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N,N-双乙酰胱氨酸在毕格犬体内的药动学

中国生化药物杂志 2007年第2期28卷 113-115页

作者：廖建民吴小云张奉国沈子龙张瑾中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009 南京药大生物制药有限公司江苏南京210061

目的研究毕格犬静脉注射不同剂量N，N-双乙酰胱氨酸（DiNAC）后的药动学。方法毕格犬12只随机分成3组，分别静脉注射DiNAC25，12．5，6．25mg／kg，在设定的时间点采血，反相高效液相色谱法测定血浆中的DiNAC浓度，DAS程序计算其药动学... 详细信息

目的研究毕格犬静脉注射不同剂量N，N-双乙酰胱氨酸（DiNAC）后的药动学。方法毕格犬12只随机分成3组，分别静脉注射DiNAC25，12．5，6．25mg／kg，在设定的时间点采血，反相高效液相色谱法测定血浆中的DiNAC浓度，DAS程序计算其药动学参数。结果毕格犬静脉给予DiNAC后，其血药浓度-时间曲线符合二室模型一级动力学过程。AUC0→∞分别为3849．7±157．7，1683．0±90．5，757．1±344．2mg／（L·min），与给药剂量成良好的线性关系（r=0．9993）；Cmax分别为91．99±15．13，53．37±3．88，23．20±7．07mg／L，与给药剂量呈线性关系（r=0．993）；而t1／2α为1、1～1．9min，t1／2β为34．2～47．3min，分布容积（Vd）为0、38～0．49L／kg，显示非剂量依赖性特征。结论DiNAC在毕格犬体内的药动学过程为二室模型一级动力学过程，具有分布快，消除迅速的特点。

关键词： N,N-双乙酰胱氨酸药动学毕格犬

Thanatin突变体在大肠杆菌中的表达及纯化

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东南大学学报（医学版） 2007年第3期26卷 220-224页

作者：顾林文良柱吴国球徐寒梅沈子龙中国药科大学生物技术中心江苏南京210009 东南大学附属中大医院检验科江苏南京210009

目的:在大肠杆菌中克隆表达thanatin突变体(Th-T)蛋白并纯化。方法:PCR合成Th-T基因并克隆到pET32a载体的BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点之间,构建Th-T原核表达载体(pET32a-Th-T)并转化到大肠杆菌BL21融合表达,通过正交实验优化表达条件,His-Bin... 详细信息

目的:在大肠杆菌中克隆表达thanatin突变体(Th-T)蛋白并纯化。方法:PCR合成Th-T基因并克隆到pET32a载体的BamHⅠ和XhoⅠ酶切位点之间,构建Th-T原核表达载体(pET32a-Th-T)并转化到大肠杆菌BL21融合表达,通过正交实验优化表达条件,His-Bind介质纯化。考察经酶切纯化后的重组Th-T对4种供试菌的最低抑制浓度。结果:菌体在LB培养基(pH6.5)培养4.5 h,IPTG 0.4 mmol.L-1诱导7 h,Th-T融合蛋白大量可溶性表达,经药敏试验证明纯化的重组Th-T具有预期的抗菌活性。结论:本研究为通过大肠杆菌体系表达重组Th-T抗菌药物奠定了基础。

关键词： thanatin 突变体大肠杆菌融合蛋白纯化表达药敏试验

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耳鼻喉科住院军队病员疾病谱分析

东南国防医药 2016年第6期18卷 575-577,605页

作者：王东谢元璐沈子龙叶青钱旭东周锦川解放军123医院耳鼻喉科安徽蚌埠230016

目的分析住院军队患者耳鼻喉头颈外科疾病谱特点,为提出有针对性的防治意见提供依据。方法从某医院住院军人病历中抽取2006年1月-2015年12月耳鼻喉科疾病资料,建立疾病谱,对比分析军校、基层部队的疾病特点。结果10年间军人因耳鼻喉科... 详细信息

目的分析住院军队患者耳鼻喉头颈外科疾病谱特点,为提出有针对性的防治意见提供依据。方法从某医院住院军人病历中抽取2006年1月-2015年12月耳鼻喉科疾病资料,建立疾病谱,对比分析军校、基层部队的疾病特点。结果10年间军人因耳鼻喉科疾病住院336例,352例次,排前10位疾病的为急性扁桃体炎、鼻中隔偏曲、感音神经性聋、慢性鼻-鼻窦炎、鼻骨骨折、头颈部囊肿(瘘管)、颈面部软组织外伤、慢性扁桃体炎、慢性肥厚性鼻炎、急性咽喉炎。急性扁桃体炎、鼻骨骨折构成比军校组高于基层部队组(P<0.01,P<0.05);鼻中隔偏曲、感音神经性聋构成比基层部队组高于军校组(P均<0.05)。结论部队各单位因所担负的职能和任务不同,故住院军人耳鼻喉科各疾病构成比差异较明显。

关键词：耳鼻喉科军队病员疾病谱

一氧化氮调控剂ZX-5对血管内皮细胞eNOS和ERK蛋白表达的影响

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东南大学学报（医学版） 2007年第6期26卷 417-420页

作者：王伟强奚涛沈子龙林红英吴国球中国药科大学江苏南京210009 东南大学附属中大医院检验科江苏南京210009

目的:研究新型一氧化氮调控剂ZX-5作用后血管内皮细胞eNOS和ERK蛋白的表达,初步阐明ZX-5的作用机理。方法:用Western blotting测定ZX-5作用后血管内皮细胞eNOS和ERK蛋白的表达。结果:ZX-5能够增加eNOS的表达量,高剂量ZX-5可以增加ERK蛋... 详细信息

目的:研究新型一氧化氮调控剂ZX-5作用后血管内皮细胞eNOS和ERK蛋白的表达,初步阐明ZX-5的作用机理。方法:用Western blotting测定ZX-5作用后血管内皮细胞eNOS和ERK蛋白的表达。结果:ZX-5能够增加eNOS的表达量,高剂量ZX-5可以增加ERK蛋白表达。结论:ZX-5可能通过ERK途径增加eNOS的表达(eNOS是ZX-5作用的靶点之一),具有开发成药物的潜力。

关键词：一氧化氮调控剂年龄相关性黄斑变性一氧化氮合酶胞外信号调节激酶蛋白

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血管内皮靶向性抗肿瘤多肽研究的新思路

药学进展 2006年第11期30卷 481-484页

作者：林红英徐寒梅王伟强沈子龙中国药科大学生物技术中心

概述近年来血管内皮靶向性抗肿瘤多肽研究状况,并提出研究的新思路,即针对两种重要的肿瘤血管内皮特异性分子标记———生长因子和整合素,设计开发作用于肿瘤血管内皮的抗肿瘤多肽,使该类药物研发由大规模筛选走向更具理性和靶向性。

关键词：血管内皮生长因子整合素靶向性抗肿瘤多肽

鲨鱼肝再生因子(SHRF)半抗原偶联与多抗制备

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药物生物技术 2005年第4期12卷 211-213页

作者：张奉国魏复雷孙迎基廖建民沈子龙中国药科大学同位素室江苏南京210038

探讨鲨鱼肝细胞再生因子(Shark Hepatic Regenerative Factor,SHRF)完全抗原的偶联方法和兔抗体的制备。分别考察了戊二醛(GA)一步法,戊二醛二步法和1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳化二亚胺(EDC)法3 种偶联方法对SHRF与BSA的偶联效果,并将... 详细信息

探讨鲨鱼肝细胞再生因子(Shark Hepatic Regenerative Factor,SHRF)完全抗原的偶联方法和兔抗体的制备。分别考察了戊二醛(GA)一步法,戊二醛二步法和1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳化二亚胺(EDC)法3 种偶联方法对SHRF与BSA的偶联效果,并将制备的完全抗原免疫新西兰白兔。实验表明碳化二亚胺法具有反应条件温和,偶联效率高等优点,并得到了高效价的兔抗体,为SHRF的ELISA方法的建立奠定了基础。

关键词：鲨鱼肝刺激物质完全抗原抗体制备

一种新型结缔组织生长因子人源单链抗体的可溶性表达以及分离纯化

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东南大学学报（医学版） 2010年第4期29卷 361-366页

作者：范小波苟丽霞刘昭沈子龙刘乃丰吴国球奚涛中国药科大学生命科学与技术学院江苏南京210009 东南大学附属中大医院临床检验中心江苏南京210009

目的:研究单链抗体(scFv)在不同载体和菌株中的表达以及表达产物的免疫学活性评价。方法:将人源化单链抗体的基因通过酶切、连接等生物技术的方法克隆到pET28a、pET32a和pET-EI:X3种不同的载体中,并选用不同的表达菌株进行表达,观察单... 详细信息

目的:研究单链抗体(scFv)在不同载体和菌株中的表达以及表达产物的免疫学活性评价。方法:将人源化单链抗体的基因通过酶切、连接等生物技术的方法克隆到pET28a、pET32a和pET-EI:X3种不同的载体中,并选用不同的表达菌株进行表达,观察单链抗体的表达情况并对抗体的可溶性表达进行优化,采用亲和层析和分子筛层析对目的蛋白进行纯化,并在体外研究目的蛋白的生物学活性。结果:抗结缔组织生长因子单链抗体在pET28a/BL21(DE3)中不能表达,在pET32a/BL21(DE3)和pET-EI:X/BLR(DE3)中均成功表达,但是在pET-EI:X/BLR(DE3)中scFv抗体无法从内含肽(intein)上裂解。scFv在pET32a/BL21(DE3)中表达量占总蛋白的30%左右,经过两步层析纯化后纯度达到85%以上。体外免疫试验显示,目的蛋白具有良好的免疫学活性。结论:人源化抗结缔组织生长因子单链抗体scFv在大肠杆菌中的表达需要分子伴侣,通过低温表达策略在pET32a/BL21(DE3)中成功得到表达。

关键词：人源单链抗体结缔组织生长因子弹性蛋白分离纯化

死亡素在裂殖酵母中表达及工程菌发酵条件的探索

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死亡素在裂殖酵母中表达及工程菌发酵条件的探索

浙江省生物化学与分子生物学学术交流会

作者：吕正兵蒋彩英刘立丽孔祥东张耀洲钱坤文良柱沈子龙浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所中国药科大学生命科学与技术学院

在斑腹刺益蝽(Podisus maculiventris)中发现的死亡素由21个氨基酸残基组成(thanatin),根据其一级结构及密码子偏爱性,通过PCR方法人工合成死亡素基因,将所合成的死亡素基因克隆于pMD18T simple vector,筛选重组T载体并测序鉴定。将测... 详细信息

在斑腹刺益蝽(Podisus maculiventris)中发现的死亡素由21个氨基酸残基组成(thanatin),根据其一级结构及密码子偏爱性,通过PCR方法人工合成死亡素基因,将所合成的死亡素基因克隆于pMD18T simple vector,筛选重组T载体并测序鉴定。将测序正确的重组T载体和穿梭质

关键词：死亡素裂殖酵母生物活性

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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r-PA真核表达载体的构建与鉴定

药物生物技术 2005年第3期12卷 152-157页

作者：孙石静张新元孙雄华廖建民沈子龙中国药科大学生物技术中心江苏南京210009

用SV40和CaMV35S两种启动子分别启动瑞替普酶(reteplase,rPA)和标记基因bar基因,构建能在海带中表达外源基因的重组表达载体。通过PCR方法扩增CaMV35S启动子、bar基因和rPA基因,将扩增的3个片段分别克隆到pGEMTEasyVector上。将CaMV片... 详细信息

用SV40和CaMV35S两种启动子分别启动瑞替普酶(reteplase,rPA)和标记基因bar基因,构建能在海带中表达外源基因的重组表达载体。通过PCR方法扩增CaMV35S启动子、bar基因和rPA基因,将扩增的3个片段分别克隆到pGEMTEasyVector上。将CaMV片段亚克隆到pCAT3control载体上得到重组质粒pCAT/CaMV;再将bar基因切下插入到CAT/CaMV上得到重组质粒pCAT/CB,最后将rPA基因片段切下后插入到pCAT/CB上获得重组质粒pSVrPA/CB。PCR、酶切及测序结果均表明已成功扩增出CaMV35S、rPA和bar基因片段,并已顺次正确插入到真核表达载体PCAT3control上,最终成功构建了能在海带中表达rPA的真核表达载体,用基因枪法转入海带中表达,FAPA法测定得到有体外纤溶活性的阳性海带,为后续研究工作打下坚实的基础。

关键词：瑞替普酶构建真核表达载体海带