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基于CRISPR/cas9的BRAF V600E突变质控品研究

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基于CRISPR/cas9的BRAF V600E突变质控品研究

作者：毛玉环湖南师范大学

学位级别：硕士

目的:BRAFV600E突变与结直肠癌、恶性黑色素瘤及甲状腺乳头状癌等肿瘤的发生、发展密切相关。转移性结直肠癌患者中BRAF V600E基因突变可以提示EGFR抑制剂耐药;转移性黑色素瘤及非小细胞肺癌患者中BRAFV600E突变,可以指导BRAF抑制剂的... 详细信息

目的:BRAFV600E突变与结直肠癌、恶性黑色素瘤及甲状腺乳头状癌等肿瘤的发生、发展密切相关。转移性结直肠癌患者中BRAF V600E基因突变可以提示EGFR抑制剂耐药;转移性黑色素瘤及非小细胞肺癌患者中BRAFV600E突变,可以指导BRAF抑制剂的使用。BRAF V600E突变基因的准确检测对相关疾病的诊断及指导靶向治 ’疗至关重要,但是BRAF V600E突变检测方法的敏感性、标本类型等多种因素影响实验室检测结果的一致性与准确性,因此建立完整的质量评价体系势在必行。但是目前还没有相关的质控物质,尤其是可应用于不同类型标本及检测方法的质控物。本研究旨在利用’CRISPR/Cas9基因编辑技术建立一种可应用于不同类型标本质控品制备的BRAF V600E突变阳性的细胞系。方法:CRISPR/Cas9是近年发展起来的一种简便高效的基因编辑技术。本研究设计了 3组不同的sgRNA,并将其分别与pSpCas9(BB)-2A-GFP质粒连接构建重组表达载体,然后将重组载体与同源模板同时转染HEK293T细胞。采用T7EI酶切分析评估3组sgRNA的切割活性,ARMS-PCR检测BRAFV600E突变。通过流式分选单个细胞进行单克隆培养,最后筛选出BRAF V600E突变阳性单克隆细胞株并进行Sanger测序确证。结果:本研究成功构建了用于转染HEK293T细胞的重组质粒,设计的3组sgRNA都呈现出较高的转染效率及切割活性,最终筛选并确证得到了一株BRAF V600E突变阳性细胞系。结论:本研究利用CRISPR/Cas9技术对HEK293T细胞进行精确编辑,成功得到了 BRAF V600E突变阳性细胞系,该细胞系可满足不同类型标本质控物质的制备,为肿瘤突变检测质控品的制备提供了一个新的思路与方法。

关键词： BRAF V600E突变结直肠癌 CRISPR/Cas9 质控物质循环游离DNA

循环游离DNA检测在结直肠癌诊治中应用的研究进展

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山东医药 2017年第21期57卷 110-112页

作者：李建英谭黎明毛玉环张晓湖南省人民医院长沙410001

循环游离DNA(ccf-DNA)是指存在于血液、游离于细胞之外的DNA片段。ccf-DNA检测正逐渐成为肿瘤筛查、早期诊断、预后评估以及抗癌治疗有效性监测的重要方法。通过相对无创方法获得的ccf-DNA可代替通过有创手段获得的结直肠癌(CRC)活检标... 详细信息

循环游离DNA(ccf-DNA)是指存在于血液、游离于细胞之外的DNA片段。ccf-DNA检测正逐渐成为肿瘤筛查、早期诊断、预后评估以及抗癌治疗有效性监测的重要方法。通过相对无创方法获得的ccf-DNA可代替通过有创手段获得的结直肠癌(CRC)活检标本。ccf-DNA作为一种无创潜在肿瘤标志物在CRC早期诊断、疾病进展、疗效监测中有较高的应用价值。

关键词：结直肠肿瘤循环游离DNA 肿瘤标志物

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企业税收筹划问题研究

纳税 2017年第26期 5-5页

作者：毛玉环中国邮政集团公司黑龙江省分公司

企业的目标就是实现经济利益最大化,在企业发展的过程中应该坚持依法纳税,依法纳税是企业应该履行的义务和责任。企业在进行税收筹划的时候,应该在相关法律法规政策的允许范围内进行,同时可以根据企业的实际发展情况谋取合适的纳税收入... 详细信息

企业的目标就是实现经济利益最大化,在企业发展的过程中应该坚持依法纳税,依法纳税是企业应该履行的义务和责任。企业在进行税收筹划的时候,应该在相关法律法规政策的允许范围内进行,同时可以根据企业的实际发展情况谋取合适的纳税收入。如果要想从根本上科学、合理地使用税收政策的法规资源,首先就应该做好税收筹划工作,在税收中尽量地减少税收成本。本文以企业税收为切入点,积极探索企业税收筹划问题的解决方案。

关键词：企业经济管理税收筹划问题对策

基于问题驱动的高中数学单元复习教学设计研究

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中文科技期刊数据库（全文版）教育科学 2022年第4期 38-41页

作者：毛玉环双流艺体中学四川成都610200

“双新”背景下,新高考对素养和能力的要求越来越高,学习难度也越来越大,对于高中生来说,最难学的学科之一就是数学。数学具有高度的抽象性和严密的逻辑性,因此对于学生而言,学习方法是最为重要的,对于教育工作者而言,如何引导学生主动... 详细信息

“双新”背景下,新高考对素养和能力的要求越来越高,学习难度也越来越大,对于高中生来说,最难学的学科之一就是数学。数学具有高度的抽象性和严密的逻辑性,因此对于学生而言,学习方法是最为重要的,对于教育工作者而言,如何引导学生主动学习数学才是最终目标,本文立足于问题驱动的教学方法,在高中数学单元复习的教学设计中进行路径探索。

关键词：高中数学问题驱动教学设计

新课程标准化学实验基础部分电子素材库开发探研

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成都教育学院学报 2005年第12期19卷 106-107页

作者：顾静毛玉环冉鸣四川师范大学化学与材料科学学院四川成都610066

新课程电子素材库开发势在必行,文章就电子素材库设计的意义、策略和实现方法及其与探究式教学的结合进行探讨,并以化学1中的主题2《化学实验基础》为例阐述了如何设计开发出配套的多媒体标准课程范例和相关电子素材,从而建立一个基于... 详细信息

新课程电子素材库开发势在必行,文章就电子素材库设计的意义、策略和实现方法及其与探究式教学的结合进行探讨,并以化学1中的主题2《化学实验基础》为例阐述了如何设计开发出配套的多媒体标准课程范例和相关电子素材,从而建立一个基于化学新课程标准的电子素材库。

关键词：新课程化学实验基础电子素材库

中学化学新教材《物质结构基础》的电子素材开发

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成都教育学院学报 2005年第12期19卷 108-109页

作者：毛玉环顾静冉鸣四川师范大学化学与材料科学学院四川成都610066

新课程改革以化学课程标准替代了传统的化学教学大纲,相应地,与现行课程教材配套的电子素材与新课程标准下的教材所要求的电子素材必然也存在着差异。所以,必须开发新的电子资源和素材。文章主要论述了基于中学化学新教材的电子素材开... 详细信息

新课程改革以化学课程标准替代了传统的化学教学大纲,相应地,与现行课程教材配套的电子素材与新课程标准下的教材所要求的电子素材必然也存在着差异。所以,必须开发新的电子资源和素材。文章主要论述了基于中学化学新教材的电子素材开发的意义,并对《物质结构基础》这一主题的电子素材开发作了一些探讨。

关键词：新课程物质结构基础电子素材

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煤层气区块优选方法决策系统的设计与研究

中国煤层气 2011年第5期8卷 44-46页

作者：毛玉环王振翀姚尧季雨中国矿业大学(北京)机电与信息工程学院北京100083

本文针对煤层气区块优选工作量大,决策复杂的现状,设计了一种煤层气区块优选智能决策系统。通过对基础数据和业务数据的智能分析,借助决策树技术和模糊综合评价方法,实现了对煤层气区块划分的优化选择决策,同时运用可视化的人机交互,完... 详细信息

本文针对煤层气区块优选工作量大,决策复杂的现状,设计了一种煤层气区块优选智能决策系统。通过对基础数据和业务数据的智能分析,借助决策树技术和模糊综合评价方法,实现了对煤层气区块划分的优化选择决策,同时运用可视化的人机交互,完成了数据决策分析和决策结果管理。

关键词：区块优选决策系统决策树模糊综合评价

医学检验实验室开展体外诊断试剂临床试验的问题与管理分析

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中华预防医学杂志 2024年第9期58卷 1473-1477页

作者：毛玉环曹天然陈立华胡金伟周林颖马琼卉宋小云袁鲲中南大学湘雅医学院附属长沙医院(长沙市第一医院)检验科长沙410005 中南大学湘雅医学院附属长沙医院(长沙市第一医院)临床试验机构办公室长沙410005 中南大学湘雅医学院附属长沙医院(长沙市第一医院)科教科长沙410005 中南大学湘雅医学院附属长沙医院(长沙市第一医院)院办公室长沙410005

临床试验是评价体外诊断试剂安全性及有效性的重要方法,是产品注册审评审批的关键依据。为加强体外诊断试剂临床试验的管理,国家药品监督管理局及相关部门从监管层面制定了系列法规,并要求申办方及临床试验机构建立体外诊断试剂临床试... 详细信息

临床试验是评价体外诊断试剂安全性及有效性的重要方法,是产品注册审评审批的关键依据。为加强体外诊断试剂临床试验的管理,国家药品监督管理局及相关部门从监管层面制定了系列法规,并要求申办方及临床试验机构建立体外诊断试剂临床试验的质量管理体系。医学检验实验室是医疗机构体外诊断试剂临床试验的主要承接部门与实施者,近年随着体外诊断产业的迅速发展,医学检验实验室开展的体外诊断试剂临床试验项目与日增多;但目前较少有从研究者角度对于体外诊断试剂临床试验开展方面的探讨。所以,本文阐释了体外诊断试剂临床试验的特点,分析了目前医学检验实验室开展体外诊断试剂临床试验存在的问题与难点,并介绍本实验室在管理方面的经验;为暂未开展或已开展体外诊断试剂临床试验的医学检验实验室提供参考,以提高临床试验的开展质量与效率。

关键词：体外诊断试剂临床试验药物(医疗器械)临床试验机构医学检验实验室

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基于GIS协同的测绘协作生产系统研究

黑龙江工程学院学报 2022年第1期36卷 14-19页

作者：陈顺曾微波毛玉环刘文镇滁州学院地理信息与旅游学院安徽滁州239000

针对传统测绘内外业分离的作业模式带来工作效率低下、返工率高、作业进度难以把控等诸多问题,以多任务协同理论为基础,通过合理划分GIS操作粒度,结合XML可拓展性、开放性等特点,实现GIS操作语义信息的规范化封装与消息传输。在此基础... 详细信息

针对传统测绘内外业分离的作业模式带来工作效率低下、返工率高、作业进度难以把控等诸多问题,以多任务协同理论为基础,通过合理划分GIS操作粒度,结合XML可拓展性、开放性等特点,实现GIS操作语义信息的规范化封装与消息传输。在此基础上开发优先权分配与并发控制算法解决协同操作过程中可能产生的冲突问题,并利用ArcGIS Engine构建测绘协同内外业一体化作业平台,形成一种分布式的作业模式,大幅度降低测绘项目全过程实时监管的投入,实现大规模内外业协同测绘作业,显著提升了测绘内外业工作效率与成果质量。

关键词：语义共享 ArcGIS Engine XML GIS协同并发处理

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