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染色体易位致反复流产5例报告

陆军军医大学学报 1991年第5期13卷 477-479页

作者：汪大琨刘春生第三军医大学西南医院妇产科实验室第三军医大学西南医院妇产科实验室 630038

自1984～1989年,我室对160例2次或2次以上反复流产夫妇,分别进行了外周血细胞染色体检查。每例计数50个细胞分裂像,并分别进行了G、C显带和高分辨G显带,镜检照像分析核型5个细胞以上,共检出异常核型12例异常率为7.5％。其中有4例为世界... 详细信息

自1984～1989年,我室对160例2次或2次以上反复流产夫妇,分别进行了外周血细胞染色体检查。每例计数50个细胞分裂像,并分别进行了G、C显带和高分辨G显带,镜检照像分析核型5个细胞以上,共检出异常核型12例异常率为7.5％。其中有4例为世界首报均为平衡易位。1例为国内首报为臂间倒位。现将这5例报告如下:

关键词：染色体核型流产

骨髓源与脐带源间充质干细胞的基本生物学特征比较

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中国实验血液学杂志 2013年第5期21卷 1248-1255页

作者：韩振霞时庆汪大琨李栋吕明山东大学齐鲁医院干部保健科山东济南250005 山东大学齐鲁医院低温医学研究室山东济南250012 山东大学齐鲁医院临床流行病学研究室山东济南250012

骨髓(bone marrow,BM)和脐带(umbilical cords,UC)是治疗用间充质干细胞(MSC)的主要来源。本研究旨在比较骨髓源和脐带源间充质干细胞的基本生物学特征和体外免疫抑制能力。采用相同培养条件,原代扩增培养UC-MSC和BM-MSC,比较它们的生... 详细信息

骨髓(bone marrow,BM)和脐带(umbilical cords,UC)是治疗用间充质干细胞(MSC)的主要来源。本研究旨在比较骨髓源和脐带源间充质干细胞的基本生物学特征和体外免疫抑制能力。采用相同培养条件,原代扩增培养UC-MSC和BM-MSC,比较它们的生长动力学、细胞表型和免疫抑制能力。采用基因芯片技术比较这两种来源的间充质干细胞的表达基因组差异。结果表明,UC-MSC与BM-MSC在细胞形态和细胞表型上相似,但UCMSC生长更快,可以在体外培养30代以上并不发生可见的形态改变,而BM-MSC生长缓慢,在培养6代以后倍增时间就显著增加。UC-和BM-MSC均可抑制PHA刺激的外周血单个核细胞增殖,其中BM-MSC的抑制能力稍强。基因芯片显示,BM-MSC表达更多的免疫相关基因,而UC-MSC高表达的基因更多地集中于器官发育和生长类基因方面。结论:UC-MSC的高增殖率、低HLA-ABC表达和免疫抑制能力促进了其在细胞治疗中的潜在应用。BM-MSC和UC-MSC差异表达的基因是由它们的组织来源决定的,这将影响在细胞治疗中的选择。

关键词：骨髓脐带间充质干细胞免疫抑制基因表达芯片

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间充质干细胞的衰老对其免疫调控能力的影响

中国实验血液学杂志 2013年第4期21卷 1010-1014页

作者：韩燕李栋时庆汪大琨鞠秀丽山东大学齐鲁医院儿童医疗中心山东济南250012 山东大学齐鲁医院低温医学研究室山东济南250012

本研究旨在探讨人脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UB-MSC)的衰老对其免疫调控能力的影响。从人脐带中分离MSC并进行传代培养,通过形态学观察其核质比的变化。分别选取第5代(对照组)及第13代(衰老组)MSC进行研... 详细信息

本研究旨在探讨人脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UB-MSC)的衰老对其免疫调控能力的影响。从人脐带中分离MSC并进行传代培养,通过形态学观察其核质比的变化。分别选取第5代(对照组)及第13代(衰老组)MSC进行研究,运用细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶检测试剂盒进行衰老检测,并采用CCK-8细胞计数试剂盒检测MSC对淋巴细胞增殖能力的影响,最后通过RT-PCR方法检测免疫调控相关基因在衰老MSC的表达情况。研究结果表明,随传代次数增加,MSC的长宽比增大,核质比减小。细胞衰老检测结果显示,第13代MSC的衰老细胞比例明显增加,但在体外混合淋巴细胞培养体系中,第13代MSC对淋巴细胞增殖的抑制作用与第5代相比明显增强(P<0.05),且第13代细胞免疫抑制相关基因表达增加,促炎相关基因表达减弱。结论:脐带间充质干细胞随体外培养代数增加而逐渐衰老,但免疫抑制能力逐渐加强。

关键词：间充质干细胞衰老免疫调控

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羊水细胞染色体高分辨G显带的初步研究

陆军军医大学学报 1985年第2期 139-142页

作者：汪大琨第三军医大学第一附属医院

本文记述了使用改变的Shah方法,对人类羊水细胞染色体高分辨G显带获得成功。本技术对产前诊断,具有应用和临床意义。在国内我们的实验室领先掌握了羊水细胞染色体高分辨G显带技术。

关键词：羊水细胞染色体显带技术高分辨

脐带间充质干细胞体外衰老过程中生物学特性及基因表达谱的变化

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中国实验血液学杂志 2012年第2期20卷 458-465页

作者：宁雪李栋汪大琨付金秋鞠秀丽山东大学齐鲁医院儿童医疗中心山东济南250012

本研究探讨人脐带间充质干细胞(UC-MSC)在体外培养的衰老过程中细胞生物学特征及衰老相关基因的变化特点。体外分离培养UC-MSC,取第3代(对照组)和第15代(衰老组)细胞进行形态学观察、增殖检测、流式表型测定和人类全基因组表达谱芯片分... 详细信息

本研究探讨人脐带间充质干细胞(UC-MSC)在体外培养的衰老过程中细胞生物学特征及衰老相关基因的变化特点。体外分离培养UC-MSC,取第3代(对照组)和第15代(衰老组)细胞进行形态学观察、增殖检测、流式表型测定和人类全基因组表达谱芯片分析,并选取重要基因进行定量逆转录多聚酶链反应验证。结果显示,与对照组相比,衰老组细胞形态变大,增殖速度减慢,但CD44和CD105等细胞表型阳性率无变化;衰老细胞组的核糖体小亚基组成相关基因显著上调,上调的信号通路主要涉及类固醇合成、半乳糖代谢、自身免疫病和退行性疾病;下调明显的是细胞骨架,DNA、mRNA结构的结合以及蛋白质功能等相关基因,与细胞黏附功能和细胞增殖周期等相关。结论:第15代的UC-MSC出现细胞代谢与增殖功能下降,从而导致细胞衰老。

关键词：脐带间充质干细胞衰老基因表达信号通路

TGF-β1对hUC-MSC增殖、细胞外基质表达和基因表达的影响

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中国实验血液学杂志 2011年第6期19卷 1466-1471页

作者：赵洁李栋时庆汪大琨鞠秀丽山东大学齐鲁医院儿科山东济南250012 山东大学齐鲁医院低温医学研究室山东济南250012

本研究探索转化生长因子-β1(TGF-β1)对人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)增殖、细胞外基质(ECM)表达和基因表达的影响。采用植块法从人脐带中分离、培养hUC-MSC并进行表型鉴定,用WST法检测不同浓度的TGF-β1对hUC-MSC增殖的影响,利用qRT-PC... 详细信息

本研究探索转化生长因子-β1(TGF-β1)对人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)增殖、细胞外基质(ECM)表达和基因表达的影响。采用植块法从人脐带中分离、培养hUC-MSC并进行表型鉴定,用WST法检测不同浓度的TGF-β1对hUC-MSC增殖的影响,利用qRT-PCR和免疫组织化学方法检测不同浓度的TGF-β1对hUC-MSC细胞外基质表达的影响,利用表达基因芯片技术检测hUC-MSC在TGF-β1作用下基因表达谱的变化。结果表明,细胞增殖实验中0.1-20.0 ng/ml TGF-β1浓度条件下培养24、48和72小时,hUC-MSC增殖能力变化均不显著,但在0.1 ng/ml组均会出现相对峰值。0.5 ng/ml的TGF-β1促进Col-Ⅰ、MMP-2、MMP-9和TIMP-2的mRNA表达达到峰值;而0.1 ng/ml的TGF-β1促进其它成分:Col-Ⅳ、FN、LN、Integrin、Tenascin-C、MMP-1和TIMP-1的mRNA表达达到峰值。0.5和0.1 ng/ml的TGF-β1分别促进Col-Ⅰ和Col-Ⅳ少量表达,均促进FN强烈表达,但均不能使LN明显表达。基因芯片结果显示,在上调基因中有9个基因与细胞运动、迁移相关;Pathway和Go的统计分析显示,差异基因涉及转录、翻译、生物合成、代谢、信号转导、细胞迁移、细胞间连接等多方面。结论:0.1 ng/ml的TGF-β1能较好地促进hUC-MSC的生长。不同浓度的TGF-β1能分别促进ECM不同成分表达,TGF-β1对hUC-MSC的转录、翻译、生物合成、代谢、信号转导、细胞迁移、细胞间连接等多方面在基因水平上具有调节作用。

关键词：脐带间充质干细胞转化生长因子-β1 细胞外基质基因表达谱

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储运条件对脐带间充质干细胞存活率的影响

中国组织工程研究 2013年第36期17卷 6430-6435页

作者：汪大琨王芝辉郭红张乐玲山东大学齐鲁医院低温医学研究室山东省济南市250012 山东齐鲁干细胞有限公司山东省济南市250004 山东大学齐鲁儿童医院山东省济南市250022

背景:国内外尚无对脐带间充质干细胞运输过程中相关活力指标的全面评估。目的:检测白蛋白和储运时间等不同条件对脐带间充质干细胞存活率的影响。方法:体外培养的脐带间充质干细胞分为实验组和对照组,每组将3.15×109L-1细胞悬浮在3 mL... 详细信息

背景:国内外尚无对脐带间充质干细胞运输过程中相关活力指标的全面评估。目的:检测白蛋白和储运时间等不同条件对脐带间充质干细胞存活率的影响。方法:体外培养的脐带间充质干细胞分为实验组和对照组,每组将3.15×109L-1细胞悬浮在3 mL生理盐水中。其中实验组加入1%白蛋白并避光保存,对照组分为不加白蛋白避光保存组和加白蛋白光照保存组,在0,2,4,8和24 h分别测定各组细胞数、锥虫蓝拒染率和细胞存活率。结果与结论:与对照组相比,实验组(保存液中加白蛋白且避光)的8 h细胞损失率几乎为零,细胞存活率接近90%。对照中不加白蛋白组8 h细胞损失率高达38.5%,细胞存活率为86%。在脐带间充质干细胞的长途运输中,加入1%白蛋白可以有效保证细胞存活量。运输时间超出8 h后,细胞损失率上升且存活率下调。实验数据表明,16℃、避光和1%白蛋白生理盐水的保存条件下,脐带间充质干细胞在8 h内符合临床输注要求。

关键词：干细胞脐带间质干细胞血清白蛋白

血红素加氧酶-1在人肺癌细胞中的表达及其对血管生成因子的影响

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山东大学学报（医学版） 2011年第12期49卷 21-24,33页

作者：王淑云王玲李栋汪大琨山东大学齐鲁医院呼吸科济南250012 山东大学齐鲁医院低温医学研究室济南250012

目的探讨血红素加氧酶-1(HO-1)在人肺癌细胞中的表达及其对肺癌血管内皮生长因子(VEGF)的影响和可能的作用机制。方法选用肺腺癌细胞株A549和肺鳞癌细胞株SK-MES-1为研究对象,以永生化支气管上皮细胞株HBE为对照,采用qRT-PCR法同时检测... 详细信息

目的探讨血红素加氧酶-1(HO-1)在人肺癌细胞中的表达及其对肺癌血管内皮生长因子(VEGF)的影响和可能的作用机制。方法选用肺腺癌细胞株A549和肺鳞癌细胞株SK-MES-1为研究对象,以永生化支气管上皮细胞株HBE为对照,采用qRT-PCR法同时检测三个细胞株中HO-1和VEGF基因的表达;采用Western Blotting法检测三个细胞株中HO-1蛋白的表达;用四甲基偶氮唑(MTT)法检测细胞增殖。结果与HBE比较,A549和SK-MES-1中的HO-1不管在mRNA水平(P<0.05)还是在蛋白水平上都明显表达增高,A549较SK-MES-1中HO-1mRNA表达增高(P<0.05);qRT-PCR结果显示,VEGF在两个肺癌细胞株中的表达均显著增高(P<0.05),两个肺癌细胞株中HO-1和VEGF的表达增高具有相关性(相关系数分别为1.35和9.80)。结论 HO-1在肺癌细胞中表达增高,且对VEGF生成产生影响,由此推测,HO-1通过促进VEGF表达促进血管生成,从而影响肺癌生长及转移,这可能是HO-1作用于肺癌的机制之一。

关键词：肺肿瘤血红素加氧酶-1 血管生成血管内皮生长因子

尾加压素Ⅱ对大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖及细胞外信号调节激酶1/2蛋白磷酸化的影响

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山东大学学报（医学版） 2011年第12期49卷 13-17页

作者：王小如时庆汪大琨夏伟山东大学齐鲁医院儿科济南250012 山东大学齐鲁医院低温医学研究室济南250012

目的研究尾加压素Ⅱ(UⅡ)对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白磷酸化的影响,探讨肺动脉高压肺血管重塑的可能机制。方法采用消化法培养大鼠PASMC,WST-8测定不同浓度UⅡ诱导的大鼠PASMC的增殖活性及ER... 详细信息

目的研究尾加压素Ⅱ(UⅡ)对大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白磷酸化的影响,探讨肺动脉高压肺血管重塑的可能机制。方法采用消化法培养大鼠PASMC,WST-8测定不同浓度UⅡ诱导的大鼠PASMC的增殖活性及ERK1/2特异性抑制剂PD98059对UⅡ诱导的大鼠PASMC增殖活性的影响。Western blot法检测不同浓度UⅡ诱导的PASMC胞内ERK1/2蛋白磷酸化水平及PD98059对UⅡ诱导的ERK1/2蛋白磷酸化的抑制作用。结果 UⅡ在一定浓度范围(10-9～10-7mol/L)能浓度依赖性提高大鼠PASMC的增殖活性,并且能促进细胞内ERK1/2蛋白磷酸化。PD98059可阻断UⅡ诱导的PASMC增殖及PASMC胞内ERK1/2蛋白磷酸化。结论 UⅡ可促进大鼠PASMC增殖,ERK1/2通过磷酸化在其中发挥重要作用。

关键词：高血压,肺性尾加压素Ⅱ 增殖有丝分裂素激活蛋白激酶类磷酸化酶激酶