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胚胎干细胞核心转录因子靶基因集蛋白互作网络特征分析

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中国组织工程研究与临床康复 2011年第1期15卷 78-81页

作者：左长清汪宗桂吴铁崔燎广东医学院药理学教研室广东省东莞市523808 广东医学院生物化学教研室广东省东莞市523808

背景:外源性核心转录因子导入终末分化细胞能产生具有与胚胎干细胞特性相似的诱导多潜能干细胞,其复杂机制目前尚未完全阐明。目的:分析核心转录因子靶基因集蛋白互作网络特征,获得其影响"干性"特征的调控机制。方法:去除BioGRID数据库... 详细信息

背景:外源性核心转录因子导入终末分化细胞能产生具有与胚胎干细胞特性相似的诱导多潜能干细胞,其复杂机制目前尚未完全阐明。目的:分析核心转录因子靶基因集蛋白互作网络特征,获得其影响"干性"特征的调控机制。方法:去除BioGRID数据库中的冗余数据,获得非冗余蛋白互作数据库。perl程序搜索靶基因集组成的蛋白互作对,广度优先算法搜索非冗余蛋白互作数据库,获得靶基因集组成的最大连续蛋白互作网络,同时进行1000次随机抽样网络分析。通过Cytoscape软件对网络进行可视化分析。复杂无标度网络Barabasi-Albert模型分析网络特征。结果与结论:核心转录因子靶基因集形成更多的蛋白互作对,最大连续蛋白网络与随机蛋白网络相比具有明显的统计学差异,且核心转录因子靶基因集形成更大的互作网络。网络具有复杂网络无标度特性。该研究通过蛋白互作网络分析证明:靶基因集通过紧密相互作用,形成网络模块方式协调调控胚胎干细胞分子特性。

关键词：胚胎干细胞蛋白相互作用生物信息学核心转录因子网络

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hGH消化道途径转基因的研究

中国生物工程杂志 2005年第B4期25卷 239-243页

作者：赵林郑文岭汪宗桂崔东马文丽华南理工大学生物科学与工程学院华南基因组研究中心广州 510860 华南基因组研究中心南方医科大学基因工程研究所

消化道途径转基因过程方便、快捷、易适应,可为基因治疗提供全新的模式。为了研究人生长激素(bGH)基因的经消化道途径转基因过程,实验首先应用ECHO克隆系统。在供载体 pUni-hGH和宿主载体pcDNA4／TO-E的基础上,构建出hGH的哺乳动物表... 详细信息

消化道途径转基因过程方便、快捷、易适应,可为基因治疗提供全新的模式。为了研究人生长激素(bGH)基因的经消化道途径转基因过程,实验首先应用ECHO克隆系统。在供载体 pUni-hGH和宿主载体pcDNA4／TO-E的基础上,构建出hGH的哺乳动物表达载体pcDNA4-hGH;然后结合酿酒酵母表达载体pESC-URA,构建出hGH的酵母-哺乳动物穿梭栽体pESC-CMV-hGH,测序鉴定后转化酿酒酵母。用阳性重组酵母对小鼠进行灌胃免疫实验,间接ELISA方法在实验组小鼠的血清中检测到抗hGH抗体的存在。结果证实hGH基因可通过消化道途径转进小鼠体细胞并进行表达,初步证明了hGH的消化道基因治疗的可行性。

关键词：消化道途径人生长激素基因基因治疗基因转移

长链非编码RNA NR_033474对C3H10T1/2间质干细胞增殖的影响

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中国组织工程研究 2017年第5期21卷 766-772页

作者：潘亚琼戴忠左长清汪宗桂广东医科大学药理学教研室广东省东莞市523808 广东医科大学生物化学教研室广东省东莞市523808

背景:最近研究发现,长链非编码RNA可调控干细胞的增殖与分化,但关于长链非编码RNA NR_033474在干细胞增殖及细胞周期调控中的作用,目前尚不清楚。目的:通过在C3H10T1/2间质干细胞中过表达NR_033474,观察NR_033474对C3H10T1/2细胞增殖和... 详细信息

背景:最近研究发现,长链非编码RNA可调控干细胞的增殖与分化,但关于长链非编码RNA NR_033474在干细胞增殖及细胞周期调控中的作用,目前尚不清楚。目的:通过在C3H10T1/2间质干细胞中过表达NR_033474,观察NR_033474对C3H10T1/2细胞增殖和细胞周期的影响,进一步分析NR_033474影响间质干细胞C3H10T1/2增殖的可能作用机制。方法:通过慢病毒载体在C3H10T1/2细胞中过表达NR_033474,应用Real-time PCR检测其表达效率,以转染空载体慢病毒的C3H10T1/2细胞为对照,利用细胞计数法绘制生长曲线,观察过表达NR_033474后C3H10T1/2细胞的生长变化;PI染色流式细胞仪检测细胞周期改变;通过Western蛋白印迹法检测过表达NR_033474后,细胞周期相关蛋白(P53、Cyclin B1、CDK1、Cyclin D1)的表达。结果与结论:(1)与对照组比较,感染NR_033474慢病毒后的C3H10T1/2间质干细胞NR_033474表达上调约100倍(P<0.01);(2)与对照组比较,过表达NR_033474后的C3H10T1/2细胞增殖能力明显降低(P<0.05);(3)与对照组比较,过表达NR_033474后的C3H10T1/2间质干细胞阻滞于G2/M期;(4)与对照组比较,过表达NR_033474后的C3H10T1/2间质干细胞Cyclin B1和CDK1蛋白表达下调,P53、Cyclin D1蛋白水平无明显变化;(5)结果表明,NR_033474可能通过下调Cyclin B1及CDK1蛋白表达水平,抑制C3H10T1/2间质干细胞的增殖生长能力,使细胞阻滞于G_2/M期。

关键词：间质干细胞细胞增殖细胞周期细胞周期蛋白质类流式细胞术组织工程干细胞分化长链非编码RNA 慢病毒感染国家自然科学基金

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通路克隆系统:DNA重组技术的新进展

中国生物工程杂志 2003年第7期23卷 24-27页

作者：汪宗桂郑文岭马文丽广州军区广州总医院肿瘤分子生物学研究所第一军医大学分子生物学研究所广州510000

近几年新发展了一种载体间DNA片段相互灵活转化的多功能系统 ,即通路克隆系统(gatewaycloningsystem)。它是一种位点特异的DNA重组技术 ,包括PCR产物的定向克隆 ,DNA片断高效、广泛的亚克隆 ,氨基或羧基末端的融合蛋白表达等。重点阐述... 详细信息

近几年新发展了一种载体间DNA片段相互灵活转化的多功能系统 ,即通路克隆系统(gatewaycloningsystem)。它是一种位点特异的DNA重组技术 ,包括PCR产物的定向克隆 ,DNA片断高效、广泛的亚克隆 ,氨基或羧基末端的融合蛋白表达等。重点阐述了该系统的作用原理、特点及其应用。

关键词：通路克隆系统 DNA重组技术载体定向克隆亚克隆

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人生长激素的酵母/哺乳动物穿梭载体的构建

广东医学 2005年第11期26卷 1473-1475页

作者：汪宗桂郑文岭马文丽梁念慈广东医学院生化教研室广东湛江524023 华南基因组研究中心广州510800 南方医科大学基因工程研究所广州510515

目的酿酒酵母已被证实可作为载体应用于口服基因治疗及免疫中。为研究人生长激素(HGH)以酿酒酵母作为运送载体的口服基因药物,需要构建一种能够在酵母中复制而在哺乳动物细胞表达的HGH穿梭载体。方法利用ECHO克隆系统先构建出HGH的哺乳... 详细信息

目的酿酒酵母已被证实可作为载体应用于口服基因治疗及免疫中。为研究人生长激素(HGH)以酿酒酵母作为运送载体的口服基因药物,需要构建一种能够在酵母中复制而在哺乳动物细胞表达的HGH穿梭载体。方法利用ECHO克隆系统先构建出HGH的哺乳动物表达载体,使HGH处于CMV启动子的调控下;然后设计引物扩增CMV-HGH片段,连接到酿酒酵母表达载体pESC-URA中,构建HGH的酵母/哺乳动物穿梭载体。结果经EcoRI单酶切、EcoRI/SpeI双酶切、菌落PCR以及序列测定鉴定,确认所构建的确为酵母/哺乳动物穿梭载体pESC-CMV-HGH。结论成功构建的穿梭载体可在酿酒酵母中复制,在哺乳动物中受CMV启动子的调控进行表达,为HGH的口服基因药物研制打下了基础。

关键词：酿酒酵母穿梭载体哺乳动物人生长激素口服基因治疗动物细胞表达酵母表达载体 HGH 基因药物 ECHO 引物扩增序列测定药物研制启动子 CMV PCR 复制调控酶切

以ECHO克隆系统构建人生长激素的哺乳动物表达载体

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中国临床康复 2006年第20期10卷 110-112页

作者：汪宗桂郑文岭马文丽梁念慈广东医学院生物化学教研室广东省湛江市524023 华南基因组研究中心广东省广州市510800 南方医科大学基因工程研究所广东省广州市510515

目的:构建ECHO克隆系统构建人生长激素的哺乳动物表达载体,以克服原核生物表达系统生产人生长激素存在的缺陷。方法:实验于2002-08在解放军广州军区广州总医院医学实验科进行。①先把人生长激素基因片段克隆到ECHO系统的供载体中,构建... 详细信息

目的:构建ECHO克隆系统构建人生长激素的哺乳动物表达载体,以克服原核生物表达系统生产人生长激素存在的缺陷。方法:实验于2002-08在解放军广州军区广州总医院医学实验科进行。①先把人生长激素基因片段克隆到ECHO系统的供载体中,构建供载体pUni/Lox-HGH。②让该供载体与具Lox位点的受载体在Cre重组酶的作用下融合,构建出人生长激素的哺乳动物表达载体pcDNA4.1/pUni-HGH,使人生长激素基因处于CMV启动子的调控下,EcoRI单酶切及BamHI/EcoRI双酶切鉴定重组质粒。结果:由琼脂糖凝胶电泳和序列测定证实,用ECHO克隆系统构建的融合质粒中,确实含有人生长激素带内含子的基因序列。结论:用ECHO克隆系统可以构建人生长激素的哺乳动物表达载体,且方便、快捷,为取代原核生物表达系统生产人生长激素,提供了依据。

关键词：人生长激素遗传载体电泳,琼脂凝胶

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人生长激素的酿酒酵母表达质粒构建的新方法

广州医学院学报 2004年第1期32卷 66-68页

作者：汪宗桂郑文岭马文丽广州军区广州总医院肿瘤分子生物学研究所华南理工大学食品与生物工程学院广东广州510515 第一军医大学分子生物学研究所

目的 :利用ECHO克隆系统建立一种更加快速、方便、通用的DNA重组技术。方法 :用常规重组法构建出ECHO系统中的携带外源基因HGH的供载体 ,再利用ECHO系统快速构建人生长激素的酿酒酵母表达载体 ,使HGH能在酿酒酵母启动子GAL的调控下进行... 详细信息

目的 :利用ECHO克隆系统建立一种更加快速、方便、通用的DNA重组技术。方法 :用常规重组法构建出ECHO系统中的携带外源基因HGH的供载体 ,再利用ECHO系统快速构建人生长激素的酿酒酵母表达载体 ,使HGH能在酿酒酵母启动子GAL的调控下进行转录。结果 :基因测序表明 ,在所构建的融合质粒载体上确实含有HGH的基因序列。结论 :本方法为研究HGH的消化道基因治疗打下基础。

关键词： ECHO克隆系统人生长激素消化道基因治疗酿酒酵母