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三角酵母D-氨基酸氧化酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达

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微生物学报 2004年第3期44卷 336-339页

作者：罗晖童忆舟李强于慧敏沈忠耀清华大学化工系北京100084

从三角酵母中提取总RNA ,反转录后进行PCR扩增得到D 氨基酸氧化酶 (D AminoAcidOxidase ,DAAO)基因 ,经测序可知 ,与文献中三角酵母的DAAO基因序列的同源性在 99%以上。将DAAO基因用NcoⅠ和BamHⅠ双酶切后 ,与相同酶切的大肠杆菌表达载... 详细信息

从三角酵母中提取总RNA ,反转录后进行PCR扩增得到D 氨基酸氧化酶 (D AminoAcidOxidase ,DAAO)基因 ,经测序可知 ,与文献中三角酵母的DAAO基因序列的同源性在 99%以上。将DAAO基因用NcoⅠ和BamHⅠ双酶切后 ,与相同酶切的大肠杆菌表达载体pET 2 8a连接 ,转化大肠杆菌TOP 1 0F′,并筛选得到重组质粒pET DAAO ,转化BL2 1 (DE3)感受态细胞 ,得到重组大肠杆菌BL2 1 (DE3) pET DAAO。对重组大肠杆菌中的D 氨基酸氧化酶进行了诱导表达 ,考察了诱导温度、菌浓度、诱导剂IPTG用量以及溶氧等因素对酶活的影响。结果表明 ,在 2 8℃、菌浓度 (OD6 0 0 ) 1 0、IPTG浓度 1mmol L时 ,DAAO酶活最高达 2 3 3U mL。研究进一步显示 ,用廉价无毒的乳糖可以替代IPTG进行诱导 ,当乳糖浓度为 2mmol L ,DAAO酶活可达 2 2 7U mL。经过补料分批培养和乳糖诱导 ,DAAO酶活可以达到 1 75U mL。

关键词： D-氨基酸氧化酶三角酵母大肠杆菌乳糖

最优化方法及其应用(Ⅷ) 第八讲不等式约束条件下的最优化方法

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石油炼制与化工 1980年第10期 51-60页

作者：沈忠耀清华大学

前几讲介绍了无约束及等式约束条件下的最优化方法。在实际问题中还有一类不等式约束,本讲介绍此情况下的最优化方法。 [例8—1]某车间原有油罐八个,其位置的座标如下:

关键词：可行方向法单纯形法可行域一维搜索内点法外点法线性搜索目标值目标函数值复合形法不等式约束运筹学方法最优化方法

利用透明颤菌血红蛋白基因在谷氨酸棒杆菌中的表达提高谷氨酸和谷氨酰胺的产量

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北京理工大学学报 2005年第2期25卷 180-184页

作者：孙智杰梁楠李润东沈忠耀陈国强北京理工大学生命科学与技术学院北京100081 清华大学生物科学与技术系北京100084 清华大学化工系北京100084

为了降低谷氨酰胺 (glutamine,Gln)生产过程中所需要的高溶氧水平对设备的要求 ,在谷氨酸棒杆菌 *** ATCC14 0 6 7中表达增强摄氧的透明颤菌血红蛋白基因 (Vitreoscilla hemoglobin gene,vgb) ,以此提高细胞的摄氧能力及能量的供给水平 ... 详细信息

为了降低谷氨酰胺 (glutamine,Gln)生产过程中所需要的高溶氧水平对设备的要求 ,在谷氨酸棒杆菌 *** ATCC14 0 6 7中表达增强摄氧的透明颤菌血红蛋白基因 (Vitreoscilla hemoglobin gene,vgb) ,以此提高细胞的摄氧能力及能量的供给水平 .对得到的重组菌和野生菌进行了发酵实验 .在溶氧只有 5 %的条件下 ,重组菌比野生菌细胞干重提高了 1.2倍 ,单位细胞谷氨酸的生产能力提高了 6 .5倍 ,单位细胞谷氨酰胺的生产能力提高了 1.4倍 .对比结果显示 ,含有 vgb基因的重组菌比野生菌在细胞生长。

关键词：透明颤菌血红蛋白基因谷氨酸棒杆菌谷氨酸谷氨酰胺发酵

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超临界微乳过程

现代化工 2000年第1期20卷 51-54页

作者：刘军沈忠耀王涛崔洪友清华大学化学工程系北京100084

超临界流体是指处于临界温度和临界压力之上的流体.它具有类似于气体的低粘度和类似于液体的高密度,有较好的流动、传质、传热和溶解性能.超临界流体对状态参数的改变十分敏感,温度和压力较小的变化就会使流体的性质发生较大的改变.适... 详细信息

超临界流体是指处于临界温度和临界压力之上的流体.它具有类似于气体的低粘度和类似于液体的高密度,有较好的流动、传质、传热和溶解性能.超临界流体对状态参数的改变十分敏感,温度和压力较小的变化就会使流体的性质发生较大的改变.适当地应用超临界流体技术可以有效地减少传质、传热阻力,控制物质溶解度,方便、快速地实现反应和分离过程.

关键词：二氧化碳超临界流体微乳过程萃取分离

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最优化方法及其应用(Ⅵ)

石油炼制与化工 1980年第8期 54-59页

作者：沈忠耀清华大学

第六讲无约束多变量函数的最优化方法(下) 上一讲介绍的多种最优化方法都是利用目标函数的梯度来确定搜索方向的。而在工程实际中,特别在石油及化工过程中,由于过程比较复杂,往往连梯度更复杂,甚至很难求得,这时可用本讲将介绍的利用目... 详细信息

第六讲无约束多变量函数的最优化方法(下) 上一讲介绍的多种最优化方法都是利用目标函数的梯度来确定搜索方向的。而在工程实际中,特别在石油及化工过程中,由于过程比较复杂,往往连梯度更复杂,甚至很难求得,这时可用本讲将介绍的利用目标函数值的直接搜索方法。

关键词：单纯形法二维空间二度空间函数值迭代过程一维搜索线性搜索最优化方法运筹学方法坐标向量二次函数目标函数函数变化

一种新兴的高效废物处理技术──超临界水氧化法

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化工进展 1997年第3期16卷 39-44页

作者：向波涛王涛杨基础沈忠耀清华大学化工系北京100084

超临界水氧化（SCWO）是指，在超临界水中溶解的氧气与有机废物发生反应生成CO_2、H_2O和N_2等无毒物质。SCWO作为一种新兴环保技术受到广泛重视。本文全面介绍了超临界水及其溶液性质和超临界水化学反应的特点；论述了SCWO工程技术的... 详细信息

超临界水氧化（SCWO）是指，在超临界水中溶解的氧气与有机废物发生反应生成CO_2、H_2O和N_2等无毒物质。SCWO作为一种新兴环保技术受到广泛重视。本文全面介绍了超临界水及其溶液性质和超临界水化学反应的特点；论述了SCWO工程技术的研究进展及现存问题；讨论了用SCWO法处理有机废水废物的发展趋势和前景。

关键词：超临界水氧化有机废物废物处理

溶媒萃取α-氧代-L-古龙酸的初步工艺研究

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中国医药工业杂志 1992年第6期23卷 247-250,246页

作者：钱卫国沈金玉高春满沈忠耀清华大学化学工程系

为从发酵液中提取α-氧代-L-古龙酸(KGA),筛出较为合适的萃取剂、稀释剂、助萃剂和反萃剂。研究了 DOA 对 KGA 的萃取性能,以及 pH、无机酸和相比对萃取性能的影响。并对三级逆流萃取过程进行了串级模拟。实验结果表明,以溶剂萃取法从... 详细信息

为从发酵液中提取α-氧代-L-古龙酸(KGA),筛出较为合适的萃取剂、稀释剂、助萃剂和反萃剂。研究了 DOA 对 KGA 的萃取性能,以及 pH、无机酸和相比对萃取性能的影响。并对三级逆流萃取过程进行了串级模拟。实验结果表明,以溶剂萃取法从发酵液中提取 KGA 是可行的。

关键词： α-氧代 L-古龙酸发酵液溶剂萃取

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最优化方法及其应用(Ⅰ)

石油炼制与化工 1980年第2期 40-47+58页

作者：沈忠耀清华大学

第一讲基础知识§1 引言人们在在从事各项任务时,总是设法采取各种措施,以获得“最优的”结果。因此,“最优化”并不是什么新鲜的思想。问题是如何找到这个“最优”?这就是最优化方法所要探索的问题。所谓“最优化方法”,就是把一个要... 详细信息

第一讲基础知识§1 引言人们在在从事各项任务时,总是设法采取各种措施,以获得“最优的”结果。因此,“最优化”并不是什么新鲜的思想。问题是如何找到这个“最优”?这就是最优化方法所要探索的问题。所谓“最优化方法”,就是把一个要求最优化的问题,表示成数学形式,

关键词：矩阵正定性数学分析目标函数值目标值凸函数最优化方法运筹学方法

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有效增强重组腈代谢酶系表达活性的策略

现代化工 2003年第9期23卷 23-26,28页

作者：史悦孙旭东于慧敏罗晖沈忠耀清华大学化工系北京100084

讨论并提出了有效增强重组腈代谢酶系表达活性的多种策略。根据所选用的载体和宿主的不同表达特性,同时克隆目的基因上、下游的正向调控序列可直接增强酶表达水平;强化翻译后的修饰,可有效提高活性;除了常用的大肠杆菌克隆表达体系外,... 详细信息

讨论并提出了有效增强重组腈代谢酶系表达活性的多种策略。根据所选用的载体和宿主的不同表达特性,同时克隆目的基因上、下游的正向调控序列可直接增强酶表达水平;强化翻译后的修饰,可有效提高活性;除了常用的大肠杆菌克隆表达体系外,开发新型宿主-载体系统可为重组酶的活性表达提供新的途径;随着生物信息学技术的迅速发展,利用已知三维结构的蛋白对目标酶进行突变位点设计及结构与功能预测,将有望加快腈代谢酶系的定点突变研究进程。

关键词：腈水合酶腈代谢酶系表达活性载体重组酶