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用表达性差异显示分析技术分离人胎肝组织选择性表达基因

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中国应用生理学杂志 2001年第2期17卷 192-194页

作者：许望翔魏汉东汪思应杨晓明军事医学科学院放射医学研究所北京100850 安徽医科大学病理生理教研室安徽合肥230032

目的 :建立 4月龄人胎肝组织选择性表达基因EST库 ,为研究胚胎肝组织特异表达基因提供有力的工具。方法 :采用表达性差异显示分析 (representationaldifferenceanalysis,RDA)技术建立 4月龄人胎肝组织选择性表达基因EST库 ,并测定部分... 详细信息

目的 :建立 4月龄人胎肝组织选择性表达基因EST库 ,为研究胚胎肝组织特异表达基因提供有力的工具。方法 :采用表达性差异显示分析 (representationaldifferenceanalysis,RDA)技术建立 4月龄人胎肝组织选择性表达基因EST库 ,并测定部分克隆核苷酸序列 ,以竞争PCR检测代表性基因的差异表达。结果与结论 :以珠蛋白家族基因为标志 ,所建差减cDNA文库中α 珠蛋白家族基因的表达频率较未差减cDNA文库增高 7倍 ,同时该文库也含有多种与肝生长密切相关的基因 ,表明RDA技术确是研究差异表达基因的有效手段 ,所建EST库富集胎肝特异表达基因 .部分克隆序列分析获得 2种未报道序列 ,其中一株含有丝 /苏氨酸激酶结构域。

关键词：人胎肝基因表达基因分离表达性差异显示分析技术

在NIH3T3细胞中高表达EDAG-1基因导致细胞恶性转化

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2002年第1期34卷 95-98页

作者：闾军许望翔汪思应江岩李长燕蔡卫民杨晓明军事医学科学院放射医学研究所杭州710006 北京100850 军事医学科学院放射医学研究所浙江大学医学院第一附属医院传染病研究所

探讨一种新近克隆的特异表达在造血系统组织和细胞中的胚胎发育相关新基因 (EDAG 1)的生物学功能。构建EDAG 1真核表达载体pcDNA3.1(+) EDAG 1,以脂质体法将其稳定转染入NIH3T3细胞中 ,结果发现高表达EDAG 1的NIH3T3细胞失去了正常的... 详细信息

探讨一种新近克隆的特异表达在造血系统组织和细胞中的胚胎发育相关新基因 (EDAG 1)的生物学功能。构建EDAG 1真核表达载体pcDNA3.1(+) EDAG 1,以脂质体法将其稳定转染入NIH3T3细胞中 ,结果发现高表达EDAG 1的NIH3T3细胞失去了正常的平行走向及接触抑制现象 ,侵袭力较正常增强约 10倍并获得锚定不依赖生长能力。将该细胞株皮下接种裸鼠 ,受鼠在 4周左右 10 0 % (6 / 6 )成瘤。这些结果表明EDAG 1是一种具有转化活性的新基因 ,可能与肿瘤发生、发展密切相关

关键词： EDAG-1 基因表达转化

EDAG-1,一种与造血调控密切相关新基因的分离和确认

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第6期33卷 641-646页

作者：闾军许望翔汪思应詹轶群江岩蔡卫民杨晓明合肥23 北京100850 浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所军事医学科学院放射医学研究所杭州710006 安徽医科大学病理生理学教研室军事医学科学院放射医学研究所

以代表性差异显示分析技术 (RDA)获得一种在人胎肝组织中高丰度表达的胚胎发育相关基因 1(embry onicdevelopassociatedgene 1,EDAG 1) ,经筛选cDNA文库及 5′末端cDNA快速扩增技术 (rapidamplificationofcDNA 5′end ,5′RACE)获得其... 详细信息

以代表性差异显示分析技术 (RDA)获得一种在人胎肝组织中高丰度表达的胚胎发育相关基因 1(embry onicdevelopassociatedgene 1,EDAG 1) ,经筛选cDNA文库及 5′末端cDNA快速扩增技术 (rapidamplificationofcDNA 5′end ,5′RACE)获得其全长为 2 16 6bp的cDNA。该基因含编码 484个氨基酸组成蛋白质的ORF ,Blast检索表明编码蛋白质不含任何已知蛋白质功能结构域 ,与小鼠Hemogen及大鼠RP5 9基因同源。其mRNA 3′端非翻译区序列含 2拷贝AUUUA结构 ,表明该基因mRNA稳定性差。体外翻译证明该基因编码蛋白质分子量为 5 5 .3kD ,与理论预测值一致。Northern杂交及PCR检测表明该基因主要表达在成人骨髓及胚胎肝组织 ,在K5 6 2和MO7e两株人髓性白血病细胞系中也有较高丰度表达。氯高铁血红素及红细胞生成素EPO (erythropoietin)诱导K5 6 2细胞向红系分化过程中 ,EDAG 1的表达随细胞的分化迅速下调 ;这些结果提示EDAG 1可能是一种与造血细胞分化调控密切相关的新基因。

关键词： EDAG1 K562细胞分化造血调控

MiR-130a靶向调控CYLD基因及其对肝癌细胞增殖的影响

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世界华人消化杂志 2014年第11期22卷 1504-1509页

作者：倪芳赵华汪心怡陈卓汪思应安徽医科大学基础医学院病理生理学教研室安徽省合肥市230032

目的:检测microRNA-130a(miR-130a)在肝癌中的表达水平及其对CYLD基因表达的调控,并探讨miR-130a对肝癌细胞增殖的影响.方法:采用qRT-PCR检测miR-130a在原发性肝癌组织及对应的癌旁组织、肝癌细胞系和正常肝细胞中的表达差异,利用靶基... 详细信息

目的:检测microRNA-130a(miR-130a)在肝癌中的表达水平及其对CYLD基因表达的调控,并探讨miR-130a对肝癌细胞增殖的影响.方法:采用qRT-PCR检测miR-130a在原发性肝癌组织及对应的癌旁组织、肝癌细胞系和正常肝细胞中的表达差异,利用靶基因预测分析软件预测miR-130a潜在靶基因CYLD后,构建携带靶基因CYLD野生型及突变型3'UTR序列的双荧光素酶报告基因质粒,应用双荧光素酶报告基因实验体系进行验证;采用miR-130a抑制剂下调肝癌细胞系HepG2中miR-130a的表达,Western blot检测CYLD蛋白的表达变化;MTT法检测肝癌细胞增殖的改变.结果:MiR-130a在原发性肝癌组织中的表达明显高于对应的癌旁组织(P<0.05),在肝癌细胞系中的表达也显著高于正常肝细胞(P<0.05);双荧光素酶报告基因系统验证CYLD是miR-130a的直接靶基因;HepG2细胞中转染miR-130a抑制剂下调miR-130a表达后.Western blot检测结果显示CYLD蛋白表达水平显著上调;miR-130a抑制剂转染的HepG2细胞其增殖受到明显抑制.结论:MiR-130a在肝癌中表达上调,下调miR-130a后可以促进靶基因CYLD的表达,并可以抑制肝癌细胞的增殖活性,miR-130a有可能成为原发性肝癌治疗的新靶点.

关键词：原发性肝细胞癌 MiRNA-130a CYLD 增殖

X线全身照射与低剂量环磷酰胺合用对实验性肺转移的抑制作用

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中国肿瘤临床 1996年第5期23卷 305-308页

作者：金敖兴黄帼魏道严汪思应安徽医科大学核医学教研室安徽医科大学肿瘤研究室

７５ｍＧｙ一次全身Ｘ线照射后，小鼠实验性肺肿瘤转移结节明显减少；与低剂量环磷酰胺（ＣＴＸ）合用，抗肿瘤转移作用亦较强。荷瘤小鼠７５ｍＧｙ照射后，脾脏ＮＫ细胞活性、ＬＡＫ细胞活性以及对白细胞介素Ⅱ（ＩＬ－２）的反应性明... 详细信息

７５ｍＧｙ一次全身Ｘ线照射后，小鼠实验性肺肿瘤转移结节明显减少；与低剂量环磷酰胺（ＣＴＸ）合用，抗肿瘤转移作用亦较强。荷瘤小鼠７５ｍＧｙ照射后，脾脏ＮＫ细胞活性、ＬＡＫ细胞活性以及对白细胞介素Ⅱ（ＩＬ－２）的反应性明显增强或升高；与ＣＴＸ合用时上述抗肿瘤免疫功能也增强。结果表明：７５ｍＧｙＸ线全身照射可通过激活体内抗肿瘤免疫而具有有效的抗转移效果，它为探讨小剂量照射临床应用可能性提供了可靠的实验依据。

关键词：肺肿瘤肿瘤转移 X线照射环磷酰胺

去泛素化酶USP10通过稳定Smurf1抑制TGF-β/BMP信号通路

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生物化学与生物物理进展 2023年第4期50卷 760-769页

作者：张新李洪昌汪思应张令强安徽医科大学基础医学院合肥230032 军事科学院军事医学研究院生命组学研究所国家蛋白质科学中心(北京)北京102200

目的探究生理条件下去泛素化酶USP10调控的关键信号通路及分子机制。方法利用GEO2R和Metascape对Usp10+/+和Usp10-/-新生小鼠肾组织基因芯片(GSE198574)差异表达基因和通路富集分析,使用免疫印迹实验和免疫组化技术检验核心转录因子... 详细信息

目的探究生理条件下去泛素化酶USP10调控的关键信号通路及分子机制。方法利用GEO2R和Metascape对Usp10+/+和Usp10-/-新生小鼠肾组织基因芯片(GSE198574)差异表达基因和通路富集分析,使用免疫印迹实验和免疫组化技术检验核心转录因子的表达情况;进一步利用免疫印迹检测该信号通路,并通过基因芯片和免疫组化分析候选分子的表达情况;使用免疫共沉淀(Co-IP)和GST-pull down实验验证USP10与候选分子的相互作用,通过泛素化实验明确USP10对底物分子的调控机制;利用免疫印迹检测细胞增殖、凋亡相关蛋白p21、Cleaved-caspase 3的表达情况,使用CCK-8和克隆形成实验分析USP10对细胞增殖的影响。结果 Usp10-/-新生小鼠肾组织中TGF-β/BMP通路激活,USP10在小鼠体内缺失后导致Smad泛素相关因子1 (Smurf1)蛋白质水平降低,Smad1/5蛋白质水平上调,却不影响它们的转录水平;机制上,USP10与Smurf1存在相互作用,并依赖其去泛素化酶活性去除Smurf1多聚泛素化。Usp10敲除后促进细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白p21表达上调,并抑制细胞的增殖能力。结论 USP10通过去泛素化并稳定Smurf1,抑制TGF-β/BMP信号通路,从而维持小鼠组织器官和细胞增殖稳态。

关键词： USP10 Smurf1 Smad1/5 去泛素化细胞增殖

肝部分切除及表皮生长因子迅速诱导PC3基因的表达

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科学通报 2000年第20期45卷 2205-2209页

作者：王阁汪思应许望翔杨晓明军事医学科学院放射医学研究所北京100850

2/3肝部分切除后数小时内早期反应基因的表达在肝细胞由G0到G1期的转变和G1期进程中起关键作用. 利用表达性差异显示分析技术研究了2/3肝部分切除后1 h的基因表达差异, 序列分析揭示一种由神经生长因子(NGF)诱导产生的瞬时早期反应基因... 详细信息

2/3肝部分切除后数小时内早期反应基因的表达在肝细胞由G0到G1期的转变和G1期进程中起关键作用. 利用表达性差异显示分析技术研究了2/3肝部分切除后1 h的基因表达差异, 序列分析揭示一种由神经生长因子(NGF)诱导产生的瞬时早期反应基因PC3基因可能与肝再生调控有关, 进而以Northern杂交证实2/3肝部分切除可迅速诱导PC3基因的表达, 其表达高峰为术后1～2 h, EGF在原代培养大鼠肝细胞体系中可迅速诱导表达PC3基因, 提示PC3基因是一种与肝再生调控密切相关的早期反应基因.

关键词：肝再生 PC3基因肝部分切除细胞

MCFP慢病毒干涉载体及HepG2稳定细胞系的构建

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世界华人消化杂志 2011年第11期19卷 1115-1121页

作者：笪倩于淼杨晓明汪思应中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京市100850 安徽医科大学病理生理学教研室安徽省合肥市230032

目的:研究线粒体转运蛋白质超家族新成员SLC25A40(MCFP)RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体对人肝癌细胞系HepG2细胞中MCFP基因的沉默效果.方法:通过RNAi序列设计软件进行MCFP干涉片段设计,筛选出MCFP基因的RNAi有效靶序列,进一步合成靶序列的... 详细信息

目的:研究线粒体转运蛋白质超家族新成员SLC25A40(MCFP)RNA干扰(RNAi)慢病毒表达载体对人肝癌细胞系HepG2细胞中MCFP基因的沉默效果.方法:通过RNAi序列设计软件进行MCFP干涉片段设计,筛选出MCFP基因的RNAi有效靶序列,进一步合成靶序列的OligoDNA,构建pSiCoR-MCFP慢病毒载体并包装产生慢病毒干涉毒液.运用病毒感染HepG2细胞获得稳定干涉MCFP的细胞株,利用PCR和Westernblot方法检测稳定细胞株中MCFP的干涉效果.结果:成功构建具有MCFP干涉效果的慢病毒干涉载体并获得了稳定干涉MCFP及对照的HepG2细胞株.收集慢病毒上清,流式测定干涉病毒滴度为1.45×1010pfu/L,对照病毒滴度为1.78×1010pfu/***和Westernblot实验均证实干涉MCFP后,HepG2细胞株中MCFP蛋白表达水平明显降低(P<0.001).结论:成功构建具有MCFP干涉效果的慢病毒干涉载体及稳定干涉MCFP的HepG2细胞株.

关键词：慢病毒线粒体转运蛋白超家族成员 RNA干扰人肝癌细胞系HepG2

TNF-α诱导肝干细胞凋亡及信号转导途径的改变

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世界华人消化杂志 2010年第7期18卷 707-710页

作者：余科科汪思应安徽医科大学基础医学院安徽省合肥市230032

目的:研究肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导肝干细胞(WB细胞)凋亡及其信号转导机制.方法:WB细胞经TNF-α诱导不同时间,用流式细胞术(FCS)检测细胞凋亡及细胞周期改变;用核酸提取及电泳技术检测细胞DNA的变化;经Wes... 详细信息

目的:研究肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导肝干细胞(WB细胞)凋亡及其信号转导机制.方法:WB细胞经TNF-α诱导不同时间,用流式细胞术(FCS)检测细胞凋亡及细胞周期改变;用核酸提取及电泳技术检测细胞DNA的变化;经Western blot检测TNF-α诱导WB细胞与凋亡有关分子的改变.结果:TNF-α诱导WB细胞24h,FCS发现51%细胞凋亡,核酸电泳出现DNA"ladder"现象;同时与细胞凋亡相关的转录因子NF-κB核内转移,活化的凋亡蛋白酶caspase-3增多,而与细胞增殖相关的信号转导途径被阻断-磷酸化的Erk/Akt水平下调.结论:经TNF-α诱导,与凋亡相关的信号分子caspases-3被激活,而与细胞增殖有关的信号途径被阻断(p-Erk/Akt)下调,导致细胞可能发生增殖阻滞而凋亡.

关键词：肿瘤坏死因子α 肝干细胞细胞凋亡磷酸化信号转导