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海栖热袍菌内切葡聚糖酶Cel12B与木聚糖酶XynA CBD结构域融合基因的构建、表达及融合酶性质分析

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微生物学报 2006年第5期46卷 726-729页

作者：李相前邵蔚蓝江南大学工业生物技术教育部重点实验室

海栖热袍菌内切葡聚糖酶Cel12B是极耐热胞外酶，氨基酸序列分析表明不含有纤维素结合结构域（CBD），对结晶纤维素无活性，但同样菌种来源的木聚糖酶XynA有催化结构域和纤维素结合结构城。用同样极耐热酶CBD区域和Cel12B融合构建重组质... 详细信息

海栖热袍菌内切葡聚糖酶Cel12B是极耐热胞外酶，氨基酸序列分析表明不含有纤维素结合结构域（CBD），对结晶纤维素无活性，但同样菌种来源的木聚糖酶XynA有催化结构域和纤维素结合结构城。用同样极耐热酶CBD区域和Cel12B融合构建重组质粒pET-20b—Cel12B—CBD，经诱导表达后，对结晶纤维素有活性，酶学特性研究表明：最适反应温度为100℃、最适pH为5．8、在pH4．5—7．0时酶活力稳定，90℃保温2h仍有87％的酶活。

关键词：海栖热袍菌纤维素结合域内切葡聚糖酶基因融合

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我的世界很小，有你刚刚好

巨大芽孢杆菌分子伴侣GroES和GroEL新基因的克隆及同源性分析

作者：七月蔚蓝

来源：南通市图书馆图书评论

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中国生物化学与分子生物学报 2007年第11期 971-974页

作者：鲍方名龚蕾邵蔚蓝南京师范大学微生物工程重点实验室

巨大芽孢杆菌作为革兰氏阳性细菌的一种,是良好的重组蛋白的表达宿主.本研究利用PCR技术从巨大芽孢杆菌基因组克隆出一条1.9Kb的基因片段.核酸序列分析结果表明,该片段全长1984bp,包含2个ORF,分别与芽孢杆菌来源的GroES和GroEL基因有高... 详细信息

巨大芽孢杆菌作为革兰氏阳性细菌的一种,是良好的重组蛋白的表达宿主.本研究利用PCR技术从巨大芽孢杆菌基因组克隆出一条1.9Kb的基因片段.核酸序列分析结果表明,该片段全长1984bp,包含2个ORF,分别与芽孢杆菌来源的GroES和GroEL基因有高度的相似性.氨基酸序列比对发现,GroES蛋白与枯草芽孢杆菌来源的GroES蛋白氨基酸序列同源性为91%,GroEL蛋白氨基酸序列同源性为90%.

关键词：巨大芽孢杆菌分子伴侣 GroES GroEL 基因克隆同源性分析

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热稳定性α-阿拉伯糖苷酶/木糖苷酶的纯化

食品与发酵工业 2003年第9期29卷 22-26页

作者：薛业敏毛忠贵邵蔚蓝江南大学工业生物技术教育部重点实验室

α 阿拉伯糖苷酶 /木糖苷酶对来源于被子植物的木聚糖类半纤维素的生物降解和转化是必不可少的。文中首次报道了国内对该酶的研究。α 阿拉伯糖苷酶 /木糖苷酶的基因工程菌在发酵罐中以LB为基质进行生长 ,以乳糖为诱导剂 ,所产生的α ... 详细信息

α 阿拉伯糖苷酶 /木糖苷酶对来源于被子植物的木聚糖类半纤维素的生物降解和转化是必不可少的。文中首次报道了国内对该酶的研究。α 阿拉伯糖苷酶 /木糖苷酶的基因工程菌在发酵罐中以LB为基质进行生长 ,以乳糖为诱导剂 ,所产生的α 阿拉伯糖苷酶 /木糖苷酶在 70℃热处理 3 0min后、经DEAE Sephacel阴离子柱层析、金属Ni2 + 的亲和层析等提纯步骤 ,达到了电泳纯 ,提纯倍数为 49 3倍 ,收率为 2 0 4%。SDS PAGE法测定α 阿拉伯糖苷酶/木糖苷酶的分子质量为 85ku 。

关键词： α-阿拉伯糖苷酶/木糖苷酶基因工程菌发酵纯化重组酶

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草菇cDNA削减文库的构建

南京师大学报（自然科学版） 2005年第4期28卷 73-76页

作者：李迅邵蔚蓝江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214036

介绍一种改进的利用差异杂交和定向插入构建全长cDNA削减文库的方法.分别以诱导和非诱导条件培养草菇菌丝,两者都提取总RNA并采用PolyATtract mRNA Isolation System III试剂盒快速提取mRNA,由PowerScriptTM Reverse Transcriptase将诱... 详细信息

介绍一种改进的利用差异杂交和定向插入构建全长cDNA削减文库的方法.分别以诱导和非诱导条件培养草菇菌丝,两者都提取总RNA并采用PolyATtract mRNA Isolation System III试剂盒快速提取mRNA,由PowerScriptTM Reverse Transcriptase将诱导菌丝提取的mRNA进一步逆转录成cDNA第一链,用得到的cDNA第一链和非诱导菌丝提取的mRNA进行杂交,将未杂交上的cDNA第一链洗脱浓缩后,用SMARTTM cDNA Library Construction 试剂盒构建成草菇cDNA削减文库.经检测:原始文库滴度为2.5×105 pfu/mL,重组率为93%,插入cDNA大小在0.5～4.0 kb之间,文库扩增后,文库滴度为1.1×109 pfu/mL,并从中克隆到了若干植物纤维降解酶.结果表明其简化了实验步骤,而且更有利于富集所需全长基因,是构建cDNA文库的一种有效改进.

关键词：滴度重组率差异杂交 PCR

嗜热厌氧乙醇杆菌组氨酸融合双活性乙醇脱氢酶的克隆、表达和酶学性质

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食品与生物技术学报 2006年第5期25卷 15-19页

作者：蒋宇邵蔚蓝江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡210046

乙醛脱氢酶和乙醇脱氢酶是嗜热厌氧乙醇菌Thermoanaerobacter ethanolicus乙醇代谢途径中的关键酶。根据高同源性的NADP(H)依赖型Ⅱ型乙醇脱氢酶(S-ADH)的序列设计引物,从***200基因组中PCR扩增出编码S-ADH的基因,插入带组氨酸标签的pET... 详细信息

乙醛脱氢酶和乙醇脱氢酶是嗜热厌氧乙醇菌Thermoanaerobacter ethanolicus乙醇代谢途径中的关键酶。根据高同源性的NADP(H)依赖型Ⅱ型乙醇脱氢酶(S-ADH)的序列设计引物,从***200基因组中PCR扩增出编码S-ADH的基因,插入带组氨酸标签的pET-20(b),测序获得基因大小为1 059 bp,并在大肠杆菌JM109(DE3)中表达。表达产物经Ni亲和柱提纯达电泳纯。带组氨酸标签的重组NADP(H)依赖型乙醇脱氢酶具乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶双活性,能将乙酰辅酶A转化成乙醇.带组氨酸标签的重组酶酶学性质为乙醛脱氢酶活性最适值为pH 8.4,最适温度70℃;乙醇脱氢酶活性正、逆反应分别最适pH 8.0,最适T 55℃;最适pH8.9,最适为T 60℃。以乙酰辅酶A(Aceyl-CoA)为底物,该酶的Km为3.32 mmol/L,Vmax为12.5μmol/(***)。***200中双活性S-ADH的首次发现,建立了该菌乙醇代谢途径中从乙酰辅酶A到的乙醇的另一条通路。

关键词：嗜热厌氧乙醇菌双活性乙醛脱氢酶乙醇脱氢酶

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极耐热内切葡聚糖酶Cel12B的高效表达

食品与发酵工业 2006年第2期32卷 1-3页

作者：李相前邵蔚蓝江南大学工业生物技术教育部重点实验室

海栖热袍菌 Thermotoga maritima 是嗜极端高温的厌氧细菌,其产生的极耐热葡聚糖酶具有很好的热稳定性和潜在的可观工业用途。但嗜高温菌基因在大肠杆菌中表达水平较低,T．m 内切葡聚糖酶 Cel12B 基因带有信号肽,应用在线预测分析,通过 ... 详细信息

海栖热袍菌 Thermotoga maritima 是嗜极端高温的厌氧细菌,其产生的极耐热葡聚糖酶具有很好的热稳定性和潜在的可观工业用途。但嗜高温菌基因在大肠杆菌中表达水平较低,T．m 内切葡聚糖酶 Cel12B 基因带有信号肽,应用在线预测分析,通过 PCR 方法分别克隆 Cel12B 完整基因和不带信号肽基因至 pET-20b 载体, 构建重组质粒 pET-20b-Cel12B 和 pET-20b-Cel12B-WS,转化至大肠杆菌 JM109DE3诱导表达后,分析酶活,结果表明去除信号肽重组菌单位酶活是未去除信号肽重组菌11倍多。

关键词：内切葡聚糖酶海栖热袍菌信号肽表达