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组织型纤溶酶原激活剂突变体Reteplase(r-PA)基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

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药物生物技术 2002年第2期9卷 95-98页

作者：廖建民张瑾沈子龙中国药科大学生物制药学院南京210009

通过PCR的方法从人t PA基因上扩增到r PA基因的编码序列 ,并克隆到 pMD18 T载体中 ,DNA测序与文献报道完全一致。该基因被克隆到多用途表达载体pET2 8a中 ,重组表达载体r PA/ pET 2 8a转化E coliBL2 1(DE3) ,培养表达 ,SDS PAGE分析可见... 详细信息

通过PCR的方法从人t PA基因上扩增到r PA基因的编码序列 ,并克隆到 pMD18 T载体中 ,DNA测序与文献报道完全一致。该基因被克隆到多用途表达载体pET2 8a中 ,重组表达载体r PA/ pET 2 8a转化E coliBL2 1(DE3) ,培养表达 ,SDS PAGE分析可见Mr 约 390 0 0的蛋白条带 ,约占细胞内总蛋白的 30 %以上。体外溶圈法测定活性表明该重组蛋白具有较好的纤溶活性。

关键词：组织型纤溶酶原激活剂突变体 Reteplase(r-PA)基因克隆大肠杆菌聚合酶链式反应

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对有效的抗肿瘤单抗药物的探索

药物生物技术 2003年第3期10卷 194-198页

作者：刘煜沈子龙汤家铭奚涛成国祥中国药科大学南京210009 上海转基因研究中心上海2012032

文章综述了单抗药物用于临床肿瘤治疗的研究进展。开发一个成功的抗肿瘤单抗药物应从以下几方面考虑 :(1)选择特异的肿瘤抗原 ;(2 )制备人源化单抗以降低单抗药物的免疫原性 ;(3)利用抗体工程改造抗体结构以延长半衰期 ;(4)改进给药方... 详细信息

文章综述了单抗药物用于临床肿瘤治疗的研究进展。开发一个成功的抗肿瘤单抗药物应从以下几方面考虑 :(1)选择特异的肿瘤抗原 ;(2 )制备人源化单抗以降低单抗药物的免疫原性 ;(3)利用抗体工程改造抗体结构以延长半衰期 ;(4)改进给药方式以提高抗体药物在肿瘤组织的局部浓度 ;(5 )提高单抗药物的抗肿瘤活性 ;(6 )进一步提高单抗药物的选择性。还简述了单抗药物抗肿瘤的可能机制及单抗药物的前景展望。

关键词：抗肿瘤单抗人抗鼠抗体反应临体治疗

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筛泡壁修补鼻中隔穿孔

中国耳鼻咽喉头颈外科 2014年第6期21卷 327-328页

作者：周锦川王东沈子龙叶青解放军第一二三医院耳鼻咽喉头颈外科安徽蚌埠233015

鼻中隔穿孔系指由于各种原因导致鼻中隔的任何部位形成大小不等、形态各异的永久性穿孔，使两侧鼻腔相通：鼻中隔穿孔修补术的方法较多，用于鼻中隔修补的材料也较多，常见的有自体颞肌筋膜、阔筋膜及鼻腔内的鼻甲黏膜或黏骨膜瓣等÷我... 详细信息

鼻中隔穿孔系指由于各种原因导致鼻中隔的任何部位形成大小不等、形态各异的永久性穿孔，使两侧鼻腔相通：鼻中隔穿孔修补术的方法较多，用于鼻中隔修补的材料也较多，常见的有自体颞肌筋膜、阔筋膜及鼻腔内的鼻甲黏膜或黏骨膜瓣等÷我科近年来采用筛泡壁修补7例鼻中隔穿孔患者，取得良好效果．报道如下。

关键词：鼻中隔(Nasal Septum) 鼻中隔穿孔(perforation of nasal septum) 筛泡(ethmoid bulla)

奶山羊乳腺瞬时表达溶栓药物瑞替普酶-reteplase(rPA)的研究

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奶山羊乳腺瞬时表达溶栓药物瑞替普酶-reteplase(rPA)的研究

瑞替普酶融合蛋白在大肠杆菌中表达条件的优化及其复性

中国生物工程学会2006年学术年会暨全国生物反应器学术研讨会

作者：徐寒梅沈子龙成国祥中国药科大学生命科学院上海杰隆生物工程股份有限公司

转基因大家畜乳腺表达外源药用蛋白是一项大的系统工程,需要完成载体构建、基因转移、胚胎移植、转基因整合检测、表达检测等一系列操作,这其中载体构建是首要的一部,关系到转基因的成败。载体构建完成后,验证其合理性的方法有乳腺细胞...

转基因大家畜乳腺表达外源药用蛋白是一项大的系统工程,需要完成载体构建、基因转移、胚胎移植、转基因整合检测、表达检测等一系列操作,这其中载体构建是首要的一部,关系到转基因的成败。载体构建完成后,验证其合理性的方法有乳腺细胞表达检测和活体检测,而乳腺瞬时表达更能够代表转基因宿主动物的真实情况。本研究希望利用转基因奶山羊乳腺表达溶栓药物瑞替普酶-reteplase(rPA)基因,为此构建了相应的表达载体并利用乳腺

关键词：

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中国药科大学学报 2005年第4期36卷 363-367页

作者：孙石静张新元孙雄华廖建民沈子龙中国药科大学生命科学与技术学院南京210009

目的:为优化瑞替普酶(reteplase,r-PA)在大肠杆菌中的高效融合表达的条件,并提高其复性率。方法:通过改变诱导时间和温度、诱导剂浓度、培养基pH值及氨苄青霉素(Amp)浓度等条件,利用SDS-PAGE分析以上条件的改变对表达产物产量的影响。... 详细信息

目的:为优化瑞替普酶(reteplase,r-PA)在大肠杆菌中的高效融合表达的条件,并提高其复性率。方法:通过改变诱导时间和温度、诱导剂浓度、培养基pH值及氨苄青霉素(Amp)浓度等条件,利用SDS-PAGE分析以上条件的改变对表达产物产量的影响。运用金属螯合层析对融合蛋白进行纯化和复性。结果与结论:LB培养基pH值为6,Amp浓度为100μg/mL,乳糖浓度为5 mmol/L的条件下39℃诱导4 h可获得高效表达的r-PA融合蛋白,其表达量占全菌蛋白的70%,其产物主要以包涵体形式存在。融合蛋白运用金属螯合层析一步纯化复性,其复性率可达10%,比活为55.7 U/μL。

关键词：瑞替普酶融合蛋白诱导表达优化复性

酪丝缬肽在Beagle犬体内药动学初步研究

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药物生物技术 2007年第1期14卷 60-63页

作者：孙迎基张峰国廖建民沈子龙中国药科大学生物技术中心江苏南京210009

初步研究酪丝缬肽单次静注给药后在Beagle犬的体内过程。建立了酪丝缬肽在Beagle犬全血中浓度测定的RP-HPLC-UV方法。绘制酪丝缬肽单次给药后在Beagle犬体内全血药物浓度-时间曲线,并求得药动学参数。本检测方法灵敏度不高,最低定量限为... 详细信息

初步研究酪丝缬肽单次静注给药后在Beagle犬的体内过程。建立了酪丝缬肽在Beagle犬全血中浓度测定的RP-HPLC-UV方法。绘制酪丝缬肽单次给药后在Beagle犬体内全血药物浓度-时间曲线,并求得药动学参数。本检测方法灵敏度不高,最低定量限为0.20μg/ml。酪丝缬肽静注给药后在Beagle犬体内药动学符合单房室模型,低、中、高3个剂量(60,600,6000μg/kg)的T1/2分别为(8.88±1.45),(9.00±1.70),(11.12±2.83)s,无显著性差异,C10s和AUC与剂量成良好的线性关系。本实验初步表明:酪丝缬肽静注给药在Beagle犬体内的动力学行为是线性的。酪丝缬肽在Beagle犬体内快速消除,半衰期小于20s。

关键词：酪丝缬肽药动学高效液相色谱

9-[2-(膦酰甲氧基)乙基]腺嘌呤一钠盐在比格犬体内的毒代动力学和毒理学研究(英文)

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中国药理学与毒理学杂志 2006年第6期20卷 461-467页

作者：王文艳沈子龙姚全胜姚军白文霞潘玉英中国药科大学生物技术中心江苏南京210009 江苏省药物研究所药物安全评价中心江苏南京210009

目的为9-[2-(膦酰甲氧基)乙基]腺嘌呤一钠盐(PMEA-Na)重复给药的毒性研究提供毒代动力学资料。方法采用液相色谱质谱联用方法测定样品中的药物浓度,数据经统计矩方法处理得到毒代动力学参数,并完成血清生化学及组织病理学检测。结果比格... 详细信息

目的为9-[2-(膦酰甲氧基)乙基]腺嘌呤一钠盐(PMEA-Na)重复给药的毒性研究提供毒代动力学资料。方法采用液相色谱质谱联用方法测定样品中的药物浓度,数据经统计矩方法处理得到毒代动力学参数,并完成血清生化学及组织病理学检测。结果比格(Beagle)犬静脉单次及多次给药(14 d,每日1次)后,在给药剂量范围内, AUC均表现为剂量依赖性。在1.0, 3.0与6.0 mg·kg-1PMEA-Na时,AUC分别为(2.3±0.5),(8.4±1.6),(17.5±3.7)mg·L-1·h(单剂量)和(5.0±0.4),(15.9±3.2),(30.3±4.7) mg·L-1·h(多剂量)。PMEA-Na主要经肾脏排出体外,且给药14 d后肾功能受损药物排泄能力降低。与对照组比较, 6.0 mg·kg-1组血清生化学检测指标丙氨酸氨基转换酶、总胆红素、尿素氮、肌酐及甘油三酯均升高,葡萄糖水平下降。6.0 mg·kg-1组的组织病理学检查发现肝脏和肾脏有明显的病理形态学改变。结论比格犬经静脉多次给PMEA-Na 14 d后出现毒性反应,毒性靶器官主要为肾脏和肝脏。

关键词： 9-[2-(膦酰甲氧基)乙基]腺嘌呤-钠盐毒代动力学病理学

抗菌肽S-thanatin体外中和内毒素以及在临床分离多重耐药大肠杆菌引起的败血症休克模型中的作用(英文)

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抗菌肽S-thanatin体外中和内毒素以及在临床分离多重耐药大肠杆菌...

格莱姆抗菌肽——抗菌肽开发与应用技术研讨会

作者：沈子龙吴国球中国药科大学生命科学与技术学院东南大学附属中大医院临床检验中心

S-thanatin,an analogue of thanatin,was synthesised by substituting the fifteenth amino acid threonine with serine and showed broad antimicrobial activity against Gram-negative and Gram-positive *** evaluate its antimicrobial activity against a multidrug-resistant(MDR)clinical isolate as well as its anti-endotoxin activity,its lipopolysaccharide(LPS)-binding and-neutralising activity in vitro and its therapeutic efficacy in an experimental model of septic shock caused by a MDR clinical isolate of Escherichia coli were *** ability of S-thanatin to bind or neutralise LPS from *** O111:B4 was determined using a quantitative assay *** ICR mice were given an intraperitoneal(i.p.)administration of 2×10colony-forming units of *** *** bacterial challenge,all animals were randomised to receive *** of saline,40 mg/kg ceftazidime(CAZ),or 40 mg/kg CAZ+ S-thanatin(10,20 or 40 mg/kg).The results showed that S-thanatin not only completely bound to the LPS (median effective concentration of 17.5μg/mL)but also improved the survival and reduced the number of inoculated bacteria in a mouse model of septic shock.S-thanatin may be an attractive candidate to develop as an anti-MDR bacterial agent.

关键词： Lipopolysaccharide Multidrug resistance Antimicrobial peptide

来源： cnki会议评论

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超声波法提取海带多糖的研究

药物生物技术 2002年第3期9卷 157-160页

作者：廖建民张瑾沈子龙中国药科大学生物制药学院南京21009

通过单因素考察及正交实验优化了用超声波法提取海带多糖的实验条件,并与酸提取方法进行了比较。结果显示在海带干粉中加入62.5倍体积的水,在pH2.0的条件下用超声波提取45min得到的海带多糖的量最多。与酸提取法相比,超声波法的粗提物... 详细信息

通过单因素考察及正交实验优化了用超声波法提取海带多糖的实验条件,并与酸提取方法进行了比较。结果显示在海带干粉中加入62.5倍体积的水,在pH2.0的条件下用超声波提取45min得到的海带多糖的量最多。与酸提取法相比,超声波法的粗提物提取率稍高（分别为10.95％和11.45％,P>0.05）;但提出物中的糖含量明显增加（分别为19.8％和28.19％,P0.05）;而且在抑瘤的同时不影响小鼠的正常生长（P>0.05）。因此,超声波法提取多糖是一种很有希望的多糖提取新方法。

关键词：海带多糖正交实验超声波法有效成份提取海带