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作者：芸菁

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试论结合民用建筑修建的人防工程物权归属

试论结合民用建筑修建的人防工程物权归属

作者：章琴芸华东政法大学

学位级别：硕士

1997年,我国颁布实施了《人民防空法》,明确规定建设单位在新建地面民用建筑时应在地下同步修建人防工程,在保证战时使用效能的前提下,鼓励平时利用人防工程为经济建设和人民生活服务。人防工程,特别是结合城市新建民用建筑修建的人防... 详细信息

1997年,我国颁布实施了《人民防空法》,明确规定建设单位在新建地面民用建筑时应在地下同步修建人防工程,在保证战时使用效能的前提下,鼓励平时利用人防工程为经济建设和人民生活服务。人防工程,特别是结合城市新建民用建筑修建的人防工程（简称结建人防工程）,具有与普通地下空间相同的平时使用功能和使用价值,所以在资源紧张的今天,越来越受到人们的关注。由于我国现行法律对人防工程权属未予明确,导致权益分配纠纷日益增多,行政监管措施无法落实。本文以结建人防工程为研究对象,在总结结建人防工程权属现状、辨析不同权属认定观点的基础上,结合人防工程特殊性,重点阐析了应依政治权力通过法律明确人防工程所有权归国家,同时在人防工程所有权上设立用益物权——人防工程平时使用权,将该权利归至投资人。其中,关于人防工程所有权和平时使用权法理分析,及区分所有权建筑物区划范围内人防工程权属和适用分析,也可为普通地下停车库权属界定提供务实参考。本文共分四章:第一章,介绍了人民防空、人防工程的概念及发展历程,以及解决结建工程人防工程权属问题的意义。第二章,主要梳理了人防工程物权归属的立法现状,以及由此带来的现实问题。从国家层面法律法规和部门规章、地方层面法规和政府规章、规范性文件三个层次,对现行人防工程物权归属有关法律规范进行了比较分析,提出人防工程的所有权规则还远远没有形成明确而清晰的制度性安排,人防工程平时开发利用仍基本处于权属不明、管理无力的初级阶段。第三章,主要介绍了三种典型的结建人防工程权属认定观点,并从法律规定、经济分析、技术规范等角度,对各观点之成立理由逐一进行辨析。第四章,对具有国防特殊属性的人防工程物权归属和适用问题提出了解决方案。这是本论文最终要解决的问题,也是撰写本论文目的所在。

关键词：人防工程民用建筑物权

青草沙水库鱼类群落结构及优势种鲢、鳙鱼生长特性

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青草沙水库鱼类群落结构及优势种鲢、鳙鱼生长特性

作者：魏宪芸上海海洋大学

学位级别：硕士

青草沙水库是位于上海市长兴岛西北部的长江口大型水库,东西狭长,南北较窄,是上海市重要的水源地。水库自2011年6月全面投入运行后,交纳水频繁,纳水、排水都会导致长江口鱼类进入水库及水库鱼类进入长江,加上为控水和保水而投放的鲢(Hyp... 详细信息

青草沙水库是位于上海市长兴岛西北部的长江口大型水库,东西狭长,南北较窄,是上海市重要的水源地。水库自2011年6月全面投入运行后,交纳水频繁,纳水、排水都会导致长江口鱼类进入水库及水库鱼类进入长江,加上为控水和保水而投放的鲢(Hypophthalmichthys molitrix)、鱅鱼(Aristichthys nobilis)及不定期的渔业作用等,导致水库中的鱼类种类组成、群落结构时刻处在变化中,因此对青草沙水库进行定期的鱼类调查,研究新生水库鱼类群落演替规律,为水库的稳定运行,持续提供优质饮用水提供科学依据。2015年6月至2017年5月对水库鱼类资源进行季度调查,调查方法包括各季度不同网眼的三层丝网全库捕获、水库捕鱼队每月提供的丝网和地笼网样本及数据等,运用多种方法对鱼类种类组成、优势度、食性、物种多样性等方面进行分析,同时进一步对水库中的主要鱼类鲢、鱅鱼的年龄生长进行分析研究,建立相应的生长模型,从而提供可靠的捕捞依据和建议。于2017年1月、3月、5月、7月、11月采用双频识别声呐DIDSON进行探测,直接获取到水库鱼群的时空分布特征,探究与浮游生物及轮虫的分布关系,进一步阐明了鱼类与浮游生物的动态关系。主要研究结果如下:1水库鱼类群落结构分析在青草沙水库共调查收集、分析样本60批次,3601尾个体,897kg渔获物,通过对渔获物分析鉴定,排除同物异名,共采集鱼类37种,隶属隶属10目12科34属。鱼类中以鲤科鱼类最多,占总种数的64.84%。其次为鲈形目4种占10.81%和鲇形目3种占8.11%,其他目的物种属均仅为1种。青草沙水库优势种主要为白鲢、花鲢、鲫鱼等淡水性鱼类鱼类。水库的建设也使得青草沙水库的生态环境、鱼群结构发生了变化,长江口鱼类的繁殖、生长、摄食等活动受阻,特别是洄游型鱼类的繁殖受到极大影响。在我们的调查周期内,仅发现长江洄游型鱼类中华鲟1尾,降海洄游型鱼类日本鳗鲡1尾。按照鱼类的生活习性,青草沙水库鱼类大致可分为4个类群:江海洄游型、河湖洄游型、山溪流水型、湖泊定居型,生态类型以湖泊定居型鱼类为主,即主要为淡水鱼类,其中以鲤形目占主要优势。按照鱼类的食性分析,青草沙水库鱼类大致可分为植食性、凶猛肉食性、无脊椎动物食性、杂食性4种类型。对青草沙水库鱼类种类进行鱼类区系组成分析,可分为4个鱼类区系复合体:南方平原鱼类区系复合体、中国平原鱼类区系复合体、晚第三纪早期鱼类区系复合体、北方平原鱼类区系复合体。青草沙水库的鱼类起源具有明显的热带、亚热带平原性质,淡水鱼类以中国平原区系复合体的种类及南方平原区系复合体的种类为主,另外还有晚第三纪早期、北方平原区系复合体的几种。由此可见,青草沙水库的鱼类区系组成基本属于东洋界。青草沙水库2015年夏季到2017年春季期间各季节的鱼类种数、渔获总数及生物多样性指数,群落的多样性指数、丰富度指数、均匀度指数出现了不同程度的变化。青草沙水库各季中以夏秋季的渔获物种类和渔获量最多,春季次之,以冬季最少。2鲢鱅鱼的生长特性研究与分析本文对青草沙水库的主要鱼类鲢、鳙鱼的生物学特性进行分析,采用体长、体重、年龄等关系对鲢、鳙鱼的Von Bertalanffy生长方程进行拟合。(1)鲢鱼VonBertalanffy生长方程:用最小二乘法求得生长方程渐近体长=77.74及生长系数k=0.183,t=-0.600进而求出鲢鱼体长、体重方程分别为:L=77.73[1-e-0.183(t+0.60)]),W=20024.3[1-e-0.183(t+0.60)]3.027),其中t代表鱼的年龄。(2)鳙鱼Von Bertanlanffy生长方程:用最小二乘法求得生长方程渐近体长=92.11及生长系数k=0.172,t=-1.266进而求出鱅鱼体长、体重方程分别为:L=92.11[1-e-0.172(t+1.27))],W=23875.2[1-e-0.172(t+1.27)]2.946),其中t代表鱼的年龄。对青草水库的鲢、鳙鱼进行科学的的放养和捕捞,为渔业资源的合理利用和水源地的保护有着重要的意义。一般来讲,青草沙水库中鲢的生长拐点为5.4龄,鳙鱼的生长拐点为5.0龄,在生长拐点之前起捕,生长优势没有得到充分的发挥。在生长拐点以后,随着年龄的增长,生长速度减慢,且饵料系数增大,转化效率低,这是不经济的,因此建议在渔业利用中鲢、鳙鱼以5龄后为起捕年龄,使青草沙水库中的鲢、鳙能够最大限度利用水体中的氮磷,消减藻类。3双频识别声呐DIDSON的鱼类水平分布评估利用双频识别声呐DIDSON对青草沙水库的鱼类水平分布进行为期一年的评估,发现不同月份下的鱼群的密度会有时空上的分布的变化,将鱼类的密度分布与同时期水库的浮游生物的分布状况相结合,表明同时期的鱼群密度与浮游生物及轮虫的密度分布是一致的,二

关键词：青草沙水库鱼类组成物种多样性鲢鳙鱼生长鱼类水平分布

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元认知策略在初中生英语词汇学习中的应用

元认知策略在初中生英语词汇学习中的应用

作者：郑瑞芸西北师范大学

学位级别：硕士

在初中英语教学中,词汇教学和学习一直是教学的焦点。因为词汇的掌握是语言学习中最基本的内容,也是提高学生听、说、读、写、译的基础。然而一方面学生在词汇学习中缺乏积极性、主动性,独立思考与自我反思的能力。另一方面我国新颁布... 详细信息

在初中英语教学中,词汇教学和学习一直是教学的焦点。因为词汇的掌握是语言学习中最基本的内容,也是提高学生听、说、读、写、译的基础。然而一方面学生在词汇学习中缺乏积极性、主动性,独立思考与自我反思的能力。另一方面我国新颁布的《义务教育英语课程标准》把学习策略列为教学目标,并明确提出学习策略对提高学生的学习效率具有重要意义。所以,有效的词汇学习策略的指导非常重要。众多词汇学习策略中,元认知策略是一种较高层次的策略,它是指学生自主地对学习内容的计划,学习过程的监控和学习结果的评价。以往研究表明元认知策略对学生学习具有重要意义,但更多的研究关注的是阅读,听力,或者研究对象一般为大学生。而对于初中生词汇学习中元认知策略的培训关注相对较少。所以,本文试图将元认知策略训练与初中英语词汇教学相结合,以实证研究来阐明元认知策略训练在初中英语词汇教学中的可行性和有效性。具体而言,本文主要回答两个研究问题:（1）元认知策略训练对不同水平学生在英语词汇学习中元认知策略的使用有什么影响?（2）元认知策略训练对不同水平学生的英语词汇成绩有什么影响?本文采用实验法和问卷调查法,对甘肃省天水市甘谷县康庄中学九年级两个自然班94名学生进行了为期10周的教学实验,随机选择九年级1班为控制班,采用传统的英语词汇教学;九年级6班为实验班,在词汇教学中应用了元认知策略。实验前,实验班和控制班参加词汇前测、实验班填写元认知策略词汇调查问卷。实验后,对实验班和控制班又一次进行词汇后测,同时实验班学生再次填写元认知策略调查问卷。对实验前和实验后数据应用软件SPSS 22.0进行分析。本文得出以下结论:（1）元认知策略训练对初中生在词汇学习中元认知策略的使用有积极的影响,它能够提高元认知策略的使用频率,尤其是计划和监控策略,然而评价策略的使用训练前后没有显著性变化。此外,元认知策略的训练对不同水平学生的计划、监控、评价策略在英语词汇学习中的使用影响程度不同。具体来说,元认知策略训练对高水平学生计划、监控、评价策略的使用频率都有显著性的提升;训练能够显著提高中水平学生计划和监控策略的使用频率;对低水平学生计划策略的使用频率有着显著性的提高。（2）元认知策略训练对学生英语词汇成绩有积极的影响,它能够有效提高不同水平学生的英语词汇成绩。以上研究结果表明元认知策略的训练对初中生英语词汇教学和学习具有一定的指导意义。因此,在日常教学中,教师应将元认知策略与词汇教学相结合,并对不同水平的学生进行正确的指导,以此来提高词汇教学效率,学生的学习积极性及其自主性,从而提高学生的学习效率。

关键词：元认知策略初中学生词汇学习策略训练

花期低温寡照下外源ALA和DA-6对菊花外观品质影响机理及评价

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花期低温寡照下外源ALA和DA-6对菊花外观品质影响机理及评价

作者：龙宇芸南京信息工程大学

学位级别：硕士

低温寡照是限制设施菊花生长和品质的主要环境因子,而国内外针对花期低温寡照下ALA和DA-6对菊花外观品质影响机理和外观品质评价模型的研究未见报道。本研究于2020年9月至2022年1月在南京信息工程大学在Venlo温室开展环境控制试验,以菊... 详细信息

低温寡照是限制设施菊花生长和品质的主要环境因子,而国内外针对花期低温寡照下ALA和DA-6对菊花外观品质影响机理和外观品质评价模型的研究未见报道。本研究于2020年9月至2022年1月在南京信息工程大学在Venlo温室开展环境控制试验,以菊花‘红面’（‘Hongman’）为试材,设计L（2～1×4～2）正交试验,低温设计(13℃（昼温）/3℃（夜温）、16℃/6℃、19℃/9℃及22℃/12℃)4个水平,寡照设计(200μmol·m s和400μmol·m s)2个水平,持续时间设置3d、6d、9d和12d,以28℃/18℃、800μmol·m s为对照（CK）;选取中度低温寡照(19℃（昼温）/9℃（夜温）、光照强度400μmol·m·s、持续时间6d)和重度低温寡照(13℃（昼温）/3℃（夜温）、光照强度200μmol·m·s、持续时间12d),喷施不同浓度ALA和DA-6,测定菊花叶片光合特性相关参数、衰老特性相关参数及外观品质参数等,确定花期低温寡照胁迫下5-氨基乙酰丙酸（ALA）和N,N-二乙氨基乙醇乙酸酯（DA-6）对菊花‘红面’品质的影响机理,利用模糊综合评价,建立花期低温寡照下ALA和DA-6的菊花综合外观品质的预测模型,以期为设施菊花的低温寡照气象灾害防御提供理论参考。本研究主要结论如下:（1）随温度和光照下降、胁迫天数延长,气孔导度（G）、气孔限制值（L）、蒸腾速率（T）和水分利用率（WUE）、最大净光合速率(P)、光饱和点（LSP）、PSII最大量子效率（F/F）、天线转化效率（F′/F′）、光化学猝灭系数（q P）和PSII实际光化学效率(Φ)呈下降趋势,胞间二氧化碳浓度（C）、光补偿点（LCP）和暗呼吸速率（R）、非光化学猝灭系数（NPQ）则不断上升。在中度、重度低温寡照下喷施ALA发现,G、P、F/F最大值较中胁迫和重胁迫处理增加了分别88.24%、64.29%、16.67%和240%、116.16%、64.29%,C、R、NPQ最小值较中胁迫和重胁迫处理分别降低13.15%、36.63%、20.09%和19.19%、29.80%、27.39%;在此胁迫下喷施DA-6发现,G、P、F/F最大值较中胁迫和重胁迫处理分别增加了70.59%、62.82%、19.44%和260%、112.60%、47.62%,C、R、NPQ最小值较中胁迫和重胁迫处理分别降低11.50%、37.62%、15.24%和17.17%、24.75%、26.90%。（2）随温度下降、胁迫天数延长,叶绿素a（Chl）、叶绿素b（Chl）和类胡萝卜素（Car）含量下降,超氧化物歧化酶（SOD）活性和可溶性蛋白（SP）含量增加,而过氧化物酶（POD）、过氧化氢酶（CAT）活性和丙二醛（MDA）含量则先上升后下降;随光照减弱Chl含量减少,SOD、POD、CAT活性和Car、MDA、SP含量增加。在中度、重度低温寡照下喷施ALA发现,Chl、Chl、SOD最大值较中胁迫和重胁迫处理增加了分别33.81%、16.30%、18.06%和57.55%、34.90%、50.46%,MDA最小值较中胁迫和重胁迫处理分别降低22.59%和39.83%;在此胁迫下喷施DA-6发现,Chl、Chl、SOD最大值较中胁迫和重胁迫处理分别增加了27.35%、9.05%、15.03%和55.26%、13.95%、55.55%,MDA最小值较中胁迫和重胁迫处理分别降低23.27%和50.84%。（3）随温度降低、胁迫天数延长,花径和花枝长度降低,畸形花率和花青素增加;随光照下降,花径、花枝长度增加,畸形花率和花青素有下降趋势。在中度、重度低温寡照下喷施ALA发现,花径、花枝长度、花青素最大值较中胁迫和重胁迫处理增加了分别14.67%、32.69%、36.44%和27.56%、11.21%、71.46%,畸形花率最小值较中胁迫和重胁迫处理分别降低41.07%和40.89%;在此胁迫下喷施DA-6发现,花径、花枝长度、花青素最大值较中胁迫和重胁迫处理增加了分别10.04%、18.15%、21.52%和23.11%、6.90%、86.86%,畸形花率最小值较中胁迫和重胁迫处理分别降低31.89%和37.50%。其中畸形花率受F/F的影响最大,花径受WUE影响最大,花枝长度受AQE影响最大,而花青素含量与P相关性最高。（4）在温度（T）3～12℃、光照（P）200～400μmol·m·s、持续时间（D）3～12d和ALA浓度（C）0～200mg/L与DA-6浓度（C）0～80mg/L区间内采用多元非线性回归发构建了三个模型。模型一:菊花综合外观品质得分与温度、光照、持续时间;模型二:菊花综合外观品质得分与温度、光照、持续时间、ALA浓度;模型三:菊花综合外观品质得分与温度

关键词：花期低温寡照 ALA和DA-6 菊花外观品质模糊综合评价

基于利益相关者视角的煤炭企业经营绩效分析 ——以中煤能源股份...

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作者：李依芸中国海洋大学

学位级别：硕士

在煤炭市场疲软、污染问题日益严重的当今，煤炭企业的发展越来越受到各个利益相关者的制衡，其经济效益也越来越受到各方关注，如何在煤炭企业发展中达到各个利益相关者满意度的均衡，如何协调各利益相关者的利益需求，并统一于企业的... 详细信息

在煤炭市场疲软、污染问题日益严重的当今，煤炭企业的发展越来越受到各个利益相关者的制衡，其经济效益也越来越受到各方关注，如何在煤炭企业发展中达到各个利益相关者满意度的均衡，如何协调各利益相关者的利益需求，并统一于企业的发展目标之中，进而使企业可持续发展，成为社会各界探讨的热点问题。而绩效评价对于企业的发展有着重要的导向作用，也是决策的重要依托，因此本文以利益相关者视角下的企业经营绩效评价作为切入点，分析企业发展中的优劣势，为企业发展提供导引。本文以利益相关者理论为基础，结合绩效评价的相关理论，总结前人的经验与研究成果后，针对煤炭企业现状，探索基于利益相关者视角的企业经营绩效评价的综合方法。首先通过研读大量参考文献，总结前人的经验与研究成果，对煤炭企业的行业特征进行界定，阐述了基于利益相关者视角的煤炭企业经营绩效评价的研究背景和意义。其次，针对煤炭企业利益相关者，选择满足利益相关者要求的绩效评价指标，使用功效系数法，对各指标的实际测算值进行无量纲化处理，选取评价期间所有主营动力煤生产的10个上市煤炭公司为满意值和不允许值的取值范围;计算得到指标值后，采用算术平均法确定各指标权重。最后，以中煤集团为例，计算并得到2010年至2013年该企业年度绩效评价综合得分，结合市场情况，分项对其经营绩效进行纵向对比分析;并与煤炭行业标杆企业——神华集团进行横向对比分析，从而找到中煤集团发展趋势中的短板问题，以及开启应对困境的有效途径。

关键词：利益相关者经营绩效评价煤炭企业

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基于时滞系统理论的网络控制系统H∞控制

基于时滞系统理论的网络控制系统H∞控制

作者：马可芸浙江工业大学

学位级别：硕士

网络控制系统(Networked Control Systems,NCSs)是将控制系统的传感器、执行器和控制器等单元通过网络连接起来的分布式控制系统。NCSs具有连线少、灵活性强、便于故障诊断和信息资源共享等众多优点,但由于网络的介入,控制回路中不可避... 详细信息

网络控制系统(Networked Control Systems,NCSs)是将控制系统的传感器、执行器和控制器等单元通过网络连接起来的分布式控制系统。NCSs具有连线少、灵活性强、便于故障诊断和信息资源共享等众多优点,但由于网络的介入,控制回路中不可避免地出现网络时滞。网络时滞的随机性和时变性使得闭环NCSs也具有了随机和时变性,从而难以用常规线性时不变系统的理论和方法进行系统分析和设计。如何有效地克服网络时滞的影响,设计出满足要求的时滞网络控制器,成为一个重要且亟待解决的问题。近年来,针对网络控制中的诸多问题,人们从各个角度出发,利用各种不同的方法,得到了许多有效的结果,特别是针对网络诱导时滞的研究,成果最为丰富,其中包括随机最优控制方法、异步动态系统(Asynchronous Dynamic System,ADS)理论、模糊控制方法、预测控制方法等。但其中的大部分结果均局限于具有单传感器节点和单执行器节点的NCSs。控制系统引入通信网络的目的并不在于为了提高系统的控制性能,而在于减少布线、突破控制系统地域空间的限制,从而降低系统复杂性,实现控制系统集中化和高效性的运作。因此,将NCSs应用于具有多个传感器和执行器节点的控制系统更能体现网络控制的优越性和价值。本文利用时滞系统理论和线性矩阵不等式(Linear Matrix Inequality,LMI)数学方法,研究了具有多个独立传感器和执行器节点的NCSs的建模、稳定性、H控制等问题,主要工作如下: 1)对网络控制系统的一些基本概念,问题及目前的研究现状做了一个比较详细的综述,并概括介绍了本论文的主要研究工作。 2)针对线性时不变正常被控对象,将具有状态反馈的NCSs建模为一类具有时变时滞的时滞系统。即把一类带有时变时滞的多输入多输出(Multi-input Multi-output,MIMO)网络控制系统描述为一个时滞系统。针对该模型,利用Lyapunov理论及方法和LMI技术进行稳定性分析,提出了一种改进的分析方法,同时也给出了NCSs的时滞依赖的H控制器设计方法,并通过两个例子说明了该方法的有效性。 3)基于Lyapunov-Krasovkii泛函及LMI技术对具有动态输出反馈的MIMO的NCSs进行建模和稳定性分析,得到一个具有更小保守性的系统稳定的充分条件,并以一个实际的具有两个独立传感器和两个独立执行器的NCSs为例展示了该结论的有效性。 4)在以上模型及稳定性分析的基础上,进一步研究了风控制的设计问题,并通过一个例子来展示和说明了该结论的有效性。 5)最后,对全文进行总结,并对进一步的研究提出一些展望。

关键词：网络控制系统网络诱导时滞线性矩阵不等式 H∞控制

高温放线菌V4菌株热稳定β-淀粉酶的产生及其性质的研究

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生物工程学报 1991年第2期7卷 148-153页

作者：周蓓芸郑幼霞中国科学院上海植物生理研究所

高温放线菌V_4菌株(Thermoactinomyces sp.V_4)产生的β-淀粉酶最适反应温度为70℃,最适pH为6,酶的热稳定性良好,50℃(4h)不失去酶活力,55℃(2h)保持最初活力的92%,酶对可溶性淀粉的水解率达77%,纸层析结果显示水解产物主要为麦芽糖,经... 详细信息

高温放线菌V_4菌株(Thermoactinomyces sp.V_4)产生的β-淀粉酶最适反应温度为70℃,最适pH为6,酶的热稳定性良好,50℃(4h)不失去酶活力,55℃(2h)保持最初活力的92%,酶对可溶性淀粉的水解率达77%,纸层析结果显示水解产物主要为麦芽糖,经旋光测定,水解产物具有β-构型。巯基抑制剂对此β-淀粉酶无抑制作用。V_4菌株同时产生异淀粉酸及少量的α-淀粉酶。

关键词： β-淀粉酶耐热性高温放线菌

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CPM信号的定时-相位联合估计算法

计算机工程 2012年第21期38卷 103-106页

作者：刘晓明廖聪汪梦柔重庆大学通信工程学院重庆400030

针对CPM信号同步问题,在判决数据辅助的基础上提出一种联合定时-相位估计算法。该算法用Laurent分解表示CPM信号,由定时-相位联合似然函数得到定时误差检测器和相位误差检测器,找出瞬时梯度,迭代求解恢复出定时和相位信息。通过分析二... 详细信息

针对CPM信号同步问题,在判决数据辅助的基础上提出一种联合定时-相位估计算法。该算法用Laurent分解表示CPM信号,由定时-相位联合似然函数得到定时误差检测器和相位误差检测器,找出瞬时梯度,迭代求解恢复出定时和相位信息。通过分析二进制部分响应CPM中的常见形式PCM/FM信号,提出一种联合定时-相位估计的实现方案。在加性高斯白噪声信道上的仿真结果表明,该算法适用于二进制部分响应CPM信号,定时和相位估计性能都逼近理想曲线。

关键词：连续相位调制定时误差检测器相位误差检测器定时恢复载波相位估计

SENEX基因在急性髓细胞白血病患者中的表达及其意义

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SENEX基因在急性髓细胞白血病患者中的表达及其意义

作者：曹艳芸安徽医科大学

学位级别：硕士

背景急性髓细胞白血病(acute myeloid Leukemia,AML)是成人白血病中最常见的一种类型,起源于髓系干/祖细胞突变引起的血液恶性克隆性疾病,它发病所涉及的机制非常复杂且尚未明确。尽管近年来诊疗技术发展迅速,然而仍有相当一部分患者面... 详细信息

背景急性髓细胞白血病(acute myeloid Leukemia,AML)是成人白血病中最常见的一种类型,起源于髓系干/祖细胞突变引起的血液恶性克隆性疾病,它发病所涉及的机制非常复杂且尚未明确。尽管近年来诊疗技术发展迅速,然而仍有相当一部分患者面临复发或耐药等治疗难题,目前AML的5年总生存率(overall survival,OS)仅为30%-40%,而复发和难治患者的更是低于15%。白血病细胞很难被完全清除杀死,这也造成了难治/复发的问题出现,分析其原因,可能白血病细胞存在某种自我保护机制,促使它可以逃逸化疗药物以及免疫系统的杀伤。细胞衰老是细胞在受到内外因素的压力时,进入一种相对静止且稳定的状态。随着对衰老研究的深入,发现衰老不一定会走向不可逆的凋亡,应激性衰老(stress induced premature senescence,SIPS)是由内外压力因素刺激下提前发生的衰老,当压力解除或环境发生改变后,衰老的细胞有可能会重新复苏,进入细胞周期。而有研究发现肿瘤细胞在放化疗药物等DNA损伤的因素下也会提前出现衰老。SENEX基因是与细胞衰老相关的抗凋亡的新基因,研究表明SENEX基因可介导细胞发生SIPS具有抗凋亡和免疫抑制效应。SENEX基因的特征有利于研究临床AML的复发以及耐药的问题,因此针对SENEX基因参与AML疾病的发生和进展的研究有着重要的价值。目的本课题选择AML患者为研究对象,QRT-PCR检测SENEX基因m RNA表达水平并分析在各个阶段的AML患者(初诊、复发、缓解)和正常对照组的骨髓中的表达特点及差异,明确SENEX基因的表达是否在AML细胞中上调;并将其与AML的临床特征相结合,探讨SENEX基因的表达在AML患者中的临床意义;体外实验利用AML细胞株初步探索SENEX基因在AML中是否通过启动衰老信号通路、抑制促凋亡基因的作用来发挥保护白血病细胞的作用。方法共收集67例已确诊的AML患者的骨髓标本,其中初诊AML患者21例,骨髓缓解AML患者27例,复发的AML患者19例。同时选取12例年龄性别均相匹配的非血液肿瘤疾病的缺铁性贫血患者作为实验对照组。本实验应用实时荧光定量PCR检测SENEX基因在21例初诊AML患者(AML-ND组)、27例骨髓完全缓解的AML患者(AML-CR组)、19例骨髓复发的AML患者(AML-Relapse组)以及12例对照组的骨髓单个核细胞中的表达情况,比较该四组之间的基因表达水平的差异,并分析SENEX基因表达水平与临床特征和疗效的关联。其次在体外实验中,选用细胞毒性药物阿糖胞苷(Ara-c)刺激诱导AML细胞株NB4发生衰老,同时再联合Ara-c与Si RNA共同处理NB4细胞株作为实验组之一,对照组选用等量的PBS处理,72小时后检测并分析Ara-c组与PBS组的SENEX基因m RNA表达水平的差异,同时检测并分析Ara-c组,PBS组以及Ara-c+Si RNA组这三组细胞的凋亡水平。最后利用Si RNA沉默NB4细胞株中的SENEX基因的表达,检测该组及对照组的促凋亡基因(p53、Caspase-3)表达水平,并分析与SENEX基因的相关性。结果***基因表达水平与AML疾病的进展有明显的相关性。AML-ND组和AML-Relapse组SENEX基因表达水平均明显高于正常对照组,同时AML-ND组SENEX基因表达水平明显高于AML-CR组。分析各亚型之间的AML中SEMEX基因的表达,以AML-M3的SENEX基因表达水平最高。AML患者SENEX基因m RNA表达水平与骨髓原始细胞比例存在正相关性。此外分析AML初诊患者的临床特征发现一次化疗缓解的患者(n=14)的SENEX基因表达显著低于一次化疗未缓解的患者(n=7),并且一次化疗未缓解的患者预后均较差。2.体外实验中,Ara-c刺激组的细胞中SENEX基因表达水平显著高于PBS对照组,且Ara-c刺激组的细胞基本处于早期凋亡阶段。而Ara-c+Si RNA组早期凋亡阶段的细胞较Ara-c刺激组显著降低。*** RNA-SENEX转染后,结果发现沉默SENEX基因的表达后会上调促凋亡基因(p53、Caspase-3)的表达。结论SENEX基因的异常表达与AML的发生发展以及预后密切相关。SENEX涉及AML细胞的凋亡途径,它可能通过抑制促凋亡基因的表达来拮抗白血病细胞凋亡。

关键词：急性髓细胞白血病 SENEX 细胞衰老复发凋亡抵抗