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马尔尼菲篮状菌通过精氨酸代谢影响巨噬细胞极化和杀伤的机制

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马尔尼菲篮状菌通过精氨酸代谢影响巨噬细胞极化和杀伤的机制

作者：沈林霞广西医科大学

学位级别：硕士

目的:探究马尔尼菲篮状菌（Talaromyces marneffei,TM）通过精氨酸代谢影响巨噬细胞极化和杀伤的机制。方法:（1）构建静息巨噬细胞（Mφ）与TM分生孢子体外共培养模型、LPS刺激的巨噬细胞（Mφ+LPS）与TM分生孢子体外共培养模型,在共培... 详细信息

目的:探究马尔尼菲篮状菌（Talaromyces marneffei,TM）通过精氨酸代谢影响巨噬细胞极化和杀伤的机制。方法:（1）构建静息巨噬细胞（Mφ）与TM分生孢子体外共培养模型、LPS刺激的巨噬细胞（Mφ+LPS）与TM分生孢子体外共培养模型,在共培养24h、48h、72h时,通过荧光定量PCR检测巨噬细胞iNOS、Arg1、TNF-α、IL-10、CD301、IL-1β的mRNA相对表达量;通过蛋白印迹法检测巨噬细胞iNOS、Arg1、CD86、IL-4R的蛋白表达;通过生化法检测巨噬细胞的精氨酸酶活性;通过微板法检测共培养上清液中NO的含量;通过免疫荧光检测巨噬细胞CD86、CD206的荧光表达强度。（2）精氨酸酶特异性抑制剂N-羟基-正-L 精氨酸（Nω-hydroxy-nor-L-arginine,nor-NOHA）预处理 LPS刺激的巨噬细胞2h,与TM分生孢子共培养24h,通过生化法检测巨噬细胞的精氨酸酶活性;通过微板法检测共培养上清液中NO的含量;通过蛋白印迹法检测巨噬细胞iNOS、Arg1的蛋白表达;通过吞噬指数检测巨噬细胞吞噬TM分生孢子的能力;通过平板菌落计数检测巨噬细胞杀灭TM的能力。结果:（1）①荧光定量PCR显示:Mφ/Mφ+LPS与TM共培养组的iNOS、Arg1、TNF-α、IL-10、CD301、IL-1β mRNA 相对表达量高于 Mφ/Mφ+LPS组,P＜0.05,并且随着共培养时间的延长呈现不同的变化趋势;②蛋白印迹法显示:Mφ/Mφ+LPS与TM共培养组的Arg1、CD86的蛋白表达低于Mφ/Mφ+LPS 组,iNOS、IL-4R 的蛋白表达高于 Mφ/Mφ+LPS 组,P＜0.05;③生化法显示:Mφ/Mφ+LPS与TM共培养组的精氨酸酶活性高于Mφ/Mφ+LPS组,共培养时间越长、活性越高,P＜0.05;④微板法显示:Mφ/Mφ+LPS与TM共培养组的NO含量低于Mφ/Mφ+LPS组,P＜0.05;⑤免疫荧光显示:Mφ/Mφ+LPS与TM共培养组的CD206荧光表达强度高于Mφ/Mφ+LPS组,CD86的荧光表达强度与Mφ/Mφ+LPS组无明显差异。（2）①生化法显示:添加20 μ M nor-NOHA预处理后共培养组的精氨酸酶活性低于未添加组,P＜0.05;②添加20μ M nor-NOHA预处理后共培养组的NO含量高于未添加组,P＜0.01,;③蛋白印迹法显示:添加20μ M nor-NOHA预处理后共培养组的Arg1的蛋白表达低于未添加组,iNOS的蛋白表达高于未添加组,P＜0.01;吞噬指数显示:添加20μ M nor-NOHA预处理后巨噬细胞吞噬TM分生孢子的数量多于未添加组,P＜0.05;⑤平板菌落计数法显示:在共培养体系中添加20 μ M nor-NOHA预处理的巨噬细胞杀伤TM的能力强于未添加组;单独培养TM时,添加20μ M nor-NOHA预处理的TM的数量少于未添加组;共培养体系中TM的数量多于单独培养的TM的数量。结论:（1）TM通过升高巨噬细胞的精氨酸酶活性,减少NO的合成并诱导巨噬细胞向M2型极化,以此逃避巨噬细胞的氧化杀伤,促使自身在宿主体内的持续感染。（2）精氨酸酶抑制剂nor-NOHA可以降低TM诱导的高精氨酸酶活性,增加巨噬细胞的NO产量,增强巨噬细胞杀伤TM的能力。（3）精氨酸酶抑制剂nor-NOHA对TM的生长有抑制作用。

关键词：马尔尼菲篮状菌巨噬细胞RAW264.7 精氨酸酶 iNOS 精氨酸

充血性心力衰竭患者甲状腺激素的异常变化及其临床意义

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充血性心力衰竭患者甲状腺激素的异常变化及其临床意义

作者：沈林霞浙江大学

学位级别：硕士

目的:探讨心力衰竭患者血清甲状腺激素水平的变化规律及其与心功能、预后的关系。方法:采用放射免疚法检测了30例CHF心功能Ⅱ～Ⅳ级患者及30例正常对照者血浆T3、T4及TSH的浓度,比较不同心功能水平、不同病种间的差异。结果:心衰组和... 详细信息

目的:探讨心力衰竭患者血清甲状腺激素水平的变化规律及其与心功能、预后的关系。方法:采用放射免疚法检测了30例CHF心功能Ⅱ～Ⅳ级患者及30例正常对照者血浆T3、T4及TSH的浓度,比较不同心功能水平、不同病种间的差异。结果:心衰组和对照组相比T3、FT3降低(P<0.05),其中Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级心功能组均低于对照组(P<0.05),级间比较也有有显著差(P<0.05),T3越低,心功能愈差,预后越差。T4降低仅见于部分心功能Ⅳ级患者;TSH无明显改变。不同病种之间甲状腺激素的变化无统计学差异。结论:CHF患者存在甲状腺激素代谢异常,以低T3综合征为主;FT3降低与心衰程度呈正相关,T3可作为病情程度及短期预后的判断指标;甲状腺激素的变化,程度与CHF的原发病无关。

关键词：充血性心力衰竭甲状腺激素正常甲状腺病态综合征

N末端脑钠肽前体对脓毒症休克患者左心室舒张功能障碍的预测价值

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中华急诊医学杂志 2018年第2期27卷 164-167页

作者：沈林霞郑亚安田兆兴北京大学第三医院急诊科北京100191

目的探讨血清N末端脑钠肽前体（N-terminal pro brain natriuretic peptide,NT-proBNP）对脓毒症休克患者发生左心室舒张功能障碍的预测价值。方法回顾性分析北京大学第三医院急诊科入院24h内出现脓毒症休克的患者96例，根据是否出现左... 详细信息

目的探讨血清N末端脑钠肽前体（N-terminal pro brain natriuretic peptide,NT-proBNP）对脓毒症休克患者发生左心室舒张功能障碍的预测价值。方法回顾性分析北京大学第三医院急诊科入院24h内出现脓毒症休克的患者96例，根据是否出现左心舒张功能障碍（left ventricular diastolic dysfunction,LVDD）,分为LVDD组（51例）和非LVDD（45例1组，记录患者一般临床资料以及入院24h内急性生理与慢性健康评分（APACHEII评分）、NT-proBNP、肌钙蛋白I（troponin I,TNI）、血肌酐、降钙素原、D-二聚体及乳酸值，比较两组间的临床资料；用多因素Logistic回归法分析脓毒症休克并发左心室舒张功能障碍的独立危险因素，绘制受试者工作特征曲线（ROC曲线）评价NT-proBNP的预测价值。结果与非LVDD组比较，LVDD组NT-proBNP[IgNT-proBNP（3．66±0．38）与（3．03±0．59），P〈0．01]、TNI[1gTNI（-1．45±0．86）与（-2．36±0．82），P〈0．01]和肌酐[（186．12±124．24）与（101．16±57。01），P=0．001]水平升高，差异均有统计学意义；NT-proBNP、TNI、肌酐与二尖瓣口舒张早期血流速度峰值与二尖瓣环舒张早期运动速度之比成正相关（P〈0．05）；多因素logistic回归分析显示，NT-proBNP[优势比（OR）=8．731，95％可信区间（95％a）1。541～49．466，P=0．0141是脓毒症休克患者发生左心室舒张功能障碍的独立危险因素；ROC曲线显示，NT-proBNP值为1725pg／uL时预测脓毒性休克致左心舒张功能障碍发生的曲线下面积为O．813，敏感度为88．6％，特异度为62．1％。结论NT-proBNP对脓毒症休克患者并发左心室舒张功能障碍有较好的预测价值。

关键词：脓毒症脓毒症休克左心室舒张功能障碍 N末端脑钠肽前体肌钙蛋白I 肌酐二尖瓣口舒张早期血流速度峰值二尖瓣环舒张早期运动速度

超声心动图对左西孟旦治疗脓毒症左心室舒张功能障碍的临床疗效评估

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中国超声医学杂志 2018年第11期34卷 1000-1003页

作者：田兆兴沈林霞北京大学第三医院急诊科

目的探讨超声心动图对左西孟旦治疗脓毒症左心室舒张功能障碍的临床疗效。方法回顾性分析脓毒症左心室舒张功能障碍的患者69例,根据是否应用左西孟旦注射液治疗分组,比较组间超声心动图参数e′、E/e′、TRV的差异。结果与治疗前比较,治... 详细信息

目的探讨超声心动图对左西孟旦治疗脓毒症左心室舒张功能障碍的临床疗效。方法回顾性分析脓毒症左心室舒张功能障碍的患者69例,根据是否应用左西孟旦注射液治疗分组,比较组间超声心动图参数e′、E/e′、TRV的差异。结果与治疗前比较,治疗后左西孟旦组e′峰增加、E/e′与TRV显著降低(P<0.05);治疗后两组比较,左西孟旦组e′峰升高,E/e′、TRV减低(均P<0.05)。结论左西孟旦可以改善脓毒症左心室舒张功能障碍,超声心动图对左西孟旦临床疗效的评价有重要作用。

关键词：左西孟旦脓毒症左心室舒张功能障碍三尖瓣反流速率二尖瓣口舒张早期血流峰速度或二尖瓣瓣环舒张早期速度

Dectin-1慢病毒过表达载体的构建与鉴定

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中国皮肤性病学杂志 2019年第5期33卷 507-512页

作者：沈林霞徐红艳刘栋华广西医科大学第一附属医院皮肤性病科广西艾滋病防治研究重点实验室广西南宁530021

目的通过构建Dectin-1慢病毒过表达载体,感染巨噬细胞RAW264.7,建立Dectin-1过表达的巨噬细胞模型。方法根据小鼠Dectin-1基因序列设计引物,经PCR扩增目的基因后克隆至载体pLenti6.3-IRES2-EGFP/V5 DEST(MCS),获得重组质粒pLenti6.3-dectin-1-IRES-EGF。经和包装质粒Mix共同转染293T细胞,收获慢病毒,利用293T细胞大量扩增慢病毒并进行慢病毒的滴度测定,根据MOI值感染巨噬细胞RAW264.7,经荧光显微镜和荧光定量PCR鉴定感染慢病毒组和感染空病毒组中Dectin-1基因的表达。结果 PCR和测序结果证明已成功构建pLenti6.3-dectin-1-IRES-EGFP,成功包装慢病毒,计算慢病毒滴度为3.12×10~9 Tu/mL,成功感染巨噬细胞RAW264.7,荧光显微镜下可见绿色荧光,RT-PCR检测到感染重组慢病毒组Dectin-1表达量是感染空病毒组的1 275倍(P<0.01)。结论成功构建Dectin-1基因过表达的巨噬细胞模型,为进一步研究Dectin-1基因在巨噬细胞对抗真菌感染中的作用打下基础。

关键词：慢病毒 Dectin-1 真菌

米力农注射液治疗左心疾病相关性肺动脉高压的临床研究

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中国临床药理学杂志 2018年第3期34卷 228-230页

作者：沈林霞闫崴田兆兴北京大学第三医院急诊科北京大学第三医院呼吸科

目的观察米力农注射液治疗左心疾病相关性肺动脉高压(PH-LHD)的临床疗效。方法将50例心力衰竭合并肺动脉高压的患者随机分为对照组25例和试验组25例。对照组予以吸氧、利尿、扩血管等常规治疗;试验组在对照组治疗的基础上,加用米力农,以... 详细信息

目的观察米力农注射液治疗左心疾病相关性肺动脉高压(PH-LHD)的临床疗效。方法将50例心力衰竭合并肺动脉高压的患者随机分为对照组25例和试验组25例。对照组予以吸氧、利尿、扩血管等常规治疗;试验组在对照组治疗的基础上,加用米力农,以0.5μg·kg-1·min-1的速度持续静脉泵入7 d。比较2组患者的三尖瓣反流速率(TRV)和肺动脉收缩压(PASP)的变化情况。结果治疗后,试验组和对照组的TRV分别为(2.40±0.80)和(3.05±0.61)m·s-1,PASP分别为(31.96±10.73)和(46.46±14.50)mmHg,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论米力农注射液可以降低左心疾病导致的肺动脉高压。

关键词：米力农注射液左心疾病相关性肺动脉高压安全性

脓毒症并发肺动脉高压临床特征及危险因素分析

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中华急诊医学杂志 2018年第4期27卷 384-388页

作者：沈林霞郑亚安田兆兴闫崴北京大学第三医院急诊科北京100191 北京大学第三医院呼吸科北京100191

目的分析脓毒症并发肺动脉高压（PH）的临床特征及危险因素。方法回顾性分析北京大学第三医院急诊科人院24h内出现脓毒症患者136例，根据是否出现PH，分为PH组和非PH组，比较两组一般情况、常规实验室检查结果及超声心动检测指标，分析... 详细信息

目的分析脓毒症并发肺动脉高压（PH）的临床特征及危险因素。方法回顾性分析北京大学第三医院急诊科人院24h内出现脓毒症患者136例，根据是否出现PH，分为PH组和非PH组，比较两组一般情况、常规实验室检查结果及超声心动检测指标，分析脓毒症并发PH患者的临床特征。用多因素Logistic回归法分析脓毒症并发PH的独立危险因素，绘制受试者工作特征曲线（ROC曲线）评价左房内径的预测价值。结果136例患者中32例并发PH，发病率为23．5％。两组间年龄、性别、心率、平均动脉压、APACHE-Ⅱ评分及SOFA评分等基线资料以及血红蛋白、血小板计数、红细胞比容、白蛋白、血肌酐、肌钙蛋白Ⅰ、降钙素原、D-二聚体、酸碱度和乳酸比较差异均无统计学意义（P〉0．05）；与非PH组比较，PH组氧合指数减低[（291．90±51．62）与（326．40±88．16），P=0．017]，NT-proBNP[1gNT-proBNP（3．67±0．41）与（3．33±0．59），P=0．003]水平升高，超声心动图检测E值[（86．12±30．43）与（67．73±21．49），P=0．008]、E／A值[（1．09±0．46）与（0．83±0．29），P=0．014]和左房内径增大[（36．49±5．97）与（31．32±4．69），P=0．001]，两组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；多因素Logistic回归分析显示，左房内径（OR=1．198，P=0．0101是脓毒症并发PH的独立危险因素；ROC曲线显示，左房内径为31mm时预测脓毒症并发PH的曲线下面积为0．723，敏感度为82．6％，特异度为49．0％。结论左房内径是脓毒症并发PH的独立危险因素。

关键词：脓毒症肺动脉高压三尖瓣反流速率左房内径 N末端脑钠肽前体氧合指数二尖瓣口舒张早期血流峰速度二尖瓣口舒张晚期血流峰速度

基于微信平台的微课教学在急诊专科培训中的应用研究

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中华医学教育探索杂志 2017年第4期16卷 411-414页

作者：沈林霞马青变北京大学第三医院急诊科 100191

本研究分析了急诊专科培训面临的问题,阐明了基于微信网络平台的微课教学特点,提出将微课引入急诊专科培训是教学发展的必然趋势.结合急诊专科培训的实际案例,详细介绍了微课教学结构和实施方案;以微信公众号为教学平台,根据培训人员的... 详细信息

本研究分析了急诊专科培训面临的问题,阐明了基于微信网络平台的微课教学特点,提出将微课引入急诊专科培训是教学发展的必然趋势.结合急诊专科培训的实际案例,详细介绍了微课教学结构和实施方案;以微信公众号为教学平台,根据培训人员的差异设置课程,设立互动交流区域,兼顾了基础理论和拓展学习,实现了教学的可重复性、个体化、互动性和便捷性.

关键词：微课微信公众平台急诊培训

航空发动机中的流固耦合动力学模型:建模与分析

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中国科学:数学 2025年第03期 753-778页

作者：王术沈林江松北京工业大学数学统计学与力学学院黄淮学院数学与统计学院北京应用物理与计算数学研究所

本文综述航空发动机中的流固耦合动力学模型及其建模方法和理论分析结果.首先,基于振动力学中的旋转薄壁梁板壳叶片振动的非线性动力学模型、发动机叶片的实际几何结构以及在高压绕流场中的高速旋转等实际应用特征,基于Hamilton原理与... 详细信息

本文综述航空发动机中的流固耦合动力学模型及其建模方法和理论分析结果.首先,基于振动力学中的旋转薄壁梁板壳叶片振动的非线性动力学模型、发动机叶片的实际几何结构以及在高压绕流场中的高速旋转等实际应用特征,基于Hamilton原理与热力学第二定律,推导并重构一些航空发动机旋转叶片振动动力学非线性流固耦合偏微分方程模型.然后,给出具有移动界面的一类非线性不可压流固耦合模型的一些理论分析结果.

关键词：航空发动机旋转叶片振动非线性流固耦合动力学模型移动界面