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异色瓢虫低温胁迫下过冷却点变化及抗寒基因表达分析

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中国农业科学 2016年第4期49卷 677-685页

作者：邬梦静徐青叶刘雅施兴荣沈祺达杨萌萌王世贵唐斌杭州师范大学生命与环境科学学院

【目的】异色瓢虫(Harmonia axyridis)是一种重要的捕食性天敌昆虫资源,在东北地区以成虫越冬,具有非常强的抗寒能力。以过冷却点和抗寒基因的m RNA水平变化作为瓢虫抗寒性能指标,探索低温胁迫提高瓢虫抗寒的作用。【方法】将野外采集... 详细信息

【目的】异色瓢虫(Harmonia axyridis)是一种重要的捕食性天敌昆虫资源,在东北地区以成虫越冬,具有非常强的抗寒能力。以过冷却点和抗寒基因的m RNA水平变化作为瓢虫抗寒性能指标,探索低温胁迫提高瓢虫抗寒的作用。【方法】将野外采集到的异色瓢虫通过0、5和10℃3种不同温度,进行2、12和24 h 3种时间的低温胁迫处理,测定过冷却点的变化,得到最佳低温胁迫条件。以室内饲养的异色瓢虫作为对照组,分别在5℃低温条件下储存10、20和30 d,测定过冷却点变化和存活情况。根据转录组和数字表达谱(digital gene expression,DGE)数据分析确定6个重要抗寒基因,选择18S作为内参基因,采用实时荧光定量PCR检测异色瓢虫6个重要抗寒基因在低温胁迫和保存时m RNA水平上的相对表达量,分析其在抗寒过程中所起的作用。【结果】5℃低温胁迫12 h能够显著降低异色瓢虫的过冷却点。在低温保存过程中,低温胁迫组异色瓢虫过冷却点和存活率低于未进行低温胁迫组。实时荧光定量PCR检测发现HSP21.4、trehalase、transketolase、ATP-grasp fold domain protein和dopa decarboxylase在低温胁迫过程中表达量上调,而erythrocyte binding protein的表达量下调。且在低温保存过程中HSP21.4一直处于高表达状态,显著高于未进行低温胁迫组,其余5个基因在低温保存过程中处于低表达状态,显著低于未进行低温胁迫组。【结论】低温胁迫能够降低异色瓢虫的过冷却点,但不一定能够提高夏季野外耐高温异色瓢虫的存活能力。HSP21.4和erythrocyte binding protein分别通过高表达和低表达来提高异色瓢虫的抗寒能力,而trehalase、transketolase、ATP-grasp fold domain protein和dopadecarboxylase通过在低温胁迫过程中高表达,保护异色瓢虫抵御寒冷环境。

关键词：异色瓢虫低温胁迫抗寒基因定量表达低温储存

取食不同水稻品种对褐飞虱和稻株内海藻糖及海藻糖酶的影响

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植物保护学报 2016年第3期43卷 398-404页

作者：杨萌萌谢国强沈祺达刘雅俞姗姗唐斌杭州师范大学生命与环境科学学院杭州310036

为明确不同水稻品种与褐飞虱的相互作用关系,以水稻品种TN1(感虫品种)、中浙优1号(生产主栽品种)和IR56(抗虫品种)为研究对象,分别采用蒽酮法和葡萄糖分析试剂测定了褐飞虱取食不同水稻品种后对褐飞虱和稻株体内的海藻糖含量及海藻糖酶... 详细信息

为明确不同水稻品种与褐飞虱的相互作用关系,以水稻品种TN1(感虫品种)、中浙优1号(生产主栽品种)和IR56(抗虫品种)为研究对象,分别采用蒽酮法和葡萄糖分析试剂测定了褐飞虱取食不同水稻品种后对褐飞虱和稻株体内的海藻糖含量及海藻糖酶活性的影响。结果显示,被褐飞虱取食后,IR56和中浙优1号的海藻糖酶活性分别由无虫状态下的3.56、4.34 nmol·g^(-1)·min^(-1)显著升高至7.53、6.05 nmol·g^(-1)·min^(-1),海藻糖含量分别由12.10、5.14 nmol/μg降至3.14、2.43 nmol/μg,而TN1的海藻糖酶活性由1.46 nmol/μg显著升高至3.05 nmol/μg,海藻糖含量无明显变化。取食TN1、IR56和中浙优1号后,褐飞虱体内的海藻糖含量分别为0.53、0.28和0.20nmol/μg,取食后二者的褐飞虱体内海藻糖含量与TN1组相比较均显著降低;且褐飞虱体内海藻糖酶活性以及3个海藻糖酶基因在mRNA水平均显著低于TN1组。表明海藻糖及海藻糖酶在褐飞虱与抗虫水稻的相互作用中可能发挥着重要的调控作用。

关键词：褐飞虱抗虫水稻海藻糖海藻糖酶

褐飞虱一个新的海藻糖合成酶基因的特性、发育表达及RNAi效果分析

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中国农业科学 2019年第3期52卷 466-477页

作者：唐斌沈祺达曾伯平肖仲久邱玲玉潘碧莹李昆张道伟遵义师范学院生物与农业科技学院杭州师范大学生命与环境科学学院

【背景】昆虫海藻糖合成酶基因是昆虫海藻糖合成的主要基因,大多数昆虫中只拥有一个海藻糖-6-磷酸合成酶(trehalose-6-phosphate synthase,TPS)基因,部分昆虫存在一个海藻糖-6-磷酸酯酶(trehalose-6-phosphate phosphatase,TPP)基因。... 详细信息

【背景】昆虫海藻糖合成酶基因是昆虫海藻糖合成的主要基因,大多数昆虫中只拥有一个海藻糖-6-磷酸合成酶(trehalose-6-phosphate synthase,TPS)基因,部分昆虫存在一个海藻糖-6-磷酸酯酶(trehalose-6-phosphate phosphatase,TPP)基因。前期研究发现褐飞虱(Nilaparvata lugens)中拥有两个TPS,对其功能研究发现TPS不仅能够调控海藻糖代谢,还可介导海藻糖酶调控几丁质合成与降解途径,控制昆虫的蜕皮过程。【目的】通过对褐飞虱转录组测序分析获得了一个新的TPS,检测该基因在褐飞虱不同发育阶段的表达情况,探究该基因的功能与前期发现的两个TPS的区别。【方法】对获得的新TPS基因序列采用克隆技术获得全长c DNA序列,经验证正确后,对其蛋白的一级、二级、三级结构及与其他昆虫的TPS进行比对分析,最后采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术测定3个不同TPS在褐飞虱不同发育阶段的表达,并采用RNA干扰(RNAi)技术抑制TPS3的表达。【结果】在前期研究的基础上,克隆出一个新的TPS,并命名为TPS3。TPS3开放阅读框长度为2 352 bp,编码783个氨基酸,预测蛋白分子量为88.9 kD,等电点为5.47,具有亲水性结构。生物信息学分析表明,褐飞虱3个TPS蛋白具有较高的同源性,都具有TPS和TPP两个保守结构域及其他特征序列,并且α-螺旋、β-折叠和无规则卷曲所占的比例较为接近。褐飞虱不同发育阶段3条TPS的相对表达量不同,TPS1的相对表达量从4龄0 h开始逐渐上升,至成虫阶段达到最高,TPS2的相对表达量从4龄末期开始明显上升且在整个5龄阶段都有较高的表达,TPS3的相对表达量在5龄末期和成虫初期较高。单独干扰褐飞虱TPS3 48 h后被干扰基因的相对表达量下降,ds TPS3能有效抑制TPS3的表达。【结论】在褐飞虱中发现一个新的TPS(TPS3),其与褐飞虱中已经报道的TPS1和TPS2具有较高的同源性。不同发育阶段表达结果表明,3个TPS在发育过程中行使的功能不同。RNAi能够有效抑制TPS3的表达并导致褐飞虱蜕皮障碍和翅发育畸形。

关键词：褐飞虱海藻糖-6-磷酸合成酶序列分析蛋白结构实时荧光定量PCR

异色瓢虫HSP67B2基因的克隆及诱导表达分析

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环境昆虫学报 2014年第6期36卷 919-927页

作者：邬梦静沈祺达施佐堃王世贵唐斌杭州师范大学动物适应与进化重点实验室杭州310036

小分子热激蛋白是一种重要的分子伴侣,可以在环境胁迫下帮助蛋白质折叠和转运。本研究在转录组获得异色瓢虫Harmonia axyridis HSP67B2基因部分序列的基础上,通过RACE技术克隆得到了HSP67B2基因的cDNA全长序列(基因登录号:KJ155728),全... 详细信息

小分子热激蛋白是一种重要的分子伴侣,可以在环境胁迫下帮助蛋白质折叠和转运。本研究在转录组获得异色瓢虫Harmonia axyridis HSP67B2基因部分序列的基础上,通过RACE技术克隆得到了HSP67B2基因的cDNA全长序列(基因登录号:KJ155728),全长626 bp,其中编码140个氨基酸,3'非翻译区为81 bp,5'非翻译区为122 bp,软件分析预测显示该基因编码蛋白的分子量为15.97 kD,理论等电点为6.61。采用荧光定量PCR技术对异色瓢虫HSP67B2基因在不同发育阶段、低温诱导条件和饥饿处理下的表达进行了研究,结果表明:HSP67B2基因在幼虫期的表达量最高;在低温诱导和饥饿处理下,HSP67B2基因出现上调表达并且表达效率显著提高,表明HSP67B2基因可以通过调控小分子热激蛋白的合成使异色瓢虫适应环境变化。

关键词：小分子热激蛋白异色瓢虫荧光定量PCR 低温诱导饥饿处理

异色瓢虫多巴脱羧酶基因序列及低温诱导表达分析

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环境昆虫学报 2016年第2期38卷 271-279页

作者：汪慧娟施佐堃徐风娇沈祺达徐燕霞王世贵唐斌杭州师范大学动物适应与进化杭州市重点实验室杭州310036

多巴脱羧酶(dopa decarboxylase,DDC)是把多巴降解成多巴胺的重要酶类,在昆虫行为和发育中具有重要作用。本研究在转录组获得异色瓢虫Harmonia axyridis DDC基因序列的基础上,从ORF两端设计特异性引物进行扩增并测序验证,获得了DDC基因... 详细信息

多巴脱羧酶(dopa decarboxylase,DDC)是把多巴降解成多巴胺的重要酶类,在昆虫行为和发育中具有重要作用。本研究在转录组获得异色瓢虫Harmonia axyridis DDC基因序列的基础上,从ORF两端设计特异性引物进行扩增并测序验证,获得了DDC基因的c DNA的ORF全长序列,其包含1431 bp,编码476个氨基酸,软件分析预测显示该基因编码蛋白的分子量为53.88 k Da,理论等电点为5.80。本实验分为升温、降温、低温储存以及不同发育阶段(包括预蛹,1-3 d蛹,1-3 d 4龄幼虫以及羽化1-3 d成虫)4个处理组,采用荧光定量PCR技术研究异色瓢虫不同处理组DDC基因的表达水平。结果表明:DDC基因在蛹期第1天的表达量最高,在升温诱导条件下表达无差异,降温诱导下表达量上升;黄色雌成虫低温储存条件下基因表达量先显著上升后显著下降,黑色雌成虫表达量无差异,表明DDC基因可以在低温胁迫下高表达促使异色瓢虫适应环境变化。

关键词：多巴脱羧酶异色瓢虫实时荧光定量PCR 低温诱导表达分析

童话故事阅读与低年级学生阅读习惯养成的关系探索

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中文科技期刊数据库（文摘版）教育 2024年第5期 0077-0080页

作者：沈祺常熟市练塘中心小学江苏苏州215551

对于小学低年级学生来说,童话故事阅读能激发学生的阅读兴趣,还能培养其想象力与创造力,更是促进学生阅读习惯养成的绝佳助力,语文教师需要借助童话故事吸引学生的注意力,让学生可以探究故事的内容,挖掘童话故事中的潜在信息,这样不仅... 详细信息

对于小学低年级学生来说,童话故事阅读能激发学生的阅读兴趣,还能培养其想象力与创造力,更是促进学生阅读习惯养成的绝佳助力,语文教师需要借助童话故事吸引学生的注意力,让学生可以探究故事的内容,挖掘童话故事中的潜在信息,这样不仅能有效提高学生的阅读能力,也能帮助学生养成良好的阅读习惯,促进学生学习成长。本文分析了阅读习惯对于学生学习成长的作用,以及小学低年级童话故事阅读与阅读习惯养成的关系,并提出等如何利用童话故事培养阅读习惯的方法,旨在帮助学生养成良好阅读习惯,推动语文阅读教学的创新与发展。

关键词：童话故事阅读低年级学生阅读习惯养成关系作用

褐飞虱在不同水稻品系上繁殖能力及相关解毒酶系基因表达变化分析

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杭州师范大学学报（自然科学版） 2016年第6期15卷 595-599页

作者：俞姗姗刘雅杨萌萌沈祺达谢国强王世贵唐斌杭州师范大学生命与环境科学学院浙江杭州310036

采用水稻敏感品系TN1和抗性品系中浙优、IR56饲养褐飞虱,研究褐飞虱产卵量等繁殖情况,测定解毒酶系中酯酶、细胞色素P450和谷胱甘肽转移酶(GST)及卵黄原蛋白(Vg)等基因在mRNA上的表达变化.结果显示褐飞虱在抗性水稻上产卵量减少,Vg2的... 详细信息

采用水稻敏感品系TN1和抗性品系中浙优、IR56饲养褐飞虱,研究褐飞虱产卵量等繁殖情况,测定解毒酶系中酯酶、细胞色素P450和谷胱甘肽转移酶(GST)及卵黄原蛋白(Vg)等基因在mRNA上的表达变化.结果显示褐飞虱在抗性水稻上产卵量减少,Vg2的表达量极显著下降,表明水稻抗性对褐飞虱的产卵量有抑制作用且Vg2调控产卵.酯酶和P450中的部分基因均在取食抗性水稻的褐飞虱体内表达量较高,存在极显著差异.

关键词：褐飞虱抗性解毒酶系生化反应

2000—2030年多级流域尺度下重庆市林地景观格局碳储量变化

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水土保持通报 2024年第3期44卷 356-366页

作者：朱诗柔牟凤云黄淇沈祺林重庆交通大学智慧城市学院重庆402260

[目的]分析多级流域林地变化对碳储量变化的影响,预测未来多级流域碳储量变化趋势,为从流域角度的地区林地可持续发展以及碳中和政策实施提供一定的科学依据。[方法]以重庆市为研究区,运用PLUS模型、景观格局指数、生物量扩展因子法、... 详细信息

[目的]分析多级流域林地变化对碳储量变化的影响,预测未来多级流域碳储量变化趋势,为从流域角度的地区林地可持续发展以及碳中和政策实施提供一定的科学依据。[方法]以重庆市为研究区,运用PLUS模型、景观格局指数、生物量扩展因子法、灰色关联度等方法,分析2000—2030年多级流域尺度下重庆市林地与碳储量的时空动态变化,探究了自然情景发展下林地格局变化与碳储量的关联度。[结果](1)2000—2020年,林地面积增加3404.55 km~2,主要来自耕地转换;一级流域林地景观格局总体趋向于聚集化与规则化,破碎程度相对减少;二级流域内“区与群”的林地格局变化历史规律与未来趋势方面存在差异;(2)前20 a,林地碳储量呈现增加—减少趋势,总碳储量增加,其中一级流域洞庭湖水系碳储量增加最多,而二级流域碳储量增量高值区域由北向南移动;(3)预测2030年总碳储量增加,且与不规则指数具有较强关联度。[结论]不同流域尺度下,不同林地景观格局指数与碳储量的相关性存在差异,未来可以从流域角度出发制定有效措施,提高碳汇效益实现碳中和目标。

关键词： PLUS模型生物量扩展因子法碳储量多级流域景观格局动态变化

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普通高中美育跨学科项目化学习的实践探究以南洋模范中学“美从何处寻”主题活动为例

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上海教育 2024年第10期 71-72页

作者：范依琳沈祺上海市南洋模范中学

“双新”对学生综合素养的要求进一步提高,如何落实新课标、实施新课程已经成为现今学校教育所要突破的热点问题。学校教育需改变传统的教育思维与方式,更注重学生结合个体经验、综合运用各类知识,并将两者有机融合,形成学生独特的综合...

“双新”对学生综合素养的要求进一步提高,如何落实新课标、实施新课程已经成为现今学校教育所要突破的热点问题。学校教育需改变传统的教育思维与方式,更注重学生结合个体经验、综合运用各类知识,并将两者有机融合,形成学生独特的综合思维体系,以育人为本、实效为重,推进教育优化升级。同时,习近平总书记在2018年全国教育大会上强调,要全面加强和改进学校美育,坚持以美育人、以文化人,提高学生审美和人文素养。

关键词：