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人细小病毒B19中国株NS1蛋白基因全长的克隆及融合蛋白的表达

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人细小病毒B19中国株NS1蛋白基因全长的克隆及融合蛋白的表达

作者：汤雪晴中国人民解放军第四军医大学

学位级别：硕士

目的细小病毒B19(Human Parvovirus B19，以下简称B19)，是已知的细小病毒属中唯一致人疾病的病毒。这一病毒广泛存在，在我国也有较高的感染率。主要通过呼吸道、血液制品和宫内传播。由于宿主的免疫力和血液学的状态不同，导致截然... 详细信息

目的细小病毒B19(Human Parvovirus B19，以下简称B19)，是已知的细小病毒属中唯一致人疾病的病毒。这一病毒广泛存在，在我国也有较高的感染率。主要通过呼吸道、血液制品和宫内传播。由于宿主的免疫力和血液学的状态不同，导致截然不同的临床表现：在健康儿童，导致无害的出疹性疾病，即感染性红斑;在成人，与一种急性多发性关节病有关;对于有潜在血液系统紊乱者，可诱发一过性的再障危象;对于免疫力抑制者，持续的病毒感染表现为再生障碍性贫血或慢性贫血;胎儿由于免疫力未成熟，更易感染B19，发生死胎、胎儿水肿和先天性贫血。B19病毒编码两个结构蛋白(VP1和VP2)及一个主要的非结构蛋白(NS1)。NS1有一个高度保守的核苷三磷酸结合构象，它对于一系列的生物学功能的发挥至关重要，在这一结构域中发生一个氨基酸突变时，NS1的细胞毒性即丧失，提示NS1与核苷三磷酸的结合在B19诱导的细胞凋亡过程中发挥重要的作用。NS1能提供第·军巨上膏硕士膏位公上 DNA结合位点，具有 Ah酶活性、核酸结合和翻译启动子功能。NS蛋白具有细胞毒性，能诱导细胞调亡。它的基因变异与病毒的致病力密切相关。 NS蛋白的细胞毒性与 caspase3通路诱发的细胞调亡密切相关。这一通路的激活在 NSI蛋白诱导的细胞凋亡中发挥重要的作用。而特异性 NS蛋白抗体可能与疾病的转归有关。Von Poblotzki等于 1995年成功构建了 NS蛋白大肠杆菌表达系统，Hicks等于 1996年构建了 NS蛋白的杆状病毒 Hela细胞表达系统，这对于进一步研究 NSI蛋白的分于生物学活性提供了可能。研究的目的：扩增人细小病毒B19非结构蛋白Inysl）全长基因，构建克隆载体及原核表达载体，诱导表达 NSI融合蛋白。方法利用聚合酶链反应（PCR）和分子克隆技术，从我科保存的 BIg 阳性标本 XA20中扩增 NS蛋白基因全长，构建 NS IPGtu1七asy克隆载体，序列经测序分析证实正确后亚克隆于pQE30表达载体中，并转化至M15 感受态菌中，经IPTG诱导可表达77kD的融合蛋白。结果＊）扩增产物的测序结果与国外标准株（AU株）对比，有一处发生突变，第2439位碱基由T突变为C，氨基酸由精氨酸变为甲硫氨酸／2）构建了克隆载体NSI中GEM1七asy及原核表达载体 NSlpQE30，经酶切鉴定，证实载体构建成功。刀表达的NSI融合蛋白经 10％SDSPAGE电泳证实为 77kD。结论＊）建立了NSI－pQE30原核表达系统。NSI蛋白能在大肠杆菌中稳定表达，其条件是：阳性克隆菌增菌2～3 ／J＼时后，IPTG浓度 lmml／L，于 25”C诱导 3小时以上。（2在国内首次获得人细小病毒 B19 NSI蛋白融合表达产物，对进一步研究NSI蛋白的生物学活性及其单克隆抗体的制备有重要的意义。

关键词：人细小病毒B19 NS1蛋白基因克隆表达

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二胡教材科学系统规范化路之探寻

二胡教材科学系统规范化路之探寻

作者：汤雪晴江西师范大学

学位级别：硕士

二胡，是我国传统民族文化里别具特色的一种乐器，具有传统独特的文化魅力以及韵味，二胡虽然有千年之久的历史演变，不管是器乐本身还是音色的变化，都顺着不同时代而逐渐走向完善。但是二胡教材的演变却只有短短一百年左右的时间，我... 详细信息

二胡，是我国传统民族文化里别具特色的一种乐器，具有传统独特的文化魅力以及韵味，二胡虽然有千年之久的历史演变，不管是器乐本身还是音色的变化，都顺着不同时代而逐渐走向完善。但是二胡教材的演变却只有短短一百年左右的时间，我们都知道教材是教育的载体，好的教材才是发展好的教育的前提。可就是这近百年以来，二胡教材的发展却经历一段不平凡的历程。它虽在这百余年的时间里得到了一定的空间完善，但是所有人都不得不承认，二胡教材相对于西方其他器乐比如钢琴小提琴等，却明显滞后了许多。这其中包含了时间本身的问题，同时也因为中国民族文化的差异性造成的。如今的世界是一个多元化发展的时代，世界处于一个超速飞跃的高科技信息时代，时代拉近了各个领域之间的距离，故而“陌生”呈缩小式发展。而这种“缩小”，又造成各个领域自身研究范围的不断扩张。于是，二胡就在这样一个充满碰撞、融合，以及挑战的大熔炉里迅猛发展。而二胡教材的真正发展是在中国音乐史上第一次被列为高等学校的课程——1922年刘天华正式在北大附设音乐传习所教授二胡。也就是说，二胡教学确立了二胡发展的开端。而作为二胡的教材则是二胡教学的最好体现，也是教学质量高低的一个决定性因素，在二胡发展中起到了不可忽视的作用。现代多元化的趋势使二胡教材越来越呈向科学系统规范化道路发展。本文就其“科学化”、“系统化”、“规范化”三个方面来论述二胡教材如今发展状况以及今后发展去向。从“科学”、“系统”、“规范”3个概念本身入手，结合交叉学科、边缘学科原理，借鉴西方文化思想以及二胡教学与演奏研讨会中各大资深教学及演奏名家的经验之谈及建议，探讨如何使二胡教材在科学系统规范化方向发展中更加合理，继而促进二胡能在当代世界多元化格局中以稳定、快速及大众化形式趋于完善。

关键词：二胡教材科学化系统化规范化

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红色经典阅读指导的实践研究

安徽教育科研 2020年第13期 11-12页

作者：汤雪晴合肥市五十中学西校教育集团安徽合肥230031

"红色经典"是指产生于或者反映中国革命年代的一批优秀文艺作品。引导学生阅读红色经典是初中语文阅读教学的要求,同时也是教育学生传承革命精神的重要方式。在语文教育教学实践中,我们可以通过布置班级书吧营造红色书香氛围,积极开展... 详细信息

"红色经典"是指产生于或者反映中国革命年代的一批优秀文艺作品。引导学生阅读红色经典是初中语文阅读教学的要求,同时也是教育学生传承革命精神的重要方式。在语文教育教学实践中,我们可以通过布置班级书吧营造红色书香氛围,积极开展红色经典亲子阅读交流、"每周一诗"、红色经典故事会等主题活动进一步激发学生阅读经典的兴趣,引导学生学会联系自身实际深入思考这些经典作品对自己的教益,使红色经典成为中学生成长过程中不可不读的励志读物。

关键词：阅读指导红色经典实践

感受美探究美创造美——谈初中散文教学中的读写结合

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中学课程辅导(教师通讯) 2013年第1期 45-46页

作者：汤雪晴安徽省合肥市皖安中学

阅读教学中最自然最实惠的语言实践方式就是读写结合。我们要努力地对课文进行发现,从而让读写活动的内容更加有趣、有味、有效。——余映潮散文是一种意蕴丰富、益智陶情、具有弹性力度的一种文体,不但是教材的首选,也成为中考、高考... 详细信息

阅读教学中最自然最实惠的语言实践方式就是读写结合。我们要努力地对课文进行发现,从而让读写活动的内容更加有趣、有味、有效。——余映潮散文是一种意蕴丰富、益智陶情、具有弹性力度的一种文体,不但是教材的首选,也成为中考、高考的最爱。长期以来,散文教学的内容为人所诟病,导致教学与考试的严重脱节,我觉得在源头上属于教学时与写

关键词：散文教学读写结合创造美济南的冬天余映潮

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春暖花开时

小溪流(少年号) 2005年第Z2期 66-67页

作者：汤雪晴湖南省岳阳市岳化一中云梦文学社

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初中生阅读儒家经典的实践方法

安徽教育科研 2019年第8期 30-31,3页

作者：汤雪晴合肥市五十中学西校

作为儒家文化最重要的载体,儒家经典蕴含着丰富而深刻的思想魅力。通过阅读儒家经典,可以提升学生的人文素养,弘扬中华民族传统文化。本文在课题研究的基础上,重点论述在实践方法上进行的有益尝试。

关键词：阅读儒家经典实践方法

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2023—2024年中国出版业发展报告

出版发行研究 2024年第7期 5-15,34页

作者：汤雪梅杨春兰北京印刷学院中国新闻出版研究院

2023年,出版业在新冠疫情防控转段后发展向好,人工智能、网络直播、学科建设等多种因素为出版业发展带来机遇与挑战。文章在对2023—2024年中国出版业发展概况进行梳理分析的基础上,对未来一段时间出版业发展趋势进行研判,并提出加快培... 详细信息

2023年,出版业在新冠疫情防控转段后发展向好,人工智能、网络直播、学科建设等多种因素为出版业发展带来机遇与挑战。文章在对2023—2024年中国出版业发展概况进行梳理分析的基础上,对未来一段时间出版业发展趋势进行研判,并提出加快培育出版新质生产力的对策建议,以期为出版强国建设贡献力量。

关键词：出版业发展概况趋势展望对策建议

同型半胱氨酸对血管内皮细胞核转录因子及细胞间黏附分子的影响

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中华老年心脑血管病杂志 2011年第6期13卷 554-556页

作者：孙文萍汤雪晴谢春香刘惠民宋天琦北华大学附属医院特需科吉林132011 成都军区总医院儿科吉林医药学院附属医院神经内科

目的研究同型半胱氨酸(Hcy)对脑微血管内皮细胞(BMEC)损伤后NF-κB及其下游调控因子细胞间黏附分子1(ICAM 1)的影响。方法通过培养大鼠BMEC,用1 mmol/L浓度的Hcy及CuSO_4μmol/L共同干预培养的BMEC,分别作用0、6、12和18h,观察不同时间... 详细信息

目的研究同型半胱氨酸(Hcy)对脑微血管内皮细胞(BMEC)损伤后NF-κB及其下游调控因子细胞间黏附分子1(ICAM 1)的影响。方法通过培养大鼠BMEC,用1 mmol/L浓度的Hcy及CuSO_4μmol/L共同干预培养的BMEC,分别作用0、6、12和18h,观察不同时间点细胞NF-κB p65及ICAM-1的表达。结果与0h比较,用Hcy干预6 h后,细胞开始出现ICAM-1蛋白表达,但差异无统计学意义(P>0.05),至1 2 h ICAM 1蛋白表达明显升高(P0.05)。结论 Hcy可以促进NF-κB的核转位,诱导ICAM-1的表达。

关键词：动脉粥样硬化高半胱氨酸内皮血管 NF-κB 细胞黏附分子危险因素

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早产儿严重皮内钙质沉着1例

中国实用儿科杂志 2014年第8期29卷 636-637页

作者：刘华君许红波刘文彬汤雪晴孙先琳成都军区总医院儿科四川成都610083

1临床资料患儿男,第1胎第1产,孕29周,因其母中央型前置胎盘、胎膜早破、出血性休克剖宫产娩出,出生体重1220 g,Apgar评分1 min为1分（心率1分）,5 min评分2分（心率1分、皮肤颜色1分）,10 min评分为4分（心率、呼吸、弹足底反应、皮肤... 详细信息

1临床资料患儿男,第1胎第1产,孕29周,因其母中央型前置胎盘、胎膜早破、出血性休克剖宫产娩出,出生体重1220 g,Apgar评分1 min为1分（心率1分）,5 min评分2分（心率1分、皮肤颜色1分）,10 min评分为4分（心率、呼吸、弹足底反应、皮肤颜色各1分）,于2012-11-28入院。

关键词：早产儿极低出生体重儿钙质沉着