘟持续性感染动物模型。证实了在田间外表健康的持续性感染和不完全免疫猪是我国发生猪瘟的重要传染来源。为阐明我国猪瘟流行株病原学特性的多样性及差异性,尤其为免疫失败的原因提供了科学依据,本研究对我国猪瘟防制具有重要的指导意义。

关键词：猪瘟猪瘟病毒流行病学病原学特性持续感染

我国南方猪高热病的研究(Ⅱ)——猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的分离、鉴定和致病性测定

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中国兽药杂志 2007年第1期41卷 14-18页

作者：宁宜宝郑杰张纯萍赵启祖刘业兵宋立丘惠深邱伯根邱立新王琴沈青春中国兽医药品监察所北京100081 湖南省兽医总站湖南长沙410007

从我国南方某猪场高热病死猪的组织中分离出能引起Mare145细胞病变的病毒，经过血清中和试验、RT-PCR测定，确定分离物中存在美洲型猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）。将细胞病毒液感染13头55—105日龄健康猪，另有3头健康猪用于同... 详细信息

从我国南方某猪场高热病死猪的组织中分离出能引起Mare145细胞病变的病毒，经过血清中和试验、RT-PCR测定，确定分离物中存在美洲型猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）。将细胞病毒液感染13头55—105日龄健康猪，另有3头健康猪用于同居感染。随意挑取13头中7头再用大肠杆菌培养物加强感染，感染后每天测温，观察临床症状，记录死亡情况和病理变化。结果表明：PRRSV单独感染猪6／6发病，5／6死亡；大肠杆菌与PRRSV混合感染猪7／7发病，5／7死亡；同居感染的3头全部发病，1头死亡。所有感染猪于感染后2—4d内均出现体温升高。两周后体温下降至正常，直到死亡前体温不再升高。死亡多集中在感染后的34—50d的2周时间内。将圈舍温度升至29℃对感染猪发病无加强作用。死亡猪的病理变化主要表现为严重的出血性、间质性肺炎，肢体远端皮表出血。结果表明，虽然PRRSV感染能够引起猪产生高热和高的发病死亡率，但从发病到死亡时间及某些病理变化上看，和南方猪场的发病死亡猪还存在一定的差异，这可能与猪场的一些激发因子或其他病原混合感染有关，从组织和细胞分离物的电子显微镜照片也证明了这一点。

关键词：猪高热病猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒感染分离鉴定

猪瘟流行病学信息系统(CSF info)的建立及应用

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猪瘟流行病学信息系统(CSF info)的建立及应用

中国畜牧兽医学会2006学术年会

作者：王琴涂长春黄保续范学政郭焕成盖华武高光江禹李金花徐和敏徐璐兰广义温磊王在时赵耘赵启祖宁宜宝沈青春宋立中国兽医药品监察所解放军军事兽医研究所中国动物卫生与流行病学中心

为了加强对CSF流行病学信息的统一管理,随时掌握全球CSF数据,分析传播来源,进行疫情预测预报。将数据库、GIS、生物信息学技术与CSF流行病学数据相结合,经过需求分析、设计、编码实现测试、测试及维护等五个阶段,建立了第一个CSF流行病... 详细信息

为了加强对CSF流行病学信息的统一管理,随时掌握全球CSF数据,分析传播来源,进行疫情预测预报。将数据库、GIS、生物信息学技术与CSF流行病学数据相结合,经过需求分析、设计、编码实现测试、测试及维护等五个阶段,建立了第一个CSF流行病学信息系统(CSFinfo),是《国家动物卫生信息系统》的组成部分。CSFinfo的建立对我国CSF的流行病学监测提供了必要的技术基础和支持。随时掌握流行毒株的遗传变异,监控新毒株或新变异株的流行;提高对CSFV流行毒株总体分布、疫情发生发展趋势的科学了解和掌握,提供科学的数据统计分析手段;CSFinfo系统通过windows文件关联功能建立了与DNAStar6．0序列分析软件的关联,通过空间数据应用与基因序列分析应用的结合,实现了对流行毒株遗传距离进行实时分析的综合应用。为政府CSF防控提供可靠的疫情资料具有十分重要的意义。

关键词： CSF CSFV 流行病学 GIS 数据库