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川芎内生菌与品质相关性研究

川芎内生菌与品质相关性研究

作者：汪杨丽成都中医药大学

学位级别：硕士

川芎为伞形科(Umbelliferae)植物川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.)的干燥根茎,是著名的川产道地药材,主产于四川,具有活血行气、祛风止痛功效。已有的研究表明:川芎挥发性类成分具有较强的生理活性,是川芎中的主要活性成分;不同产地... 详细信息

川芎为伞形科(Umbelliferae)植物川芎(Ligusticum chuanxiong Hort.)的干燥根茎,是著名的川产道地药材,主产于四川,具有活血行气、祛风止痛功效。已有的研究表明:川芎挥发性类成分具有较强的生理活性,是川芎中的主要活性成分;不同产地和品种川芎的挥发油含量和组分存在差异,并认为川芎道地药材的成因主要与生态环境中特定的土壤与气候有关。鉴于宏观生态环境的尺度较大,难以解释不同微环境川芎存在品质差异。为此,我们开展了川芎内环境与川芎品质的相关性研究。首先,从不同产地和不同品种的川芎根茎共分离得到内生真菌87株,经形态观察鉴定为1纲、3目、4科、17属。在目的分类水平上以丛梗孢目(Moniliales)为优势种群,包含菌株占总菌株数的94.3%;在属的分类水平上以镰孢属(Fusarium)、曲霉属(Aspergillus)、头孢霉属(Cephalosporium)、拟小卵孢属(Ovulariopsis)为优势种群,包含菌株分别占总菌株数的30.0%、19.5%、14.9%、14.9%。首次揭示不同产地及不同品种川芎内生真菌在数量、分布、种群及其组成存在差异;道地产区的内生真菌种群多样性较非道地产区更丰富;不同产地的内生真菌种群组成中有特有种群,聚类分析表明,四川道地产区都江堰石羊的内生真菌种群结构基本稳定。从川芎根茎中直接提取内生真菌DNA后,以特异性引物扩增真菌的18S rDNA区段,采用扩增核糖体DNA限制性酶切基因分析(ARDRA):不同样品的ARDRA图谱有一定的差异,其中也存在共有的保守条带,体现出不同样品中有效扩增的内生真菌间的亲缘关系与遗传差异。DGGE分离内生真菌只能得到1～2个条带,证实DGGE对500 bp以上的片段检测有局限。其次,对川芎内生细菌的研究。对细菌16S rDNA区段扩增后,经DGGE分析,共检测37个条带,不同样品均得到了数量不等的条带,彼此并且存在特异条带和共同条带,说明不同产地和不同样品间既存在相似的微生物类群又具有其特异的微生物种群;显示出微生物种群的多样性。再其次,采用GC-MS对道地产区和非道地产区的川芎油挥发性成分进行了分析,共分离鉴定48个成分。6个样品共有成分7个,其中均以藁本内酯为主要成分,道地产区比非道地产区的含量,与文献报道的相符。主成分分析法(PAC)表明前5个主成分所包含21个化学成分的累积贡献为100%,足以概括挥发性成分的信息,聚类结果表明川芎油挥发性成分与产地有一定相关性。同时不同产地川芎油中含13.69%～38.38%不等的脂肪酸类成分。最后,用SPSS对内生真菌、内生细菌与挥发油中挥发性成分相关性分析表明:拟小孢卵属的存在与进藁本内酯的呈正相关,而青霉属、沃德属霉属的存在与藁本内酯呈负相关。2006年、2007年的石羊和敖平的内生真菌和川芎油的数据,表明拟小孢卵属的存在对藁本内酯的含量起促进作用。内生细菌与挥发性成分没有发现相关性,其种群结构仅与脂肪酸类成分具有相关性,表明内生细菌仅与植物初生代谢物的形成有关。通过这次研究为川芎道地性的形成提供了一条新解释。

关键词：川芎内生真菌内生细菌 DGGE 品质相关性

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UPLC法同时测定栀子金花丸中11种成分

中草药 2014年第7期45卷 955-959页

作者：陈晓虎苏晶王慧况刚汪杨丽重庆市食品药品检验所重庆401121 重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心重庆401121

目的建立同时测定栀子金花丸中绿原酸、栀子苷、黄芩苷、小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、芦荟大黄素、汉黄芩素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚11种成分的UPLC法。方法采用UPLC法，AcquityUPLCBEHC18色谱柱（100mm×2．1mm，1．7μm）；乙腈（... 详细信息

目的建立同时测定栀子金花丸中绿原酸、栀子苷、黄芩苷、小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、芦荟大黄素、汉黄芩素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚11种成分的UPLC法。方法采用UPLC法，AcquityUPLCBEHC18色谱柱（100mm×2．1mm，1．7μm）；乙腈（A）-0．1％磷酸水溶液（B）为流动相，梯度洗脱；体积流量为0．4mL／min；柱温35℃；检测波长：绿原酸为324nm，栀子苷为238nm，小檗碱为345nm，黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素为276nm，芦荟大黄素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚为254nm。结果被测定的11种成分色谱峰均有良好的分离度，方法精密度、重复性的RSD均小于2％；在室温条件下24h内稳定；各成分均有较宽的线性范围和良好的线性关系（r≥0．9995）；平均加样回收率98．68％～100．47％，RSD均〈1．5％。结论本方法操作简便，测定结果准确可靠，可用于栀子金花丸的质量控制。

关键词：栀子金花丸 UPLC 绿原酸栀子苷黄芩苷小檗碱大黄素

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川芎内生真菌种群稳定性研究

时珍国医国药 2009年第12期20卷 2948-2949页

作者：汪杨丽严铸云重庆市药品检验所重庆401121 成都中医药大学中药材标准化教育部重点实验室四川成都610075

目的探讨四川产区川芎内生真菌种群组成情况。方法采用纯培养法对川芎根茎中的内生真菌进行分类鉴定。结果从4个产地的川芎中共分离得到内生真菌64株,经显微鉴定为1纲、3目、4科、17属;两年分离的内生真菌共有7个,其菌株数量占总菌株数... 详细信息

目的探讨四川产区川芎内生真菌种群组成情况。方法采用纯培养法对川芎根茎中的内生真菌进行分类鉴定。结果从4个产地的川芎中共分离得到内生真菌64株,经显微鉴定为1纲、3目、4科、17属;两年分离的内生真菌共有7个,其菌株数量占总菌株数的81.3%。结论四川产区川芎内生真菌种群结构基本稳定。

关键词：川芎内生真菌种群稳定性

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不同品种和产地川芎油GC-MS分析

中成药 2010年第8期32卷 1433-1435页

作者：汪杨丽严铸云马云桐陈新宋杰万德光成都中医药大学中药材标准化教育部重点实验室四川成都610075 重庆市药品检验所重庆401121

目的:对川芎油进行气质联用成分分析。方法:采用气质联用分析技术对不同产地和品种川芎油进行了比较,并初步比较了6个样品挥发性成分的差异。结果:确定了气质联用分析条件,共鉴定了44种成分,主要组分为藁本内酯。结论:不同产地和品种川... 详细信息

目的:对川芎油进行气质联用成分分析。方法:采用气质联用分析技术对不同产地和品种川芎油进行了比较,并初步比较了6个样品挥发性成分的差异。结果:确定了气质联用分析条件,共鉴定了44种成分,主要组分为藁本内酯。结论:不同产地和品种川芎油中挥发性成分种类及其含量存在差异。

关键词：川芎油 GC/MS 化学成分

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大狼毒内生真菌的分离、鉴定与抑菌活性研究

华西药学杂志 2007年第4期22卷 380-382页

作者：罗静严铸云郭晓恒汪杨丽成都中医药大学药学院四川成都610075

目的分离和鉴定大狼毒根中的内生真菌,并检测其抑菌活性。方法用组织块法分离,点植法对分离菌株进行分类鉴定;选择3种人类病原细菌作为指示菌进行体外抑菌试验。结果分离获得内生真菌41株,鉴定为1纲、4目、6科、15属;其中9株有稳定的抑... 详细信息

目的分离和鉴定大狼毒根中的内生真菌,并检测其抑菌活性。方法用组织块法分离,点植法对分离菌株进行分类鉴定;选择3种人类病原细菌作为指示菌进行体外抑菌试验。结果分离获得内生真菌41株,鉴定为1纲、4目、6科、15属;其中9株有稳定的抑菌活性,尤其对大肠杆菌有显著抑制作用。结论大狼毒根中存在丰富的内生真菌,其代谢产物具有一定的抑菌作用,可作为筛选抑菌活性物质的新资源。

关键词：大狼毒内生真菌分离鉴定抑菌活性

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高效液相色谱法测定丽康宝胶囊中芦荟苷含量

中国药业 2016年第7期25卷 59-60页

作者：汪杨丽重庆市食品药品检验所.重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心重庆401121

目的建立测定丽康宝胶囊中芦荟苷含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为Waters C18柱（150 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为甲醇-1%冰醋酸溶液（45∶55）,流速为1.0 m L/min,检测波长为355 nm。结果芦荟苷进样量在0.134 5~4.307 5μg范围内与... 详细信息

目的建立测定丽康宝胶囊中芦荟苷含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为Waters C18柱（150 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为甲醇-1%冰醋酸溶液（45∶55）,流速为1.0 m L/min,检测波长为355 nm。结果芦荟苷进样量在0.134 5~4.307 5μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 9）,加样回收率为101.12%,RSD=1.12%（n=6）。结论该法简便、准确,重复性好,可作为丽康宝胶囊中芦荟苷的含量测定方法。

关键词：高效液相色谱法丽康宝胶囊芦荟苷

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5种川产合欢花抗抑郁作用比较研究

时珍国医国药 2006年第7期17卷 1168-1169页

作者：向春严铸云李晓华汪杨丽成都中医药大学药学院四川成都610075

目的比较川产五种合欢花抗抑郁作用差异。方法采用小鼠强迫游泳实验和小鼠尾悬挂实验,观察其抗抑郁作用。结果《中国药典》收载品种合欢花(6 g/kg)能明显缩短两种行为绝望小鼠的不动时间,而其他品种的合欢花均未显著缩短两种行为绝望小... 详细信息

目的比较川产五种合欢花抗抑郁作用差异。方法采用小鼠强迫游泳实验和小鼠尾悬挂实验,观察其抗抑郁作用。结果《中国药典》收载品种合欢花(6 g/kg)能明显缩短两种行为绝望小鼠的不动时间,而其他品种的合欢花均未显著缩短两种行为绝望小鼠的不动时间。结论根据初步研究,合欢花具有抗抑郁活性,其他混淆品种合欢花没有显著的抗抑郁作用。

关键词：合欢花抗抑郁

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川芎内生真菌的分离与鉴定

中国中药杂志 2008年第9期33卷 999-1001页

作者：汪杨丽严铸云郭晓恒宋杰陈新万德光成都中医药大学药学院中药材标准化实验室四川成都610075

目的:探讨川芎内生真菌类群与川芎品种和产地的关系。方法:采用平板分离法分离川芎的内生真菌,采用点植法对分离菌株进行分类鉴定。结果:从6个产地的川芎根茎样品共获得内生真菌50株,经形态观察分类鉴定为1纲、3目、4科、13属。结论:不... 详细信息

目的:探讨川芎内生真菌类群与川芎品种和产地的关系。方法:采用平板分离法分离川芎的内生真菌,采用点植法对分离菌株进行分类鉴定。结果:从6个产地的川芎根茎样品共获得内生真菌50株,经形态观察分类鉴定为1纲、3目、4科、13属。结论:不同产地及不同品种川芎的内生真菌在数量、分布、种群及其组成存在差异,推测川芎内生真菌种群可能和川芎的特定生境有关。

关键词：川芎内生真菌分离鉴定

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银杏内生真菌菌种的分离及鉴定

华西药学杂志 2006年第5期21卷 425-427页

作者：严铸云庞蕾罗静汪杨丽陈新万德光成都中医药大学药学院四川成都610075 西南大学基础科技学院重庆400716

目的对4个不同来源银杏G inkgo bilobaL.的根、茎中内生真菌进行分离、鉴定。方法用组织块法分离,用点植法对分离菌株进行分类鉴定。结果分离获得内生真菌178株,鉴定为1纲、4目、6科、28属。结论不同来源的银杏内生真菌的种群、数量及... 详细信息

目的对4个不同来源银杏G inkgo bilobaL.的根、茎中内生真菌进行分离、鉴定。方法用组织块法分离,用点植法对分离菌株进行分类鉴定。结果分离获得内生真菌178株,鉴定为1纲、4目、6科、28属。结论不同来源的银杏内生真菌的种群、数量及分布部位存在着显著差异。

关键词：银杏内生真菌多样性