检索结果-南通市图书馆

TMFD81L型自调匀整并条机的几项使用要点

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棉纺织技术 2024年第3期52卷 85-85页

作者：刘文博孙先会杨现实汪志艳东湖兴纺织有限公司

(1)密码设置管理。UQA系统默认密码必须由4位数字组成,在生产运行中,质量管理部门必须设置密码以加强质量管理,并定期对密码进行修改优化,防止外泄。并建立专门的文档用以管理,避免密码丢失带来操作上不必要的麻烦。(2)棉条超大定量设... 详细信息

(1)密码设置管理。UQA系统默认密码必须由4位数字组成,在生产运行中,质量管理部门必须设置密码以加强质量管理,并定期对密码进行修改优化,防止外泄。并建立专门的文档用以管理,避免密码丢失带来操作上不必要的麻烦。(2)棉条超大定量设置应用。TMFD81L型并条机自调匀整系统默认棉条定量目标上限为40.00 g/5 m,实测定量输入上限为40.00 g/5 m。

关键词：自调匀整系统使用要点并条机密码设置质量管理部门棉条定量目标设置应用

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铜矿渣用于地铁防水的研究进展

山西建筑 2023年第3期49卷 1-8页

作者：汪志艳方从启上海师范大学建筑工程学院上海201418 上海交通大学船舶海洋与建筑工程学院上海200240

通过总结国内外有关铜渣、铜渣混凝土的资料,并对其进行综述,思考如何充分利用铜渣混凝土的力学性能和耐久性,如在掺入铜矿渣会降低混凝土的早期强度时,提出改变水灰比、降低掺量等方法来缓解不良影响。

关键词：水灰比铜矿渣耐久性力学性能

PRRSV recCH-1R嵌合病毒构建及PRRS和CSF活疫苗细胞免疫评价

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PRRSV recCH-1R嵌合病毒构建及PRRS和CSF活疫苗细胞免疫评价

作者：汪志艳中国农业科学院

学位级别：硕士

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是一种主要以妊娠母猪的繁殖障碍和仔猪严重的呼吸道症状为主要特征的传染病。PRRS自暴发以来，给全球养猪业带来了巨大的经济损失。该病的病原体-猪繁殖与呼... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是一种主要以妊娠母猪的繁殖障碍和仔猪严重的呼吸道症状为主要特征的传染病。PRRS自暴发以来，给全球养猪业带来了巨大的经济损失。该病的病原体-猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)，属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属，为有囊膜的单股正链RNA病毒。本实验室成功构建了CH-1R致弱毒株(CH-1a传代第171代)的全长cDNA分子克隆rCH-1R，并获得了该克隆的拯救病毒-recCH-1R。在本研究中，将PCV2-Cap基因插入到rCH-1R的ORF1b 和ORF2a之间;然后，分别用高致病性PRRSVHuN4株的GP5基因和GP5+M基因替换rCH-1R株的相应基因，最终成功获得了3株嵌合病毒：recCH-1R-PCV2-Cap、recCH-1R-HuN4-GP5和recCH-1R-HuN4-GP5+M。通过RT-PCR检测、细胞病变观察、间接免疫荧光试验、电镜观察和一步生长曲线等方法鉴定所获得的3株嵌合病毒的生物学特性，结果表明嵌合病毒recCH-1R-PCV2-Cap的CPE、病毒粒子形态以及增殖等生物学特性与亲本病毒recCH-1R相似，间接免疫荧光试验证明嵌合病毒recCH-1R-PCV2-Cap能与PRRSV阳性血清和PCV2-Cap单抗发生反应;嵌合病毒recCH-1R-HuN4-GP5和recCH-1R-HuN4-GP5+M和亲本病毒相比，只有CPE形态有所改变，表现为聚堆、脱落，证明成功地拯救了3株嵌合病毒。在体外Marc-145细胞传代中，嵌合病毒recCH-1R-PCV2-Cap中PCV2Cap基因出现不同的缺失，而嵌合病毒recCH-1R-HuN4-GP5和recCH-1R-HuN4-GP5+M分别从第8代和第16代开始发生回复突变，替换的HuN4GP5蛋白和GP5+M蛋白的氨基酸序列均突变回recCH-1R株相应蛋白的氨基酸序列，显示PRRSVrecCH-1R株具有较强的自我修复的作用。本研究建立了猪全血中细胞因子IFN-γ、IL-2和TNF-αTaqMan荧光定量RT-PCR检测方法，该方法在101～108拷贝/μL模板范围内具有良好的线性关系，相关系数R2为0.999。利用该方法对猪瘟(CSF)活疫苗、PRRSCH-1R活疫苗和PRRSVrecCH-1R株免疫仔猪后的细胞免疫水平进行了评价。研究结果显示：①CSF疫苗免疫组CSFV刺激全血细胞相对于空白对照全血细胞， IFN-γ、IL-2和TNF-αmRNA水平在免疫后3～10d之间均显著升高(p＜0.05)，IFN-γmRNA在14d仍保持高水平表达;对照组细胞CSFV刺激细胞和空白对照细胞的3种细胞因子mRNA水平无明显差异(p＞0.05);CSF活疫苗免疫之后CD4+CD8+细胞比例逐渐上升，表明CSF活疫苗免疫猪只后，能够诱导细胞免疫应答。②PRRSCH-1R活疫苗和PRRSVrecCH-1R株免疫组的PRRSV刺激全血细胞相对于空白对照全血细胞，IL-2mRNA表达量在免疫后7d和28d均显著升高(p＜0.05)，而在14d均显著降低(p＜0.05);TNF-αmRNA表达量在免疫后3～28d均显著升高(p＜0.05)，除了第14d;但是只有个别样品能检测出IFN-γmRNA表达水平;PRRSVCH-1R活疫苗和PRRSVrecCH-1R株免疫后，CD4CD8比例逐渐上升，而CD4CD8细胞比例逐渐下降，说明recCH-1R和CH-1R活疫苗均能诱导机体产生细胞免疫反应。以上实验结果表明，TNF-α、IL-2可以作为细胞免疫评价的指标之一。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒猪圆环病毒2型 PRRSV rCH-1R感染性克隆荧光定量PCR 细胞免疫评价 IFN-γ IL-2 TNF-α

犬轮状病毒单克隆抗体制备及胶体金试纸条检测方法的建立

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中国畜牧兽医 2022年第11期49卷 4429-4437页

作者：赵少若黄甜郝丽影吴洪超汪志艳崔宁宁王亚玲邓均华田克恭洛阳普泰生物技术有限公司洛阳471000 国家兽用药品工程技术研究中心洛阳471000 北京金诺百泰生物技术有限公司北京101300

【目的】研发犬轮状病毒(Canine ratavirus,CRV)免疫学诊断试剂,制备并鉴定CRV特异性单克隆抗体,建立可用于检测CRV的胶体金免疫层析法。【方法】以CRV临床分离株SL006株为免疫原免疫BALB/c雌性小鼠,用杂交瘤细胞法进行细胞融合,通过间... 详细信息

【目的】研发犬轮状病毒(Canine ratavirus,CRV)免疫学诊断试剂,制备并鉴定CRV特异性单克隆抗体,建立可用于检测CRV的胶体金免疫层析法。【方法】以CRV临床分离株SL006株为免疫原免疫BALB/c雌性小鼠,用杂交瘤细胞法进行细胞融合,通过间接免疫荧光法(IFA)筛选可稳定分泌CRV单克隆抗体的杂交瘤细胞,并制备腹水,亲和层析法进行纯化获得单克隆抗体。对获得的单克隆抗体进行鉴定,经条件优化建立胶体金试纸条检测方法,对试纸条的灵敏度、特异性、重复性和应用情况进行评价。【结果】获得了4株杂交瘤细胞,分别命名为2C12、4A5、1H3、5F3,IFA效价分别为1∶6400、1∶12800、1∶1600和1∶3200;重链亚类分别为IgG2b、IgG2a、IgG1和IgG2a,轻链亚类均为kappa;制备的胶体金试纸条检测线包被单克隆抗体4A5,对照线包被羊抗鼠IgG,金标垫包被胶体金标记的单克隆抗体2C12,对CRV病毒液的检测灵敏度为10TCID/mL,检测犬源其他病毒犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)、犬副流感病毒(Canine parainfluenza virus,CPIV)、犬腺病毒Ⅰ型(Canine adenovirus-Ⅰ,CAV-Ⅰ)、CAV-Ⅱ、犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)病毒液及CRV阴性肛拭子和阴性粪便均为阴性;批内和批间重复性良好;利用制备的胶体金试纸条和RT-PCR方法对47份样品进行检测比较,两者符合率为93.6%。【结论】本研究建立的CRV胶体金试纸条检测方法具有良好的敏感性、特异性、重复性,与RT-PCR方法符合率较高,可为CRV的临床快速诊断提供有效的检测方法。

关键词：犬轮状病毒(CRV) 单克隆抗体胶体金试纸条

猪伪狂犬病病毒gB、gC和gD蛋白的表达及诊断抗原筛选

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动物医学进展 2023年第4期44卷 12-19页

作者：潘姣姣王同燕郭玲花白小飞汪志艳孙杰徐鑫王玉宙郝丽影邓均华谭菲菲田克恭洛阳普泰生物技术有限公司河南洛阳471000 国家兽用药品工程技术研究中心河南洛阳471000 普莱柯生物工程股份有限公司河南洛阳471000

为研发猪伪狂犬病的免疫学诊断试剂,利用杆状病毒表达系统表达了猪伪狂犬病病毒(PRV)gB、gC和gD蛋白,并对蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定;将纯化后的3种蛋白分别制备成不同蛋白类型的疫苗免疫健康仔猪,比较蛋白的免疫原性;将3种蛋... 详细信息

为研发猪伪狂犬病的免疫学诊断试剂,利用杆状病毒表达系统表达了猪伪狂犬病病毒(PRV)gB、gC和gD蛋白,并对蛋白进行SDS-PAGE和Western blot鉴定;将纯化后的3种蛋白分别制备成不同蛋白类型的疫苗免疫健康仔猪,比较蛋白的免疫原性;将3种蛋白分别作为包被抗原建立间接ELISA方法,检测从不同地区收集的临床血清,与PRV中和试验检测结果进行了比较。结果显示,成功拯救出重组杆状病毒rPRV-gB-His株、rPRV-gC-His株和rPRV-gD-His株,经IFA鉴定,均可与猪伪狂犬病病毒阳性血清发生特异性反应;表达出的蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定,可见大小分别约为120 ku、65 ku和50 ku的蛋白条带;3种蛋白免疫原性比较结果显示gD蛋白疫苗免疫组猪血清中和效价最高(1∶22.4~1∶32.0);3种蛋白建立的间接ELISA方法检测30份临床血清,结果gD蛋白作为包被抗原建立的ELISA方法与PRV中和试验的符合率最高(100.0%)。表明gD蛋白是更好的诊断抗原,可用于PRV抗体检测试剂盒的开发。

关键词：猪伪狂犬病病毒 gD蛋白免疫原性诊断抗原

猪δ冠状病毒HeN10株的分离鉴定及致病性研究

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中国畜牧兽医 2021年第8期48卷 2982-2989页

作者：汪志艳孙玉洁徐鑫黄柏成田克恭国家兽用药品工程技术研究中心洛阳471003

本研究旨在获得猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)地方分离株,并对其生物学特性和致病性进行初步研究。使用猪睾丸(ST)细胞分离来自河南某猪场PDCoV阳性病料中的病毒,并通过观察细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)、反转... 详细信息

本研究旨在获得猪δ冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)地方分离株,并对其生物学特性和致病性进行初步研究。使用猪睾丸(ST)细胞分离来自河南某猪场PDCoV阳性病料中的病毒,并通过观察细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)、反转录PCR、间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)、电镜观察、S基因序列分析等方法进行鉴定,同时评价分离毒株在仔猪上的致病性。结果显示,阳性病料接种ST细胞后,病毒稳定增殖并连续传代至第10代;自第4代开始,感染细胞发生CPE,呈圆缩、拉网、碎裂、脱落状态;IFA鉴定为PDCoV阳性,且电镜观察可见带有刺突的冠状病毒粒子。将分离到的PDCoV命名为HeN10,其S基因序列与中国SD株相似性最高,达99.8%,与国内报道毒株CHN-JS-2017株和CHN-HeB1-2017株等处于同一分支。将HeN10株以5×106.3 TCID 50/头的剂量口服感染5头10日龄健康易感仔猪,可导致所有感染仔猪发生水样腹泻。本研究成功分离了PDCoV HeN10株,其与SD株等国内流行毒株处于同一分支,攻毒后可引起仔猪典型腹泻症状,可为下一步诊断方法及疫苗相关研究奠定一定的基础。

关键词：猪δ冠状病毒(PDCoV) 分离鉴定序列分析致病性

猪源凋亡相关基因SYBR Green Ⅰ荧光定量RT-PCR方法的建立

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中国预防兽医学报 2013年第5期35卷 369-373页

作者：李玉明王刚汪志艳刘永刚涂亚斌王淑杰姜成刚王延群蔡雪辉东北农业大学黑龙江哈尔滨150001 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断中心黑龙江哈尔滨150001

为检测高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染的猪胸腺中凋亡相关因子的变化,本研究针对猪TNF-α、TNFR1、FasL、Fas、Bax、Bcl-2、caspase-3基因及内参β-actin基因设计特异性引物,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标... 详细信息

为检测高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染的猪胸腺中凋亡相关因子的变化,本研究针对猪TNF-α、TNFR1、FasL、Fas、Bax、Bcl-2、caspase-3基因及内参β-actin基因设计特异性引物,构建含有各自引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测TNF-α、TNFR1、FasL、Fas、Bax、Bcl-2、caspase-3基因的SYBR Green I qRT-PCR方法。结果显示,该方法线性关系好(R2≥0.998),敏感性高,初始模板的检出下限为10拷贝/μL;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性好,批内、批间重复试验的变异系数均小于3%,具有良好的重复性。本研究为细胞凋亡相关因子变化趋势的研究提供方法。

关键词：猪凋亡相关基因荧光定量PCR SYBR Green Ⅰ

牛α干扰素在毕赤酵母中的高效分泌表达及活性鉴定

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中国预防兽医学报 2013年第10期35卷 845-848页

作者：王延群张璐李玉明汪志艳金家民刘永刚王刚王淑杰姜成刚涂亚斌蔡雪辉中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断中心黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为高效分泌表达牛α干扰素(boIFN-α),本研究通过人工合成boIFN-α基因,将目的基因克隆至表达载体pPIC9K中,构建重组质粒pPIC9K-boIFN-α,将其电转化于毕赤酵母菌株GS115,利用抗药选择压力G418筛选重组菌,对重组菌诱导表达,取上清进行SD... 详细信息

为高效分泌表达牛α干扰素(boIFN-α),本研究通过人工合成boIFN-α基因,将目的基因克隆至表达载体pPIC9K中,构建重组质粒pPIC9K-boIFN-α,将其电转化于毕赤酵母菌株GS115,利用抗药选择压力G418筛选重组菌,对重组菌诱导表达,取上清进行SDS-PAGE和western blot检测,并优化重组菌的诱导表达条件。结果显示:筛选获得高效分泌表达boIFN-α的重组菌,其最佳诱导条件为:250 r/min,26℃培养,1%甲醇浓度诱导,诱导72 h。上清中目的蛋白表达量最高可达200μg/mL,本研究为boIFN-α在生产中的应用奠定了基础。

关键词：牛IFN-α 毕赤酵母分泌表达

基于单克隆抗体捕获的猪血清和乳汁中PEDVIgA抗体间接ELISA方法的建立和评估

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中国畜牧兽医 2020年第7期47卷 2248-2255页

作者：王治平张云静孙玉洁徐鑫汪志艳黄柏成田克恭国家兽用药品工程技术研究中心洛阳471003

为快速准确地评价猪血清和乳汁中猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)IgA抗体水平,本研究从4株PEDV单克隆抗体中筛选得到1株可高效捕获PEDV全病毒粒子(灭活的病毒细胞培养原液)的特异性IgG单克隆抗体8A3,将其用作... 详细信息

为快速准确地评价猪血清和乳汁中猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)IgA抗体水平,本研究从4株PEDV单克隆抗体中筛选得到1株可高效捕获PEDV全病毒粒子(灭活的病毒细胞培养原液)的特异性IgG单克隆抗体8A3,将其用作检测孔内的包被抗体以捕获病毒粒子制备抗原板,从而建立了用于检测母猪血清和乳汁中PEDV特异性IgA抗体的间接ELISA方法。该方法中,单克隆抗体8A3的最适包被浓度为6.0μg/mL,阴性判定临界值(D450 nm)为0.34,且在检测中不与常见的猪病毒阳性血清反应。与传统的免疫过氧化物酶单层检测(immuno-peroxidase monolayer assay,IPMA)相比,所建立的ELISA方法检测阳性和阴性血清的符合率分别为98.7%(152/154)和98.0%(145/148);检测初乳和乳汁样品的阳性和阴性符合率分别为100%(60/60)和95.8%(23/24);检测初乳和泌乳期样品中的IgA水平与中和效价的趋势高度相关(kappa=0.835)。本研究建立的检测PEDV IgA的间接ELISA方法灵敏度、敏感性和特异性与传统方法高度一致,可简化检测步骤,适用于大规模评价临床样本乳汁和血清中PEDV IgA抗体的快速检测。

关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV) 单克隆抗体(MAb) IgA抗体间接ELISA