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小干扰RNA抑制乳腺癌T47D细胞端粒酶活性的研究

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小干扰RNA抑制乳腺癌T47D细胞端粒酶活性的研究

作者：胡凡果天津医科大学

学位级别：硕士

背景与目的:端粒是位于真核细胞染色体末端的DNA重复结构,由端粒DNA重复序列与端粒相关蛋白组成,具有维持染色体结构完整性的作用。端粒酶是具有特殊逆转录酶活性的核糖核蛋白复合物,它的活化可以使端粒不断复制延长,从而使细胞“逃脱... 详细信息

背景与目的:端粒是位于真核细胞染色体末端的DNA重复结构,由端粒DNA重复序列与端粒相关蛋白组成,具有维持染色体结构完整性的作用。端粒酶是具有特殊逆转录酶活性的核糖核蛋白复合物,它的活化可以使端粒不断复制延长,从而使细胞“逃脱”衰老和凋亡获得永生化,这是导致许多恶性肿瘤发生的最关键的条件。端粒酶在人类正常细胞(生殖细胞、胚胎细胞除外)和组织中几乎不表达,而在恶性肿瘤及永生化细胞中活性显著升高,其在人类恶性肿瘤总的表达率为85%左右。端粒酶由端粒RNA成分(TR)、端粒酶逆转录酶(TERT)和端粒相关蛋白1(TP1)3个亚单位组成,其中TERT是端粒酶的催化亚单位,对端粒酶活性起着重要作用,与端粒酶活性呈正相关;其他2个亚基均不能作为端粒酶的活性指标。近年来兴起的RNA干扰技术因为能特异、高效的使靶基因沉默,而成为基因功能研究的强有力工具。本研究选用高表达hTERT的乳腺癌细胞T47D,利用RNAi干扰技术封闭hTERT基因的表达,检测癌细胞的端粒酶活性变化以及细胞生长增殖情况,以期为抗肿瘤治疗提供新思路。方法:选择hTERT基因较高表达的人乳腺癌细胞系T47D为研究对象。siRNA表达载体选择TaKaRa(宝生物)公司的pBAsi-hU6-Neo(BamHⅠ/HindⅢ)载体。首先,从hTERT基因序列中选取4段18nt的片断,并取其中一段序列随机打乱碱基顺序作为阴性对照,设计并合成10条互补的DNA序列,经退火形成双链,连接质粒载体,构建pBAsi-hU6-Neo/siRNA1、pBAsi-hU6-Neo/siRNA2、pBAsi-hU6-Neo/siRNA3、pBAsi-hU6-Neo/siRNA4和pBAsi-hU6-Neo/SiRNA2negative等五种质粒,转化所得质粒到大肠杆菌中,经过克隆、筛选、扩增,提取质粒,酶切并测序鉴定。然后将纯化质粒转染到T47D细胞中,在hU6启动子作用下,质粒在细胞内转录生成具有3′突出的发卡RNA。G418筛选转染成功的细胞,进行克隆化,扩大培养。采用RT-PCR法检测hTERT的mRNA表达:western blot检测hTERT蛋白的表达;TRAP-ELISA法检测细胞的端粒酶活性;选用MTT法绘制细胞生长曲线观察细胞的增殖活性变化,并以流式细胞术检测细胞周期变化。结果:1.成功地构建了五种能够表达siRNA的质粒pBAsi-hU6-Neo /siRNA,通过测序分析,证实插入载体的核苷酸序列和设计完全符合。2.转染纯化后的质粒到T47D细胞中,经G418筛选出了五种转染成功的细胞:T47D/siRNA1、T47D/siRNA2、T47D/siRNA3、T47D/siRNA4和T47D/siRNA2negative。***-PCR和westernblot检测结果显示T47D/siRNA2、T47D/siRNA3和T47D/siRNA4三组细胞的hTERTmRNA和hTERT蛋白表达量较对照T47D细胞(T47Dcontrol)表达量明显降低(P＜0.05);而T47D/siRNA1和T47D/siRNA2negative组细胞同T47Dcontrol细胞则无明显差别。***-ELISA法检测表明T47D/siRNA2、T47D/siRNA3和T47D/siRNA4三组细胞端粒酶活性较T47Dcontrol细胞明显降低(P＜0.05);而T47D/siRNA1和T47D/siRNA2negative组细胞的端粒酶活性同T47Dcontrol细胞相比差别不明显。***绘制的生长曲线显示T47D/siRNA2、T47D/siRNA3和T47D/siRNA4三组细胞生长速度较T47Dcontrol细胞明显降低;T47D/siRNA1生长速度也有减缓,T47D/siRNA2negative组细胞增殖能力同T47Dcontrol细胞则无明显差别。6.流式细胞术检测结果表明T47D/siRNA1、T47D/siRNA2、T47D/siRNA3和T47D/siRNA4三组细胞G0/G1期细胞比例增高,而S期细胞比例降低,同T47Dcontrol细胞相比,差异明显(P＜0.05);而T47D/siRNA1和T47D/siRNA2negative组细胞同T47Dcontrol细胞相比细胞周期没有明显变化。结论:***能够高效地封闭乳腺癌T47D细胞hTERT基因的表达。***在乳腺癌细胞中的表达下降能显著降低细胞的端粒酶活性。***在乳腺癌中的表达下降能降低细胞的增殖能力。

关键词：端粒酶 hTERT RNAi 乳腺癌

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西部矿业集团有限公司薪酬体系优化设计

西部矿业集团有限公司薪酬体系优化设计

作者：白才果兰州大学

学位级别：硕士

薪酬事关劳动者的最根本利益,而薪酬问题也是劳动者、用人单位乃至整个劳动市场最为敏感的话题,各行各业的薪酬状况及变动趋势更是全社会都为之关注的问题。薪酬制度是否完善合理,将直接关系着企业人事架构的稳定及后续发展。然而,目前... 详细信息

薪酬事关劳动者的最根本利益,而薪酬问题也是劳动者、用人单位乃至整个劳动市场最为敏感的话题,各行各业的薪酬状况及变动趋势更是全社会都为之关注的问题。薪酬制度是否完善合理,将直接关系着企业人事架构的稳定及后续发展。然而,目前,我国企业在具体的管理过程中,其薪酬管理仍然存在诸多问题,比如薪酬结构设计不合理、薪酬水平缺乏竞争性、考核制度不完善等,诸如此类问题的不断叠加,直接影响了员工对企业的忠诚度及对工作热情的投入。另外,一些企业仍然被传统、陈旧的薪酬体制所制约,导致企业无法适应时代的发展,甚至在市场竞争中被淘汰。西部矿业集团有限公司作为一家以矿产资源综合开发为主营业务的大型企业,长期沿用事业单位的薪酬体制,结构较为古板,薪酬设计缺乏系统性,分配平均现象十分严重。当前采用的薪酬管理体系已不能满足发展需要,无法激发员工的工作热情,导致员工的工作效率低下,离职率居高不下,这些缺陷严重制约了公司的发展。基于以上背景,本文以西部矿业集团有限公司薪酬体系优化设计为研究对象,以薪酬管理相关理论为基础,通过对西部矿业集团有限公司现有的薪酬管理体系现状及存在问题的深入剖析,以此为前提,提出西部矿业集团有限公司薪酬体系再设计,主要从西部矿业集团有限公司薪酬策略选择、薪酬体系设计的目标及原则、薪酬体系设计的步骤以及薪酬结构设计四个方面重点展开,最后,提出西部矿业集团有限公司新薪酬体系的实施保障,重点从领导重视薪酬体系设计与实施、不断进行组织结构优化、不断完善考核体系及培养良好的企业文化四个方面重点展开,以期对西部矿业集团有限公司现有的薪酬体系起到很好的优化,也对其他类似公司薪酬体系优化设计起到一定的借鉴作用。

关键词：薪酬管理薪酬结构薪酬体系薪酬设计西部矿业集团有限

袖阀管注浆帷幕在地铁周边建筑物保护中的应用

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现代隧道技术 2010年第6期47卷 87-90,100页

作者：李丰果中铁隧道集团三处有限公司深圳512825

在如火如荼的城市地铁建设过程中,城市既有构筑物不可避免地会与隧道结构近距离接触,致使隧道施工对周边环境产生各种消极影响。开挖步序、爆破震动、支护强度、地下水等因素相互作用,使地面及周边构筑物产生沉降。文章以深圳某地铁车... 详细信息

在如火如荼的城市地铁建设过程中,城市既有构筑物不可避免地会与隧道结构近距离接触,致使隧道施工对周边环境产生各种消极影响。开挖步序、爆破震动、支护强度、地下水等因素相互作用,使地面及周边构筑物产生沉降。文章以深圳某地铁车站施工为背景,介绍了袖阀帷幕注浆的施工要点,分析了袖阀管注浆帷幕在地铁车站暗挖施工中对周边构筑物的保护作用,并利用有限元软件ANSYS进行了效果模拟。分析结果证明,帷幕注浆对保证隧道近距离施工中的结构安全和控制地表沉降是十分有效的。

关键词：注浆帷幕数值模拟环境保护沉降监测

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磨耗后动车车轮与轨道系统动力学研究

磨耗后动车车轮与轨道系统动力学研究

作者：旷娇果大连交通大学

学位级别：硕士

动车组的发展是近年来铁路行业进步的标志,对动车组的追求包括速度更快、行程更远,运行更安全、平稳。随着对动车组要求的提升,车轮和钢轨之间的动态作用更加复杂,其中动车车轮磨耗是影响轮轨接触的关键因素,对动车组运行品质影响较大... 详细信息

动车组的发展是近年来铁路行业进步的标志,对动车组的追求包括速度更快、行程更远,运行更安全、平稳。随着对动车组要求的提升,车轮和钢轨之间的动态作用更加复杂,其中动车车轮磨耗是影响轮轨接触的关键因素,对动车组运行品质影响较大。从车辆动力学角度研究车轮磨耗对列车的影响,对我国高速铁路的发展、降低运营成本以及提升动车组的运行品质具有重要意义。本文对CRH动车组不同磨耗程度的LM车轮型面进行现场实测,在调查中发现车轮踏面位置磨耗较严重。为分析车轮磨耗对动车的影响,以Kalker简化理论为依据,以车辆-轨道耦合动力学为基础,在动力学分析软件SIMPACK中建立三节车编组动车组模型,将不同磨耗程度的车轮型面数据导入到模型中,分别进行动力学计算。总结了车辆通过曲线时的部分动力学性能变化规律、不同磨耗阶段车轮对列车动力学性能的影响、列车各节车的动力学性能对比以及列车各个位置的振动分布情况,这一研究为动车车轮减磨、车体减振措施和车轮型面设计提供了一定的理论依据。多节车编组列车通过曲线时,动力学性能相对单车模型更优,并更符合实际情况,以三节车编组为模型研究列车动力学性能能取得更真实的结果,三节车编组模型中,中间车体曲线通过安全指数最高;随着车轮型面磨耗程度的增加,车轮与不同型面钢轨匹配时,动力学性能变化规律相同,磨耗Ⅲ型面车轮对应车体各项动力学性能最优,车轮磨耗稳定;车轮与60kg/m钢轨匹配时轮轨横向力和横向蠕滑力指标都小于60N钢轨,LM型面车轮与60kg/m匹配能获得更好的曲线通过动力学性能。车轮和钢轨型面对车体、构架、轮对的振动特性影响较大,同位置的横向和垂向加速度振动能量都随着车轮磨耗的增大而增大,同型面车轮与60N钢轨匹配时振动变化更加稳定,有利于轮轨之间的接触;振动能量垂向传递过程中,从车轮到构架、构架到车体振动能量逐级递减,轴箱悬挂系统和空簧系统分别能有效的抑制高频和低中频振动的传递;各节车横向和垂向振动能量在列车纵向方向分布规律不同,中间车体横向受头、尾车的牵连作用,横向振动更剧烈,而尾车的垂向振动能量最大。

关键词：高速动车组动力学性能车轮磨耗轮轨匹配车体振动

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食品抗菌添加剂

1988年

作者：吕克

来源：南通市图书馆图书汇雅图书（南通市图书馆... 评论

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关于高校档案利用情况的思考

COL1A1在乳腺癌中的表达及其临床意义的研究

档案学 1998年第1期 123-124页

作者：汪利锋杨梦梨

高等学校档案工作的最终目的是开发和利用档案信息资源，满足教学、科研、党政管理、后勤服务等工作的需要。据笔者统计：我校截止1995年，共有文书档案1520卷，其中1993年利用档案73人次，82卷；1994年利用档案86人次，104卷；1995 年...

高等学校档案工作的最终目的是开发和利用档案信息资源，满足教学、科研、党政管理、后勤服务等工作的需要。据笔者统计：我校截止1995年，共有文书档案1520卷，其中1993年利用档案73人次，82卷；1994年利用档案86人次，104卷；1995 年利用档案96人次，112卷。从利用档案的人数和案卷来看，有逐年上升的趋势。但是从总案卷的数量与利用的情况来看，三年来档案的利用率都是在10%以下。由此可见，我校档案只有很少一部分得到利用，多数档案长年无人问津。再从利用档案的内容看，行政管理部门的人员占多数，大多是查找与自己工作内容相关的案卷。如人事职称评定、教代会资料、基建图纸、会计帐簿以及往届毕业生的学籍档案等。从以上情况可以看出，在利用者中，行政管理人员利用档案的较多，教师和科研人员利用档案的较少。而利用档案进行学术研究的几乎没有。这说明，我校的档案利用处于较低的层次上。据有关资料表明，我省1992年各级各类档案馆的档案利用率只有6.65%，1993年达到了6.80%， 1994 年增加到7.36%；据全省15000多个县团级以上单位的档案室统计，1994 年的档案利用率只达到了10.14%，由此看来，无论是高校还是社会上的档案室，档案利用率低是普遍存在的问题。本文针对档案利用中存在的问题与对策谈一下自己的认识。一、档案利用工作中存在的主要问题1、认识模糊。由于传统的观念，大部分教职员工对档案有一种神密感。往往一提起档案室（馆），便认为是不可涉足的地方。有的同志甚至还不懂得档案室是干什么的，总认为档案室（馆）就是保管人事档案的部门，分不清人事档案和文书档案的界线，因而不敢前往问津。2、自我宣传不够。高校档案部门一般不注意馆藏内容的宣传，大多数师生员工根本不知道档案部门究竟有些什么东西，所以就不能结合工作需要去档案室查找有关材料。另外对档案利用后所取得的社会效益和经济效益宣传也不够，导致一部分人误解为档案部门只是一个清闲的部门，不能给社会创造实际价值。3、文件材料收集不齐全。在高校的教学、科研、党政管理以及其他各项活动的过程中，形成了丰富的、大量的文件材料。档案就是在此基础上，按照一定的要求，经过收集、整理，最终使之排列有序而成的。收集工作是首要的一环，要保证档案材料的完整、准确、系统，只有将文件材料收集齐全才能实现，一旦文件材料收集不齐全，掌握不住档案形成的时机，使档案人为地分散、游离或消失，教职工需要查阅的东西找不到，久而久之，档案室也就失去了作用。

关键词：

来源：人大复印报刊资料评论

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COL1A1在乳腺癌中的表达及其临床意义的研究

作者：汪予果南昌大学

学位级别：硕士

目的：探讨Ⅰ型胶原α1基因（COL1A1）在乳腺癌组织和正常乳腺组织中的表达，并分析其与临床病理的关系。方法：随机选取2010-2013年于南昌大学第一附属医院病理科组织蜡块标本50例，并以其为研究对象。其中50例乳腺癌标本（均为导... 详细信息

目的：探讨Ⅰ型胶原α1基因（COL1A1）在乳腺癌组织和正常乳腺组织中的表达，并分析其与临床病理的关系。方法：随机选取2010-2013年于南昌大学第一附属医院病理科组织蜡块标本50例，并以其为研究对象。其中50例乳腺癌标本（均为导管癌）及其癌旁正常组织（距乳腺癌肿块边缘至少5cm）。所有标本都有完整的临床病理资料，临床随访资料齐全，均为第一次手术，且术前均未行任何化疗及放疗。采用Envision免疫组化方法检测标本中COL1A1的表达水平，结合临床病理参数进行分析。结果： 1、乳腺癌组织中COL1A1阳性率为72％，正常乳腺组织中COL1A1阳性率为48％。COL1A1基因在乳腺癌组织中的阳性表达率明显高于正常乳腺组织(p0.05)。结论： 1、乳腺癌组织中COL1A1的表达明显高于正常乳腺组织。 2、乳腺癌组织中COL1A1的表达与乳腺癌的侵袭、转移密切相关。 3、检测COL1A1在乳腺癌组织中的表达对判断乳腺癌是否恶性演进有重要的参考价值，可以为判断乳腺癌患者的预后提供新的指标，也可为乳腺癌靶向治疗提供一定的参考。

关键词： COL1A1 乳腺癌免疫组织化学

玉米性别决定关键基因Tasselseed3（Ts3）的精细定位和候选基因的表达分析

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玉米性别决定关键基因Tasselseed3（Ts3）的精细定位和候选基因的...

作者：果永超南京农业大学

学位级别：硕士

[目的]Tasselseed3（Ts3）是玉米雄穗性别变异突变体,表现典型的雄穗结实（tasselseed）现象,说明Ts3基因是玉米雄穗性别决定的关键基因。本研究通过图位克隆方法对Ts3进行了精细定位,并对定位区间Ts3候选基因进行了表达分析,为最终克隆... 详细信息

[目的]Tasselseed3（Ts3）是玉米雄穗性别变异突变体,表现典型的雄穗结实（tasselseed）现象,说明Ts3基因是玉米雄穗性别决定的关键基因。本研究通过图位克隆方法对Ts3进行了精细定位,并对定位区间Ts3候选基因进行了表达分析,为最终克隆到Ts3基因、为解析玉米雄穗性别决定的遗传控制机制奠定了坚实基础。[结果]通过对野生型和突变体株高、节间长度、叶长叶宽等表型的统计分析,结果显示Ts3突变体明显的表现出矮化、节间长度缩短、叶短而宽的特点,暗示赤霉素信号可能与Ts3介导的玉米性别决定过程有关。经过本实验的前期研究,将控制玉米性别决定的关键基因Ts3初步定位在玉米1号染色体尾端一个6.9Mb的范围内,该范围内有145个已注释的基因。通过本次Ts3精细定位的研究,我们将定位区间缩小至1.8Mb的范围内,该定位区间内还有29个已注释基因,我们对这些已注释的基因在叶片、根尖、茎尖中的表达做了 RT-PCR的检测。结果显示:叶片中,有22个基因检测到有表达,7个基因检测不到表达,在这22个基因中,1个基因的表达水平上升,3个基因的表达水平下降,18个基因的表达水平没有明显变化;在根尖中,有22个基因被检测到有表达,7个基因检测不到表达,在这22个基因里,2个基因的表达水平下降,20个基因的表达水平没有明显变化;在茎尖中,共检测到23个基因的表达,其中有6个基因的表达水平发生了变化,17个基因的表达水平没有发生明显的变化。接着,我们对WT材料进行了 GA,JA处理,检测了定位区间的基因对GA,JA处理的反应,结果显示,赤霉素处理后,有21个基因有表达,8个基因没有检测到表达,在这些有表达的基因中,gene132、gene133、gene135,gene148的表达水平先提高再下降,其余的17个基因的表达没有发生明显的变化;茉莉酸处理后检测到,21个基因有表达,8个基因检测不到有表达,在这些有表达的基因中,gene120、gene159、gene164的表达水平先下降再升高,gene132、gene133、gene135三个基因的表达水平先升高后降低,其余的15个基因的表达水平没有发生明显的变化。综合以上结果,我们最终认为gene118、gene120、gene164为Ts3的最终候选基因,它们分别为 ZM00001d033637、ZM00001d033635、ZM00001d033680。ZM00001d03367编码一种吡哆醛磷酸酶,是维生素B6代谢的主要酶类;ZM00001d033635编码了一种胞苷/脱氧胞苷脱氨酶,参与了细胞内嘧啶核苷的代谢与维持,其功能与逆境胁迫反向有关;ZM00001d033680为D8基因,编码赤霉素信号的负调控因子DELLA蛋白。说明Ts3可能是参与了赤霉素的信号通路途径从而影响雄穗的性别决定发育。[结论]通过对Ts3精细定位的研究,我们将Ts3基因定位在一号染色体G-273到G305标记之间的一个1.8Mb的范围内,通过该区间内基因表达分析和突变体的表型分析,我们认为gene118、gene120、gene164为Ts3的最终候选基因,它们分别为 ZM00001d033637、ZM00001d033635、ZM00001d033680。通过对这三个基因的同源性分析,我们推测了他们可能的功能,ZM00001d033637编码一种吡哆醛磷酸酶,是维生素B6代谢的主要酶类;ZM00001d033635编码了一种胞苷/脱氧胞苷脱氨酶,参与了细胞内嘧啶核苷的代谢与维持,其功能与逆境胁迫反向有关;ZM000.01d033680为D8基因,编码赤霉素信号的负调控因子DELLA蛋白。推测Ts3可能是通过参与赤霉素信号传导调控玉米茎尖的性别发育。

关键词：玉米精细定位茉莉酸赤霉素基因表达

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