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吸入性损伤患者外周血免疫细胞组成特征与相互作用的单细胞测序分析研究

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吸入性损伤患者外周血免疫细胞组成特征与相互作用的单细胞测序分...

作者：沈纵中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

背景:吸入性损伤是指呼吸过程中因进入气道的热力（高温气体、烟雾、蒸汽）或化学刺激物所造成的呼吸道甚至肺实质损伤,可表现为直接热损伤、化学刺激物吸入造成的组织损伤、吸入毒素引起的全身反应,或这些损伤的叠加。其既可独立出现,... 详细信息

背景:吸入性损伤是指呼吸过程中因进入气道的热力（高温气体、烟雾、蒸汽）或化学刺激物所造成的呼吸道甚至肺实质损伤,可表现为直接热损伤、化学刺激物吸入造成的组织损伤、吸入毒素引起的全身反应,或这些损伤的叠加。其既可独立出现,也可伴随爆炸伤、烧伤等同时发生,中重度吸入性损伤易演变成急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征,目前已成为烧伤三大主要死亡原因之一。国内外对于吸入性损伤的诊断和严重程度的分级缺乏统一的标准,基于支气管镜检查的简明损伤评分本质上是主观的,且吸入性损伤进展迅速,早期影像学表现往往无特殊,容易漏诊失去最佳治疗时机;治疗策略未形成统一的指南,国内仅有2018版专家共识供参考,临床上以对症支持治疗为主,尚无特异有效的治疗方法,且改善疾病预后仍面临着巨大挑战。上述问题源自于吸入性损伤的病理生理机制尚未完全阐明,有研究表明和直接热损伤、气道阻塞以及气道上皮及血管内皮受损后炎性细胞浸润并激活复杂炎症级联反应有关,因此,理解免疫细胞的不同亚群状态变化和各种细胞之间相互作用,对于探索吸入性损伤发展阶段是有所助益的,而新兴的单细胞测序技术能够在单个细胞分辨率水平对免疫细胞不同亚群进行识别和表征,揭示其在不同病程阶段组成特征,准确定位细胞功能,解析细胞间相互作用,以其独特优势越来越多地应用于肺部疾病相关免疫研究。目的:利用单细胞转录组测序技术,描绘吸入性损伤患者不同病程阶段外周血免疫细胞图谱,并挖掘关键表达基因,通过多维生物信息学角度分析,探究吸入性损伤急性期、进展期和康复期外周血免疫细胞种类及其丰度和功能的动态变化,阐明免疫细胞亚群组成特征,进一步探索特定免疫细胞亚群间相互作用,结合临床资料,以期为揭示发病机制、动态监测病程发展以及免疫治疗提供理论依据和思路。方法:根据研究纳入排除标准,以2021年3月至2021年12月期间在海军军医大学第一附属医院（上海长海医院）烧创伤中心收治的3名成年吸入性损伤患者和招募的3例健康对照者作为受试研究对象,伤后24小时内入院时、住院第3日及出院前1日（对应吸入性损伤急性期、进展期和康复期）采集患者新鲜外周血,使用Ficoll密度梯度离心法分离得单个核细胞和中性粒细胞悬液,随后根据BD Rhapsody标准流程,提取单细胞并进行单细胞转录组测序,经过数据质控,最后通过单细胞降维和聚类分析、细胞类型注释和细胞亚群标志基因鉴定、生物学功能富集分析、信号通路富集分析、拟时序分析和细胞通讯分析等方法,对数据进行生物信息学分析。结果:1、本研究对吸入性损伤患者不同病程阶段和健康对照组外周血单个核细胞和中性粒细胞进行单细胞转录组测序,共获得77101个高质量免疫细胞,共鉴定出5种主要的免疫细胞群,聚类分析出18个免疫细胞亚群。2、依据病程发展的不同阶段,样本中不同类型细胞分布和占比呈现出异质性,T细胞、NK细胞和B细胞占比减少,髓系细胞占比增加。烧伤合并吸入性损伤患者相较于单纯性吸入性损伤患者外周血免疫细胞构成出现更明显改变,与康复期和健康对照相比,非经典单核细胞数量和占比在吸入性损伤急性期与进展期显著下降。3、非经典单核细胞与FCGR3A+-NK细胞具有正相关性,相关系数为0.56;表达趋化作用的FCGR3A和CX3CR1基因表达显著上调,进一步对差异基因功能富集分析,提示非经典单核细胞作为循环系统中的巡逻细胞,在免疫系统中行使监督的功能。4、通过细胞通讯分析,共识别出9条具有生物学意义的配体-受体对,涉及36条信号通路。经典单核细胞和非经典单核细胞是输出信号模式的主导细胞。非经典单核细胞亚群显著通过GALECTIN、PECAM-1、SELPLG、TNF、CD86协调向外发送信号。结论:1、本研究基于单细胞转录组测序技术,初步构建了吸入性损伤不同病程阶段外周血免疫细胞图谱,对细胞丰度和功能进行了表征,发现髓系细胞分布和数量发生改变,揭示先天性免疫在吸入性损伤病程进展中发挥重要作用。2、在吸入性损伤急性期和进展期,外周血非经典单核细胞占比显著下降,且趋化因子FCGR3A和CX3CR1基因高度表达,提示在吸入性损伤发生发展时非经典单核细胞可能在趋化因子趋化作用下迁移至炎症组织,可以进一步从非经典单核细胞迁移角度探寻吸入性损伤发病机制。3、通过细胞通讯模式分析,发现非经典单核细胞是输出信号模式的主导细胞,其对整个细胞通讯环境调控较特殊,可以通过多种配体-受体对介导信号通路参与吸入性损伤疾病进展。

关键词：吸入性损伤单细胞转录组测序非经典单核细胞趋化因子

三江并流区域自然保护地森林生态系统保护成效研究

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三江并流区域自然保护地森林生态系统保护成效研究

作者：沈画中国环境科学研究院

学位级别：硕士

自然保护地对森林生态系统的保护有着重要的作用与意义,针对自然保护地在森林生态系统方面的保护成效定量评估也一直是保护地成效评估关注的热点。然而,全球对于保护地评估的比例还远远低于《生物多样性公约》设置的目标。云南三江并流... 详细信息

自然保护地对森林生态系统的保护有着重要的作用与意义,针对自然保护地在森林生态系统方面的保护成效定量评估也一直是保护地成效评估关注的热点。然而,全球对于保护地评估的比例还远远低于《生物多样性公约》设置的目标。云南三江并流区域作为全球生物多样性保护热点地区之一,其保护地对森林生态系统的保护成效及其影响因素仍有待进一步研究。因此,本文基于森林覆盖面积和森林生态系统服务两个方面,探究了三江并流区域自然保护地在过去二十年（2000-2020年）来对森林生态系统的保护成效及其影响因素,以期为提升区域生态系统的稳定性和持续性提供对策建议。基于中国2000-2020年30米逐年土地覆盖数据集,本文首先计算了过去20年来三江并流区域整体及单个保护地森林面积的连续变化情况。结合倾向评分配比、混合线性模型及Wilcoxon检验等模型方法,进一步分析了每个自然保护地的森林面积在20年间的保护成效。在此基础上,本文进一步选取了水源涵养、土壤保持、碳储存与固存和生境质量4个生态系统服务方面的指标,通过In VEST模型计算了20年来三江并流区域各自然保护地内的变化情况,并通过归一化处理、层次分析法以及随机森林模型,评估了各保护地对生态系统服务的保护成效。最后,使用随机森林模型对影响森林生态系统保护成效不同指标的影响因子分别进行了分析。主要研究结果如下:（1）从2000年到2020年,三江并流区域整体的森林生态系统的面积呈现显著增加的趋势（R2=0.753,P也呈现显著增加的趋势（R2=0.919,P<0.05）。从单个保护地来看,除玉龙黎明-老君山国家地质公园呈现稳定的趋势以外,大多数保护地（n=13）在过去20年均呈现显著增长趋势。（2）本文构建了基于“状态-趋势-相对变化”的自然保护地保护成效评估框架,以森林生态系统面积为评估指标,分析结果表明,三江并流区域内有12个自然保护地（86%）表现为正成效,2个自然保护地的保护成效不显著。与过去的评估方法相比,本研究构建的保护成效评估框架有助于减少保护地负成效的误判情况,尤其适用于生物多样性丰富、生态系统稳定的地区。（3）三江并流区域自然保护地在2000-2020年水源涵养和土壤保持服务呈现较大的波动趋势;碳储存与固存服务明显增加;生境质量服务整体上升,但个别保护地在2015-2020年有下降情况。归一化加权后结果表明,三江并流区域自然保护地生态系统服务除个别年份波动较大,整体趋势呈现稳定。（4）从影响因素来看,三江并流区域自然保护地森林生态系统保护成效受自然因素、人为干扰因素及管理强度等因素的共同作用。其中,自然因素中年总降水量和温度是主导因素;人为干扰因素中道路密度对森林生态系统的面积影响较大,而人口密度是影响森林生态系统服务的主导因素。此外,从管理强度来看,国家级自然保护区和国家级自然公园对森林生态系统面积和生态系统服务的保护成效要优于地方级自然保护区。综上,本研究认为2000-2020年三江并流区域自然保护地在森林生态系统保护方面发挥了重要作用,但针对个别保护地还有提升的空间。在未来的保护、管理与规划中,还需要控制人为干扰因素,落实相关保护政策执行,实现区域系统性、整体性规划建设,加强地方级自然保护区的管理。

关键词：保护成效生态系统服务自然保护区自然公园滇西北

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永临叠合地铁车站受力变形规律及优化分析

永临叠合地铁车站受力变形规律及优化分析

作者：沈霆石家庄铁道大学

学位级别：硕士

一维纳米管-二氧化硅复合填料制备及其填充硅橡胶性能研究

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一维纳米管-二氧化硅复合填料制备及其填充硅橡胶性能研究

作者：沈小妹北京化工大学

学位级别：硕士

基于纳米催化材料的非酶电化学传感器的构建及其在液体饮料检测中的应用

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基于纳米催化材料的非酶电化学传感器的构建及其在液体饮料检测中...

作者：沈魏上海师范大学

学位级别：硕士

基于Delta-CT影像组学预测肺结节良恶性中的诊断价值

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基于Delta-CT影像组学预测肺结节良恶性中的诊断价值

作者：沈天赐湖北医药学院

学位级别：硕士

背景:据2023年美国癌症协会报告统计,肺癌是目前癌症造成的相关死亡中排名第一的肿瘤性疾病,全球发病率居第二位。肺癌的早发现早治疗是提高患者生存率的主要方法,早期肺癌多以肺结节的形式出现,对肺结节患者进行准确的评估显得尤为重要... 详细信息

背景:据2023年美国癌症协会报告统计,肺癌是目前癌症造成的相关死亡中排名第一的肿瘤性疾病,全球发病率居第二位。肺癌的早发现早治疗是提高患者生存率的主要方法,早期肺癌多以肺结节的形式出现,对肺结节患者进行准确的评估显得尤为重要,低剂量计算机断层扫描(Low-dose computed tomography,LDCT)是首选筛查手段,但其诊断受限于诊断医生的临床经验,同时良恶性结节在影像学特征方面存在交叉,有一定的漏诊或过度诊断的风险。影像组学作为一种新兴方法,通过定量分析来预测肿瘤生物学行为和性质,可为结节良恶性的定性诊断提供一个决策工具。目前,更多的研究倾向于基于平扫CT图像影像组学的方法预测肺结节的良恶性,基于CT增强图像探究影像组学的方法在鉴别肺结节良恶性领域的研究较为少见。增强CT可通过造影剂显示病灶与正常组织、病灶内不同成分等的强化差异,反应结节灶与其周围及其他相关组织的血供状态,可为肺结节的定性诊断提供直接或间接的影像学证据,提高诊断效能,但影像判读中,增强CT上存在磨玻璃结节及部分实性结节强化常不明显肉眼无法判断的问题。Delta影像组学是一种影像组学的应用,专注于分析影像数据中的变化或差异,通过比较不同时间点或不同条件下的影像,识别和量化图像中的差别,反应疾病的进展、治疗效果、器官功能等方面的变化。因此,我们运用Delta影像组学的思路从肺结节在增强CT平扫期、动脉期及静脉期共三期图像中提取特征后将其相减,将增强前后的差异等某些肉眼不易察觉的影像信息变化量化,使其更为直观,突出肺结节增强后的差异,并建立一个基于Delta-CT影像组学特征风险模型,探讨其在预测肺结节良恶性中的诊断价值。目的:基于临床及Delta-CT影像组学构建联合模型,评估其在预测肺结节患者良恶性的价值。方法:回顾性分析146例(良性73例,恶性73例)经病理证实的肺结节患者,将患者采用分层抽样的方式按照7:3的比例分为训练组和验证组,沿结节边缘逐层提取每位患者平扫、动脉期及静脉期图像肺结节区域的感兴趣区(Regions of Interest,ROI),采用3D slicer软件提取影像组学纹理特征,并计算Delta-CT特征值,使用最小绝对收缩与选择算子子(Least Absolute Selection and Shrinkage Operator,LASSO)回归算法对影像组学特回归算法对影像组学特征进行特征筛选及降维,选择非零变量构建影像组学特征模型。结合独立的临床危险因素采用多元Logistics回归建立影像组学列线图,列线图的准确率和诊断效能在训练集中进行评估在验证集中进行验证,最后通过决策曲线分析评价列线图的临床应用价值。结果:基于临床特征模型在训练集(AUC=0.81,95%CI 0.73-0.90)及验证集(AUC=0.85,95%CI 0.73-0.98)对肺结节良恶性诊断略差,筛选出14个影像组学纹理特征与肺结节良恶性相关依据回归系数建立Rad-Score特征模型在训练集及验证集AUC分别为0.91(95%CI 0.84-0.98),0.90(95%CI 0.80-1.00),联合影像组学及临床特征列线图模型在训练集(0.94,95%CI 0.89-0.99)和验证集(0.98,95%CI0.94-1.00)均表现优异,DCA分析结果表明影像组学的加入可以使患者获益。结论:1.我们通过实验对比了不同种模型在肺结节良恶性的预测效能,Delta-CT影像组学模型相较于临床模型具有更优异的预测性能,同时联合模型的预测效能最高。2.我们构建了一个基于增强CT图像的Delta-CT影像组学模型区分良性和恶性肺结节的联合模型以列线图的形式呈现,它具有非浸润性的,无额外附加成本、简化决策的优点,经过验证可以作为临床辅助诊断工具。

关键词：肺结节肺癌影像组学

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企业ESG表现对股利政策的影响研究

企业ESG表现对股利政策的影响研究

作者：沈李琼电子科技大学

学位级别：硕士

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湖北地区主要辣椒品种花药培养的研究

湖北地区主要辣椒品种花药培养的研究

作者：沈胜海南大学

学位级别：硕士

辣椒花药培养具有获取纯系周期短的优点,是获得辣椒单倍体常用手段之一。本试验以湖北省辣椒市场热销的品种类型为供试材料,依据果型分为四类,长灯笼类型(薄皮椒):P01、P02、P04和P03;线椒类型:P06、P07、P08和P05;螺丝椒类型:P10和P09... 详细信息

辣椒花药培养具有获取纯系周期短的优点,是获得辣椒单倍体常用手段之一。本试验以湖北省辣椒市场热销的品种类型为供试材料,依据果型分为四类,长灯笼类型(薄皮椒):P01、P02、P04和P03;线椒类型:P06、P07、P08和P05;螺丝椒类型:P10和P09;朝天椒类型:P11和P12。试验主要研究花蕾的外观形态以及花药的颜色与小孢子发育时期的关系、材料基因型、基础培养基、植物生长调节剂四个影响因素对胚状体诱导率的影响,以期获得双单倍体材料应用于辣椒育种工作。试验结果如下:1、观察3类不同果实类型辣椒的花蕾与花药外观形态,测量花蕾与花药外观数据,通过镜检明确花蕾以及花药外观形态与小孢子发育时期的关系。试验表明:薄皮椒材料其花蕾纵径在3.22～4.82 mm、瓣萼比1.08,螺丝椒线椒类型材料其花蕾纵径在3.56～3.80 mm、瓣萼比1.05,朝天椒类型材料其花蕾纵径在2.23～3.01 mm、瓣萼比1.05,其小孢子发育处于单核靠边期,适宜花药培养。2、将3类果型12份辣椒的花药分别放入MS培养基上进行培养,其中有7份材料获得了胚状体,胚状体诱导率0.54%～3.0%,整体较低,各果型间差异显著。3、将P01、P10和P06的花药分别接入预设的9种基础培养基,研究基础培养基对胚状体诱导率的影响。其中,MS大量元素和B5有机复合培养基能够提升胚状体诱导率,而且5号培养基(成分为B5有机代替了正常MS培养基中有机物质)适合薄皮椒和螺丝椒花药培养。4、将P01、P10和P06的花药分别接入添加了不同植物生长调节剂组合的5号培养基,试验表明:0.75 mg/L 2,4-D+0.25 mg/L KT的激素组合最适合薄皮椒和螺丝椒诱导胚状体,螺丝椒诱导率为3.12%,提升了19.5%。5、在5号培养基上诱导材料P10获得了单倍体,经过秋水仙素加倍,获得双单倍体。P10-1-1材料的表型为:青果深绿,成熟果红色,果肉薄,辣度较高,青果口感爽脆。

关键词：辣椒花药培养胚状体诱导基因型培养基植物生长调节剂

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激活职高生英语学习内驱动力探微

英语画刊(高中版) 2015年第9期 86-86页

作者：沈也丁江苏省启东市第二中等专业学校

职高学生英语学习动力不足和兴趣不高是制约课堂教学的重要元素。围绕学生个体潜能激活、合作互动和激励性评价认可,对活跃教学情境氛围与增强学生主观能动性具有积极促进作用。探讨职高学生英语学习内驱动力的激活对提高课程教学有效... 详细信息

职高学生英语学习动力不足和兴趣不高是制约课堂教学的重要元素。围绕学生个体潜能激活、合作互动和激励性评价认可,对活跃教学情境氛围与增强学生主观能动性具有积极促进作用。探讨职高学生英语学习内驱动力的激活对提高课程教学有效性具有一定的指导意义。

关键词：职高英语学生内驱动力策略